养殖废水中抗生素的植物修复研究进展

养殖废水中抗生素是一类新型的有机污染物,其中以四环素类抗生素最为典型。这种污染物正对人类健康和水生生态系统安全产生持久的、潜在的威胁。本文主要介绍了养殖废水中抗生素的污染现状、危害及修复方法,着重综述了植物修复技术在水体抗生素污染去除中的作用、影响因素及机理等方面的研究进展。并对今后有关养殖废水中抗生素的植物修复研究进行了展望。

miR-218表达水平与宫颈癌侵袭转移及预后的关系

目的探讨miR-218与宫颈癌侵袭转移和不良预后因素之间的关系。方法用qRT-PCR的方法检测112例宫颈癌患者和21例正常对照的宫颈组织和外周血中miR-218的表达水平,所得数据结合临床资料进行相关分析。结果 miR-218在宫颈癌组织的表达水平明显低于宫颈正常上皮组织,差异有统计学意义(P<0.001)。miR-218的表达水平与宫颈癌FIGO分期、淋巴结转移、深间质浸润、阴道壁累及、脉管浸润有关。结论miR-218在宫颈癌组织中表达下调,且与宫颈癌侵袭转移和不良预后因素密切相关,提示miR-218在宫颈癌的侵袭转移机制中发挥了重要作用。

血培养常见病原菌菌群分布及耐药性分析

目的了解武汉市中心医院2007年7月至2009年9月血培养病原菌菌群分布及常见致病菌的耐药情况,为临床合理应用抗菌药物提供参考。方法采用美国BD公司BACTEC9050全自动血培养仪进行培养检测,分离出的致病菌用法国生物梅里埃公司API鉴定系统进行鉴定,药敏试验采用纸片扩散法,以2007版美国临床实验室标准化研究所标准对药敏试验结果进行判定,运用WHONET5.4软件进行分析。结果 2256例标本共分离出病原菌269株,血培养阳性率11.9%,检出革兰阳性菌129株(47.96%);革兰阴性菌116株(43.12%);真菌24株(8.92%)。主要致病革兰阳性菌对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺100%敏感,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对亚胺培南、美罗培南100%敏感,铜绿假单胞菌和不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦较敏感。结论武汉市中心医院败血症的病原菌以条件致病菌为主,革兰阳性病原菌的分离率略高于革兰阴性菌,以葡萄球菌居多。病原菌的耐药情况严重,应及时监测病原菌变化及耐药趋势,指导临床用药。

Cu^(2+)对凤眼莲根系吸附四环素的影响及机理

以凤眼莲根系为生物吸附材料,通过批吸附平衡实验,考察Cu^(2+)共存条件下凤眼莲根系吸附四环素(tetracycline,TC)的动力学特性和吸附等温线,并结合傅里叶红外光谱(Fourier infrared spectroscopy,FTIR)和基团屏蔽技术分析Cu^(2+)对凤眼莲根系吸附TC特征的影响及机理。结果表明:共吸附动力学和吸附热力学分别符合准二级动力学模型和Freundlich等温吸附模型。随着共存Cu^(2+)浓度的增加,凤眼莲根系对TC的吸附量和去除率也逐渐增大。凤眼莲根系表面羧基、氨基经化学屏蔽后,对TC的吸附量均降低了20%~30%;结合FTIR技术确定Cu^(2+)通过与凤眼莲根系表面的活性官能团(羟基、羧基和氨基以及芳环结构等)发生相互作用,在根系与TC之间形成架桥,从而促进了根系对TC的吸附。

光学麦克风封装材料相容性试验

为确保光学麦克风在电气设备内部应用的安全可靠性,文中选定聚氨酯、聚四氟乙烯、环氧树脂、聚醚醚酮和酚醛树脂作为封装材料,进行光学麦克风与电气设备相关的环境相容性试验,并采用扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)和傅里叶变换红外(Fourier transform infrared,FTIR)光谱仪对试验前后的材料性能进行检测。结果表明:聚氨酯表面易浸润变压器油且有明显颜色变化,不适用于油浸式变压器,但可用于水听器、空气和常温环境中;聚四氟乙烯与变压器油的相容性较好,可用于油浸式变压器、气体绝缘开关设备(gas insulated switchgear,GIS)和温度变化较大的场景;其余材料与电气设备的相容性不佳,适用性有待进一步研究。文中提出的封装材料与环境相容性试验的检测方法可为光学麦克风封装材料选型提供有益借鉴,具有一定的工程实用价值。

