钩端螺旋体L型的诱导及形态学观察

本文在钩体L型培养基中,应用不同浓度的青霉素G对波摩那型钩体进行L型体外诱导研究和形态学观察。结果表明:青霉素G在0.16～20u/ml均可诱导出钩体L型,其中以0.8～4u/ml诱导效果较好。用暗视野显微镜、Giemsa染色和扫描电镜检查表明,钩体L型在形态上表现为球状体和丝状体。前者大小不等。一般直径为0.15～4μm,大的囊样体直径约35μm,内部密度不匀,含大小不等的球状体;间接免疫荧光法检查表明,这些大小不等的球状体呈特异性阳性染色。透射电镜下钩体L型细胞壁有缺损,透光度大,有的L型细胞见DNA纤丝,研究还表明,37℃和29℃两种温度条件下诱导钩体L型的结果差异无显著性(P>0.05)

临床标本钩端螺旋体L型的分离与形态学鉴定

应用钩体Ｌ型培养基成功地从钩体病神经系统后发症患者的血液和／或脑脊液标本中分离到钩体Ｌ型，将Ｌ型阳性培养物转种于钩体Ｌ型固体平板培养，发现其菌落形态呈丝状（Ｆ）型。对所分离到的Ｌ型进行形态学鉴定表明：Ｌ型呈球状体、螺旋状的丝状体等多形性改变，电镜下见Ｌ型失去部分或全部细胞壁，Ｌ型经免疫标记技术鉴定证实为钩体的Ｌ型。

微生物超抗原在人类疾病中的作用

超抗原主要指一些微生物的外产物,极微量即可引起强烈反应。超抗原与抗原提呈细胞(APC)上的MHCⅡ类分子相互作用,再与T细胞受体(TCR)上的β链可变区(Vβ)作用,从而刺激T细胞进行非特异性增殖,释放细胞因子而致病。

脑梗死和脑出血患者外周血中循环microRNA表达谱差异的初步分析

目的:利用microRNA芯片研究急性脑梗死和脑出血患者循环血浆中是否存在相关的miRNAs及有表达差异的miRNAs。方法:分别收集急性脑梗死、脑出血患者和健康对照者全血各3例,运用Norgen血浆外泌体RNA提取试剂盒提取血浆总RNA并通过定量PCR进行质量和浓度检测。采用μParaflorTM microRNA芯片技术进行miRNAs表达谱研究。用相关软件和统计学方法进行数据分析。结果:在脑梗死和脑出血患者血浆中发现8个与脑卒中相关的miRNAs,且有显著差异性表达(P<0.05)。脑梗死和健康对照者、脑出血和健康对照者间分别有11、24个差异表达miRNAs,但两两比较上调或下调2倍以上的差异表达的miRNAs均无统计学意义(P>0.05)。结论:脑梗死和脑出血组间miRNA的表达差异可能与不同类型脑卒中的发生发展相关,可为进一步研究急性脑卒中发生的表观遗传学分子机制提供依据。

EBV-LMP1 cDNA的克隆测序与原核表达质粒构建

目的 克隆EBV LMP1cDNA ,构建EBV LMP1基因的原核表达重组质粒。方法 通过RT PCR技术从B95 8细胞中扩增EBV LMP1cDNA ,克隆至pGEM Teasy载体上并测序 ;利用引物上的BamHⅠ与HindⅢ酶切位点将LMP1基因插入载体pET 32a,转化JM10 9菌。提取质粒 ,限制性内切酶消化 ,琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果 扩增的LMP1cDNA长度为 115 8bp ,测序结果与已知序列吻合 ,重组原核表达质粒经酶切鉴定表明获得正确重组子。结论 成功克隆了EBV LMP1cDNA ,并构建了pET 32a LMP1原核表达载体 。

钩端螺旋体L型稳定株致病性的实验研究

本文应用广泛性脑梗塞患者分离的、经免疫荧光与免疫酶染色证明为钩端螺旋体（简称钩体）L型的稳定株并以钩体原型为对照，感染豚鼠，感染次日两组动物体温均升高，感染原型组4／5从血液分离出钩体，L型组3／5分离出L型。2月后处死两组豚鼠取血分离，原型组钩体已从血中消失，而L型仍有3只分离出L型。病理切片证明两组病变主要为心、骨骼肌、肺、眼的间质性失，并有肝窦、小动脉狭窄，肺出血明显，脊髓前角神经细胞变性，原型组中有1只在肾曲小管中见有L型。结果表明，钩体L型稳定株可长期在血中存活能引起眼、神经后发症。原型感染后从血中迅速消失，但L型在肾中存在。说明原型在体内可转变为L型，并从尿中排出，成为一重要的传染源。

钩端螺旋体L型脊髓炎(附15例报告)

