黄根化合物的分离及对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症的影响

目的研究黄根乙醇提取物对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症模型的作用,并对其具有活性的乙酸乙酯组分的化学成分进行分离纯化。方法利用CCK-8法检测黄根化学成分对RAW264.7细胞活性的影响。利用浓度为500 ng/mL的LPS诱导RAW264.7细胞,以建立细胞炎症模型,Griess检测细胞上清液中一氧化氮(NO)水平,ELISA法检测细胞上清液IL-1β、TNF-α的含量,DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS水平。再通过溶剂提取法、硅胶色谱柱、高效液相色谱法等方法对黄根乙酸乙酯组分分离纯化。结果质量浓度在100μg/mL及以下的黄根醇提物、石油醚组分、乙酸乙酯组分、正丁醇组分和水组分对RAW264.7细胞无毒性。与模型组比较,黄根醇提物、乙酸乙酯组分对细胞中NO、TNF-α、IL-1β和ROS的表达水平具有下调抑制作用。根据理化性质和波谱资料确定化合物结构,从黄根乙酸乙酯部位分离鉴别了4个化合物,根据理化性质和波谱资料确定化合物结构为甲基异茜草素-1-甲醚(1)、1,3-二羟基-2-乙氧甲基蒽醌(2)、邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(3)、对苯二甲酸二(2-乙基己)酯(4)及实验证明分离得到单体不具抗炎活性在此不做赘述。结论黄根醇提物组、乙酸乙酯组可拮抗LPS诱导的小鼠巨噬细胞炎症反应,抑制炎症相关因子的表达。邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯和对苯二甲酸二(2-乙基己)酯为首次从该植物中分离。