脂代谢通路对鸡雄性生殖细胞分化的调控机制

【目的】探索家鸡雄性生殖细胞分化过程中脂代谢相关基因以及信号通路的调控机制,以期为完善体外诱导体系提供依据。【方法】采用流式细胞分选法获得纯度较高的胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)、原始生殖细胞(primitive germ cells,PGC)和精原干细胞(spermatogonial stem cell,SSC),提取细胞总RNA。利用RNA-seq高通量分析方法对这三种细胞进行转录组水平测序,进行GO(Gene ontology)分析和KEGG通路富集,寻找脂代谢相关基因以及信号通路;并利用脂代谢--视黄醇代谢通路终产物视黄酸(retinoic acid,RA)以及抑制剂苯磺酰异羟肟酸(piloty’s acid)在体外诱导ESC向雄性生殖细胞分化和体外鸡胚注射后孵化,q RT-PCR(quantitative real time PCR)检测视黄醇代谢通路上差异基因的表达变化,与RNA-seq结果进行比较分析同时检测雄性生殖细胞标记基因的变化情况。【结果】GO功能显著性富集和Pathway显著性富集分析结果发现:在ESC向SSC分化过程中共存在328个基因持续参与脂代谢调控,富集到27条脂代谢通路中,包括视黄醇代谢、初级胆汁酸的合成、甾类激素的生物合成、脂肪酸代谢、甘油酯代谢以及类固醇的生物合成等通路。在视黄醇代谢通路中ADH5在PGC中特异表达,ALDH1A1在整个发育过程中持续上调,ADH5和ALDH1A1在细胞中参与视黄酸的合成;CYP26b1在整个发育过程中持续上调,参与视黄酸的降解过程;RA体外诱导ESC向SSC方向诱导试验结果表明ADH5、ALDH1A1和CYP26b1家族基因在体外RA诱导过程中变化与体内分化过程一致,RA诱导组产生的SSC样细胞显著高于控制组和Piloty’s Acid+RA组。鸡胚注射抑制剂试验结果表明视黄醇通路被抑制后孵化至18d后SSC细胞表面特异标记基因integrinα6和integrinβ1的表达水平显著的低于正常的孵化组(CON)和阴性对照组(BLANK)【结论】脂代谢--视黄醇代谢通路在家鸡雄性生殖细胞的分化过程中起重要作用,体外利用视黄醇代谢通路终产物RA进行诱导时第2天出现类胚体,第4、6天类胚体逐渐增大,第8天开始裂解,在第10天出现SSC样细胞,而在诱导过程中抑制视黄醇通路信号后则会降低SSC样细胞的产生,而在体外孵化过程中视黄醇通路抑制后也能影响SSC细胞的产生。

GM1对PC12细胞缺氧缺糖损伤中HO-1表达的影响及PI-3K/Akt通路在此过程中的作用

目的:探讨PC12细胞缺氧缺糖损伤中,单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)对血红素加氧酶(HO-1)表达的影响,并研究PI-3K/Akt通路在此过程中的作用。方法:用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)消除培养基中的氧合并培养基质缺糖制造PC12细胞缺氧缺糖损伤(OGD)模型,用RT-PCR和Western blot方法检测不同剂量(25-100μmol/L)GM1和PI-3K抑制剂LY294002对缺氧缺糖损伤时PC12细胞HO-1mRNA及蛋白表达的影响。结果:与对照组和单纯缺氧缺糖组相比,GM1可显著上调缺氧缺糖PC12细胞的HO-1mRNA和蛋白表达,且两者呈明显的剂量依赖关系;PC12细胞经LY294002预处理后,GM1上调HO-1mRNA和蛋白表达的作用均受到抑制。结论:GM1可上调缺氧缺糖损伤时PC12细胞HO-1mRNA和蛋白表达,PI-3K/Akt通路在此过程中发挥了一定的信号转导作用。

