蕙兰ISSR-PCR反应体系的建立和优化(英文)

[目的]以蕙兰(Cymbidium faberi Rolfe)基因组DNA为模板,对影响ISSR-PCR扩增结果的因素进行筛选和优化,建立适合蕙兰的ISSR-PCR的最佳反应体系。[方法]利用改良的CTAB法提取蕙兰基因组DNA,并对影响ISSR-PCR扩增结果的因素进行优化。[结果]获得了高质量的蕙兰基因组DNA并建立了最适的蕙兰ISSR-PCR体系(25μl),即2.5μl10×PCRbuffer,2.0mmol/LMgCl2,60ng模板DNA,160μmol/LdNTPs,1.25UTaqDNA聚合酶,0.4μmol/L引物,双蒸水15.85μl;最佳扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性30s,复性温度比引物的Tm值低2～3℃,30s,72℃延伸50s,40个循环;72℃延伸7min。[结论]该优化体系的建立可为今后利用ISSR标记技术进行蕙兰遗传多样性研究提供依据。

江西主要山脉野生蕙兰的遗传结构与分化

蕙兰为极具潜力的观赏以及香花植物资源,研究其遗传结构对蕙兰资源保护具有一定的指导意义。采用ISSR分子标记对江西省5个山脉分布的16个野生蕙兰(Cymbidium faberi Rolfe)居群和武夷山脉邵武市的1个居群进行遗传多样性与遗传结构研究,结果表明:12条引物共扩增得到142条谱带,其中多样性条带129条,多态性条带百分率为90.85%。POPGENE软件分析结果表明,蕙兰物种水平上的期望杂合度(He)为0.289 2,Shannon指数(I)为0.439 3,居群间的期望杂合度为(He)为0.188 6,Shannon指数(I)为0.286 5,总体遗传分化系数(FST)为0.348 1,基因流(Nm)为0.936 6,表明江西省分布的野生蕙兰资源在物种和居群的水平上均具有较高的遗传多样性。基于ISSR分子标记数据的UPGMA聚类和STRUCTURE群体遗传结构分析表明,蕙兰居群并没有呈现出按照山脉分布的特点,各山脉间蕙兰居群基因交流有限,17个蕙兰群体最有可能来自3个基因库。