目的探讨钩体L型脊髓炎发病机理和防治。方法对15例钩体L型脊髓炎临床表现、实验室检查，并复习文献。结果急性及亚急性或慢性脊髓损害各7、8例，双下肢瘫7例，四肢瘫8例。均有明显的传导束型或节段到感觉障碍及排尿障碍。血培养钩体L型阳性8例，原型构体6例，尿培养：构体L型5例；CSF培养钩体L型5例；血清钩体MAT阳性7例。结论钩体L4脊髓炎的发生可能为构体L型直接损伤脊髓或供血血管，钩体L型致间质炎症病理损伤所致。甲硝哒唑易透过血脑屏障能损坏钩体DNA结构，可减少钩体病后发病。

临床标体中钩端螺旋体及其L型的检测与鉴定

目的 为探讨钩体 Ｌ 型在钩体病患者体内是否存在及是否具有致病作用。方法 对患者血、 Ｃ Ｓ Ｆ 进行 Ｍ Ａ Ｔ；对患者血、 Ｃ Ｓ Ｆ 及尿液进行钩体及其 Ｌ 型培养； 对培养出的钩体 Ｌ 型进行免疫酶染色、免疫荧光染色、 Ｓ Ｄ Ｓ－ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ、 Ｄ Ｉ Ｂ Ａ及电镜等方法鉴定。结果 Ｍ Ａ Ｔ 阳性率为１９１７ ％ （６０３１３） ； 钩体普通培养阳性率１１８８ ％ （４１３４５） ； 钩体 Ｌ 型阳性率２４９３ ％ （８６３４５） 。培养出的 Ｌ 型经上述方法鉴定为钩体 Ｌ 型。结论 钩体 Ｌ 型培养应与 Ｍ Ａ Ｔ 及钩体普通培养同时进行，以防漏诊。

EBV-LMP1基因杆状病毒表达载体的构建及其在昆虫细胞中的表达

目的 构建EBV LMP1基因的杆状病毒重组供体质粒 ,包装重组LMP1的杆状病毒 ,感染昆虫细胞进行表达。方法 先将已克隆的LMP1cDNA与线性化的pFASTBACHTb进行连接 ,使pFASTBACHTb LMP1与DH1 0BAC感受菌进行转座重组 ,利用抗性及蓝白斑筛选重组Bacmid/LMP1克隆 ,提取Bacmid/LMP1转染昆虫细胞Sf9包装杆状病毒 ,利用病毒感染Sf9细胞进行蛋白表达 ,通过免疫荧光、SDS PAGE和Western blot检测表达情况。结果 获得了重组LMP1的杆状病毒 ,细胞能表达出与LMP1单抗结合的蛋白 ,分子量为 6 3kDa左右 ,细胞可直接分泌LMP1蛋白至上清。结论 LMP1能在昆虫细胞中获得良好表达 。

Epstein-Barr病毒LMP1-exonl反义表达载体对NPC细胞生长的抑制作用

目的 研究EB病毒LMP1反义基因对人鼻咽癌CNE2细胞恶性表型的逆转作用。方法 用反义LMP1DNA的真核表达载体anti pcDNA3.1 LMP1转染人鼻咽癌细胞CNE2 ,G4 18筛选抗性克隆 ;Western blot法检测转染前、后瘤细胞的LMP1表达 ;用MTT法、细胞生长曲线和软琼脂集落形成能力实验观察转染前后细胞体外生长增殖特性。结果 建立反义CNE2细胞克隆 ;转染后LMP1蛋白表达降低 ;转染后细胞活力和生长速度均有下降 ,集落形成能力显著降低。结论 将反义LMP1真核表达载体导入细胞能成功抑制NPC细胞的生长 ,逆转其恶性表型。本研究还为鼻咽癌的基因治疗提供了实验依据。

Epstein-Barr病毒LMP1蛋白羧基端的克隆与原核表达

目的 构建PGEX 6P 3 CCT原核表达载体 ,获得大量纯化的LMP1羧基端蛋白。方法 通过RT PCR技术从B95 8细胞中扩增EBVLMP1CCTcDNA ,克隆至PGEM Teasy载体上并测序。利用引物上的BamHI与EcoRI酶切位点将CCT基因插入PGEX 6P 3,转化大肠杆菌BL2 1 ,限制性内切酶消化鉴定。IPTG诱导重组菌株表达 ,用SDS PAGE与Westernblot对表达产物进行鉴定 ,并用Sepharose 4B亲和层析柱对表达产物进行纯化 ,PreScissionProteas酶对融合蛋白进行解离。结果 扩增的LMP1CCT长度为 5 97bp ,测序结果与已知序列吻合。重组子经酶切鉴定 ,获得PGEX 6P 3 CCT原核表达菌株 ,Westernblot表明重组蛋白能被LMP1单克隆抗体特异结合。获得约5 1kDa的PGEX 6P 3 CCT融合蛋白 ,分离纯化出约 2 1kDa的LMP1CCT蛋白。结论 成功获得EBVLM1CCT蛋白 ,为研究LMP1致瘤机制 。