不同水平的亚硒酸钠对公鸡组织硒沉积及血液抗氧化能力的影响

试验通过在公鸡日粮中添加不同水平亚硒酸钠,研究硒在公鸡组织中的沉积和对血液抗氧化能力的影响,为亚硒酸钠在鸡养殖业中的应用提供参考依据。选取80只体重接近、健康无疾病的海兰白成年公鸡,随机分成4组,每组20只,分别在日粮中添加0、0.5、1、2 mg/kg的亚硒酸钠。试验结束时,采集肝脏、肾脏、心、肺、脾、睾丸以及血液,测定硒含量,并分析血液中的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC)等。结果表明:组织和血液中硒含量随日粮硒含量的增加而升高,除心肌组织以外,各组之间差异显著(P<0.05);血液中的SOD、T-AOC活性随着日粮硒含量的增加而逐渐增加,且各组之间差异显著(P<0.05);适量的硒元素可以提高GSH-Px的活性,但过量的硒元素又会增加脂质过氧化反应,造成MDA含量升高,从而对组织细胞造成不良影响。结果提示:适量的硒可以提高鸡组织和血液中的硒含量,也可以提高血液的抗氧化能力,且提倡适宜的浓度为0.5 mg/kg。

5-Azadc和TSA对鸡Nanog基因启动活性及ESC多能性维持的影响

旨在克隆如皋黄鸡Nanog基因启动子,并构建含有双荧光素酶报告基因的表达载体进行启动子活性分析,找出该基因启动子的核心调控区;探索甲基化抑制剂5-Azadc(5-Aza-2′-deoxycytidine)或曲古抑菌素(Trichostatin A,TSA)对Nanog基因启动活性及其ESC体外培养条件下多能性维持的影响,为初步阐明Nanog基因的表达调控机制提供理论依据。PCR扩增Nanog基因不同长度片段的启动子序列,定向克隆至pGL3-basic载体和pEGFP-N1构建重组载体;将重组载体转染DF-1细胞后,48h收集蛋白,采用双荧光素酶报告基因检测系统测定其转录活性,确定基本转录调控区;将重组载体转染DF-1细胞后添加5-Azadc或TSA对Nanog基因进行诱导表达,并通过双荧光素酶报告基因检测系统,分析其对Nanog基因启动子活性的影响。选取生长至第3代的ESC,培养基中添加最适浓度的5-Azadc和TSA,每隔两天观察细胞,分析其对ESC体外多能性维持的影响,并对诱导至第10天的细胞进行间接免疫荧光检测。结果表明,成功构建3个片段的双荧光素酶报告基因表达载体;双荧光素酶活性检测结果显示,pGL3/1967活性最强;分别添加或者联合添加5-Azadc和TSA均可使Nanog基因的转录活性增强;5-Azadc和TSA诱导对ESC体外培养条件下多能性维持的影响结果显示,诱导6d后,对照组细胞大量分化,细胞克隆无法维持,而5-Azadc和TSA诱导组克隆明显,5-Azadc+TSA联合诱导组细胞克隆数量显著多于对照组;诱导至第10天,对照组细胞完全分化,没有细胞克隆,而诱导组存在大量细胞克隆,联合诱导组克隆数量显著多于其他两组;SSEA-1间接免疫荧光结果显示,对照组没有明显的ESC克隆,而5-Azadc组和联合诱导组细胞克隆明显,综上表明,5-Azadc和TSA可有效地通过提高Nanog基因的表达而维持鸡ESC在体外培养过程中的多能性。

蛋白质代谢通路对鸡雄性生殖细胞分化的调控

【目的】探究蛋白质代谢在鸡雄性生殖细胞分化过程中的作用机制,为完善鸡胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)体外向雄性生殖细胞诱导分化体系研究提供依据。【方法】采用流式分选的方法获取高纯度的ESC、原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)和精原干细胞(spermatogonia stem cell,SSCs),分别提取细胞的总RNA,采用RNA-Seq方法对3种细胞的转录本进行深度测序,然后进行WEGO(web gene ontology)和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路富集分析,筛选出鸡雄性生殖细胞分化过程中参与蛋白质代谢的关键通路及其关键基因,RT-q PCR(Real time Quantitative PCR)检测部分关键差异基因的表达变化,并与RNA-Seq(RNA sequencing)结果进行比较分析,同时分别从体内和体外水平对关键基因NOS2进行抑制,观察各分组不同天数的细胞形态变化及检测NOS2和C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因表达变化情况。【结果】在雄性生殖细胞分化的整个阶段,有697个差异基因参与生物代谢,显著富集于精氨酸-脯氨酸代谢通路、酪氨酸代谢通路以及色氨酸代谢通路,在这3条通路上筛选出NOS2、FAH和IDO等关键性基因,这些基因的在ESCs向SSCs分化过程中表达变化趋势与其在RNA-Seq中的结果一致。体内抑制NOS2基因后,NOS2及C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因在空白组和对照组之间无显著性的差异,而在抑制剂组中,NOS2及C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因的m RNA表达量均出现了降低;而体外抑制NOS2基因后,对照组中的ESCs在2、4、6、8和10d内细胞不断增殖,但是未出现类胚体;RA诱导组中,2d出现小的类胚体,4d类胚体增大,且数量增多,6d类胚体边缘开始出现破裂,8d类胚体解体,10d出现类精原样细胞;抑制剂组中,ESCs在2、4、6、8和10d内无类胚体出现,且相较于对照组细胞增殖缓慢;RA+抑制剂组中,2和4d内无类胚体出现,细胞增殖缓慢,6d出现小的类胚体,8d类胚体数量少量增多,且体积稍显增大,10d类胚体开始裂解。并且经过抑制剂的抑制后,NOS2及C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因的表达量在RA诱导组、抑制剂组和RA+抑制剂组中相对于对照组均呈显著性或极显著性的下调趋势。【结论】基于RNA-Seq技术及生物信息学方法筛选出ESCs向雄性生殖细胞分化过程中精氨酸-脯氨酸代谢通路及关键基因NOS2的基础上,通过对NOS2基因在鸡体内和体外的抑制,发现NOS2在被抑制后,ESCs向雄性生殖细胞分化的过程受到抑制。说明了精氨酸-脯氨酸代谢通路及关键基因NOS2对ESCs向雄性生殖细胞分化过程中起到重要的调节作用。

单唾液酸神经节苷脂对2,5-己二酮诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的研究单唾液酸神经节苷脂(GM1)对2,5-己二酮(2,5-HD)诱导PC12细胞凋亡的保护作用,并探讨其作用机制。方法以PC12细胞为神经元的细胞模型,2,5-HD、GM1及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)抑制剂LY294002单独或联合处理细胞,MTT法检测细胞存活率,Giemsa染色法观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,免疫印迹检测蛋白激酶B(Akt)和磷酸化-Akt(P-Akt)蛋白的表达。结果GM1可以有效地改善凋亡引起的细胞形态学改变,提高细胞存活率(P<0.05),最高可提高36.35%;降低DNA断裂程度,减少凋亡率(P<0.001),最明显可降低69.36%。GM1能够促进Akt磷酸化,LY294002可以阻断这种作用。结论GM1对2,5-HD诱导的PC12细胞凋亡有保护作用。该保护作用可能是通过启动PI3-K信号通路,激活Akt及其下游信号而产生的。