钩端螺旋体病后发症与L型

目的 :了解钩端螺旋体 (以下简称钩体 )L型与钩体病眼、神经后发症的关系。方法 :对临床疑诊为钩体病后发症患者血、脑脊液作钩体及L型培养和显微镜凝集试验。用青霉素在患者体内诱导钩体L型和分离的钩体L型分别二次对豚鼠进行实验性感染 ,以了解引起的病理变化与临床后发症的关系。通过对L型的生物特性研究 ,了解其长期在体内存活的原因。结果 :从 186例患者血与脑脊液的检测表明钩体L型分离阳性率为 2 8.6 % ,远高于钩体原型 10 .2 % (P <0 .0 0 5 )。从感染动物病变见有血管壁增厚、管腔狭窄、脊髓前角神经元变性、眼葡萄膜与视网膜炎以及肾曲小管中见有L型存在。病变出现于L型感染动物多于原型感染动物。经微区图谱证明钩体L型的细胞膜比原型增厚 3倍。结论 :钩体L型细胞膜的增厚使其能延长在体内存活的时间。引起的病变证明与后发症有关。在肾曲小管中出现说明钩体L型可经尿排出 。

板蓝根对试验性小鼠遗传毒性的影响

目的 :研究板蓝根水煎液在实验性小鼠体内是否具有遗传毒性。方法 :应用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形实验 ,观察板蓝根水煎液在小鼠体内能否诱发体细胞和雄性生殖细胞遗传物质的损伤。结果 :板蓝根水煎液能明显诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核和小鼠精子畸形 ,具有致突变作用。结论 :板蓝根水煎液作为一种临床常用的清热解毒和治疗肿瘤的中草药 ,在剂量较大时 ,具有致突变性 ,临床使用上应注意。

蒲公英水煎液对环磷酰胺诱导的实验性小鼠精子畸形的影响

目的 :研究蒲公英水煎液对实验性小鼠生殖细胞遗传物质的影响。方法 :应用小鼠精子畸形实验 ,观察蒲公英水煎液本身能否诱发雄性生殖细胞遗物质的损伤 ;以及对环磷酰胺诱导的雄性生殖遗传物质损伤是否具有抑制作用。结果 :蒲公英水煎液本身不能诱发实验性小鼠精子畸形 ;对环磷酰胺诱导实验性小鼠精子畸形具有明显抑制作用。结论 :蒲公英水煎液具有一定的抗突变作用 ,可安全应于临床肿瘤治疗。

校企协同育人平台促进医学检验技术专业发展的探索

以国务院及教育部推行校企合作协同育人的教育理念为指引,以广州医科大学与广州金域医学检验中心共建金域检验学院为实例,围绕校企协同育人平台搭建、教师团队组建、特色培育方案制定等方面,探索和实践校企协同育人模式促进医学检验教育发展的作用。

改革考试命题形式,加强素质教育

改革考试命题模式是加强素质教育的一个重要环节。本文在论述应试教育带来的负面影响的基础上，提出要转变观念，强化素质教育意识；改革试题的命题形式，充分体现理论联系实际。

PCR克隆EB病毒潜伏膜蛋白-1基因

目的：构建ＥＢ病毒潜伏膜蛋白－１重组表达质粒。方法：ＰＣＲ克隆技术，即用ＰＣＲ方法从Ｂ９５－８细胞中钓出ＥＢ病毒ＬＭＰ１基因ＤＮＡ序列，然后定向克隆到真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１中，以此构建成ｐｃＤＮＡ３．１－ＬＭＰ重组质粒。结果：经酶切鉴定，确定已获得重组质粒ｐｃＤＮＡ３．１ＬＭＰ１。结论：在真核表达质粒中已成功地克隆了ＥＢ病毒ＬＭＰ１基因。

碳含量对WC-3Co-3Ni粗晶硬质合金组织和性能的影响

为探究碳含量对Co-Ni复合粘结相粗晶硬质合金组织与性能的影响,采用光学显微镜、洛氏硬度计、矫顽磁力计和钴磁测量仪研究了不同碳含量下WC-3Co-3Ni粗晶硬质合金组织结构与性能的变化规律。结果表明:随着球磨时间增加,合金的矫顽磁力增加,在球磨22 h时矫顽磁力达到最大值。随着碳含量增加,WC晶粒形貌表现为棱角更加分明,溶解-析出过程使WC晶粒变粗,抗弯强度升高,硬度降低。当延长球磨时间时,碳含量降低比碳含量增加所引起的合金硬度的增幅更大。