274株呼吸道假丝酵母菌感染的菌种鉴定及耐药性分析

目的了解本院呼吸道假丝酵母菌的菌种分布及药敏结果,为临床治疗假丝酵母菌感染提供依据。方法采用科玛嘉显色培养基及法国生物-梅里埃的API 20 C AUX假丝酵母菌鉴定板和ATB 3 Fungus假丝酵母菌药敏板进行假丝酵母菌的鉴定和药敏检测。结果呼吸道假丝酵母菌感染以白色假丝酵母菌为主(74.8)%;其次为热带假丝酵母菌(13.5%)、光滑假丝酵母菌(8.8%)。药敏结果显示对5-氟胞嘧啶、两性霉素B、伏立康唑的敏感率较高。结论假丝酵母菌的菌株鉴定和药敏试验为临床合理使用抗真菌药物提供了可靠依据。

性激素促进鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化

试验分别探讨了睾酮和FSH诱导鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)向雄性生殖细胞分化的作用效果。首先筛选睾酮和卵泡刺激素(FSH)的适宜诱导浓度,在RA和支持细胞的诱导基础上分别添加适宜浓度的睾酮和FSH对传至2代的ESCs进行诱导,通过形态学观察、实时荧光定量PCR及免疫细胞化学对诱导结果进行检测。结果显示:睾酮和FSH的适宜诱导浓度分别为15 ng/m L和25 ng/m L,单独使用睾酮和FSH诱导均未出现类SSCs样细胞;二者联合支持细胞和RA诱导,诱导2 d出现类胚体,随后类胚体体积逐渐变大,诱导12 d类胚体解体出现类SSC样细胞;实时荧光定量PCR结果显示,睾酮和FSH分别与支持细胞和RA共同诱导组中,Stra8表达量持续上调,integrinβ1、Dazl表达量显著上调,ESCs标记基因Nanog、Sox2表达量均呈持续下降趋势;睾酮的多因素诱导组中,Dazl的表达量明显高于RA和支持细胞诱导组;而FSH的多因素诱导组中Stra8的表达量相对于RA和支持细胞诱导组也显著升高。结果表明睾酮和FSH单独诱导不能引起ESCs向雄性生殖细胞分化,但可以促进支持细胞和RA诱导ESCs向雄性生殖细胞分化的作用效果,该结果为进一步研究雄性生殖细胞的形成和调控机制提供理论基础。

碎砖骨料再生混凝土的抗冻性能试验研究

试验采用碎砖替代30%的粗骨料石子,制备碎砖骨料再生混凝土,通过与天然混凝土在冻融环境下的对比试验,研究碎砖骨料再生混凝土的抗冻性。试验结果表明:按C40强度等级设计30%取代率的碎砖骨料再生混凝土的立方体抗压强度基本接近设计强度;30%取代率的碎砖骨料再生混凝土的抗冻等级也可以达到D300。为碎砖骨料再生混凝土在工程中的应用提供了参考数据。

盐酸浸出高钛渣收尘灰提钛研究

攀枝花——西昌地区有许多钢厂,在还原铁的过程中,钛以高钛渣的形式富集,同时产生大量的尘灰从高炉飘出。尘灰中的钛含量相当可观,如果不收集起来加以充分利用,会造成资源浪费,这些尘灰飘到大气中,造成的环境污染也比较大。文章利用盐酸浸出高钛渣尘灰,实现高钛渣收尘灰综合利用,盐酸可以实现循环利用,大大减少"三废"量。实验主要研究了盐酸浓度,酸灰比,酸浸温度,酸浸时间对酸浸灰中钛含量的影响。结果表明:不经还原直接酸浸,需要浓酸才能溶解尘灰中的Fe2O3,当盐酸浓度为12 mol/L,酸灰比为1.5,酸浸温度为100℃,酸浸时间为5 h,酸浸灰中的钛含量可以达到39.71%。

BALB/c小鼠作为单纯疱疹病毒1型感染模型的免疫学分析

在单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)小鼠感染及其相关研究中,临床病理和免疫学指标对其分析具有重要技术意义。本研究观察了HSV-1在不同条件下感染BALB/c小鼠后的多个免疫学指标,包括外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)群体中树突细胞比例及功能、血清中和抗体水平、PBMC中HSV-1抗原特异性T细胞水平,以及潜伏感染期小鼠神经组织中CD8^+T细胞浸润情况。结果显示,HSV-1毒株Mckrae、17^+以角膜及滴鼻途径感染3周龄及6周龄BALB/c小鼠后,小鼠PBMC中树突细胞数量增加,并显示出刺激病毒抗原特异性T细胞增殖的能力。病毒感染后35d,小鼠PBMC中未检测到白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)^+抗原特异性T细胞,但能检测到低水平的γ干扰素(interferonγ,IFN-γ)^+抗原特异性T细胞;小鼠血清中未检测到或仅能检测到低水平的中和抗体。HSV-1以皮下及足垫注射途径感染BALB/c小鼠90d后,足垫感染途径较皮下感染诱导出更高水平的血清中和抗体,PBMC中可检测到IL-4^+及IFN-γ^+抗原特异性T细胞,但不同毒株及小鼠周龄之间出现T细胞反应程度差异。组织病理学结果表明,各组小鼠三叉神经组织中均有CD8^+T细胞浸润。这些结果提示,不同HSV-1毒株以不同途径感染不同周龄BALB/c小鼠后,均可刺激树突细胞成熟及呈递病毒抗原,但血清中和抗体及PBMC中病毒抗原特异性T细胞水平在不同毒株、感染途径及小鼠周龄之间有差异。

碎砖骨料再生混凝土收缩率试验研究

采用非接触法对碎砖骨料替代率为0、30%、40%、50%混凝土进行早期收缩测试,研究分析不同替代率混凝土的收缩率。实验结果表明:混凝土早期收缩的收缩率与碎砖骨料替代率有直接关系,碎砖骨料替代率越高,混凝土收缩率越低。

日粮中添加不同水平亚硒酸钠对公鸡睾丸组织细胞结构的影响

通过在日粮中添加亚硒酸钠,研究不同水平无机硒对公鸡睾丸组织细胞结构的影响。选取80只体重接近、健康无疾病的海兰白成年公鸡,随机分成4组,每组20只鸡。对照组饲以基础日粮;硒处理组分别在基础日粮中添加0.5、1和2 mg/kg的亚硒酸钠。H-E染色的结果表明:0.5 mg/kg组公鸡睾丸发育最好,各级生精细胞数量最多;1 mg/kg组睾丸各级生精细胞较多,但细胞间存在明显间隙,成熟精子较少;而2 mg/kg组睾丸组织结构已经发生一定程度的损伤,各级精细胞数量都较少。试验说明,日粮添加适宜浓度的硒可促进公鸡睾丸的发育,而较高的硒添加量会使睾丸发育不良。

pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞建系的研究

本研究旨在通过构建重组质粒pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞(Chicken embryonic stem cells,cESCs),优化鸡胚胎干细胞培养体系,以期构建鸡胚胎干细胞株或细胞系。在获得hTERT基因后,构建重组质粒pEGFPhTERT,并利用FuGENE^(?)HD转染鸡成纤维细胞(DF-1),转染24 h后,荧光显微镜检测;再以80%BRL-CM(大鼠肝细胞条件培养基)与20%的ES基础培养液混合的条件培养基培养分离的cES:s,添加10μmol·L^(-1)维生素C,AKP染色以及相关表面抗原SSEA-1、SOX2和OCT4检测鉴定后,以G418筛选pEGFP-hTERT转染的cES:s,传代培养后荧光定量PCR检测相关干性基因的表达水平。结果表明:维生素C可以促进cESCs增殖,pEGFP—hTERT转染的DF-1细胞中可以检测到绿色荧光表达,pEGFP—hTERT转染的cESCs可持续传至10代以上,且仍保持未分化状态,干细胞表面特异性抗原检测呈阳性,且相关干性基因的表达水平差异不显著(P>0.05)。综上表明:pEGFP-hTERT转染的cESCs在80%BRL-CM结合外源因子的作用下,能够持续稳定传至10代且仍保持未分化状态,可应用于鸡胚胎干细胞的永生化和细胞系建立。