酿造酱油米曲霉产中性蛋白酶提取与酶学性质研究

对米曲霉菌种F-81所产中性蛋白酶的提取及部分性质进行了研究。结果表明：硫酸铵分级沉淀的饱和浓度范围为40％～80％；该中性蛋白酶的最适作用温度为60℃，最适pH值为7．0。40℃下酶稳定性较好，60℃下处理20min，粗酶中几乎检测不到酶活力；中性蛋白酶pH稳定范围为6．0～8．0。Km值为2．84mg／mL；最大反应速度Vmax为0．32mg／（min·mL）。Mg^2＋对酶活有激活作用，Cu^2＋、Fe^3＋、Zn^2＋、Mn^2＋不同程度抑制酶活性，其中Cu^2＋、Fe^3＋强烈抑制酶活性。

黑曲霉SL2-111聚半乳糖醛酸酶的纯化和特性

通过硫酸铵分级沉淀、Sephcryl S-200分子筛柱层析、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析3个步骤,从黑曲霉SL2-111发酵的果胶酶粗品中纯化出一种电泳纯的聚半乳糖醛酸酶.经SDS-PAGE测定其相对分子质量约为71.5 ku.最适pH值和最适温度分别为3.0和65℃.在50℃以下,pH值2.6～5.4之间酶活力相对稳定.浓度为5 mmol/L的Ca2+、Li+、Cu2+、Mg2+、K+对酶活力有激活作用;而Mn2+和Ag+具有抑制作用.

一株吡虫啉杀虫剂降解菌BB-1的分离鉴定

目的:从福建安溪茶园土壤分离能降解吡虫啉杀虫剂的细菌菌株,对其进行分类鉴定。方法:采用室内培养试验方法,通过富集驯化、平板划线分离得到1株优势细菌BB-1,采用形态、生理生化特征和16S rDNA序列分析对菌株BB-1进行鉴定。结果:菌株BB-1与多株苍白杆菌(Ochrobactrum)的亲缘关系最近,该菌株鉴定为苍白杆菌属(Ochrobactrum sp.)。BB-1在吡虫啉浓度为400mg/L的LB培养基中培养0h～5h为生长延迟期,4h～20h为对数生长期,20h～42h为稳定期,42h以后为衰亡期。菌株BB-1对多种抗生素敏感,可耐受的NaCl浓度超过10%。结论:BB-1能降解吡虫啉杀虫剂,分类上应属于Ochrobac-trum sp.。

海藻酸钠固定化米曲霉产果胶酶及其性质

以海藻酸钠为载体固定化米曲霉产果胶酶。研究海藻酸钠浓度、CaC12浓度、固定化时间对果胶酶固定化率与性质的影响。结果表明,以3.5%的海藻酸钠为载体、1.5%的CaC12为凝聚剂、固定化时间2.5h时所得的固定化果胶酶活力保存率最大,固定化率可达97.5%,固定化酶活性为3600U/g,固定化后果胶酶耐热性与游离酶相比有所提高。

产中性蛋白酶米曲霉紫外诱变与产酶条件研究

从酿造酱油曲精中分离纯化到1株产中性蛋白酶的菌株米曲霉SW-4,采用紫外线诱变筛选的突变株SW-44比出发菌株酶活力提高1.66倍。单因素试验表明,达到产酶高峰期的条件为麸皮与黄豆粉比值4:1,培养时间60h,最适培养温度30℃,培养基加水量10mL。

米曲霉F-81产中性蛋白酶的固定化条件及其特性

以海藻酸钠为载体,戊二醛为交联剂固定化米曲霉F-81产中性蛋白酶,研究了固定化条件及固定化酶的性质。结果表明,固定化的最佳条件为:固定化时间1 h、海澡酸钠浓度4%、戊二醛浓度9%、CaCl2浓度0.7 mol/L。在此条件下固定化的中性蛋白酶活力为游离酶活力的68%。固定化酶的最适作用温度为65℃,最适作用pH值为7.0。60℃下酶稳定性较好,80℃下处理60 min,粗酶中几乎检测不到酶活力;中性蛋白酶pH稳定范围为6.5-9.5。Km值为24.83 mg/mL,最大反应速率Vmax为0.043 12 mg/min。

黑曲霉SL2-111固态发酵生产聚半乳糖醛酸酶

以麸皮为主要原料,采用黑曲霉(Aspergillusniger) 诱变菌株SL2 111进行聚半乳糖醛酸酶固态发酵,培养物最高酶活力可达到2 6 95U/g(鲜曲)。产酶最适培养基为:麸皮15 g ,柚皮粉1 5 g ,(NH4) 2 SO40 8g ,Ca Cl2 0 0 75g。最佳产酶条件为:2 8℃,pH6 0 ,培养72h。成曲的最佳浸提条件为:以0 1mol/L ,pH4 0柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液为浸提剂,在30℃下浸提5h。

米曲霉固体发酵生产果胶酶的研究

对酿造酱油米曲霉(Asp.oryzae)菌株F-81产果胶酶的发酵条件及浸提条件进行研究。结果表明15g固体培养基的最佳营养组合为:橘皮粉5.0g,(NH4)2SO40.45g,KCl0.00375g,料水比1:0.9。最佳浸提条件为:以0.9%的生理盐水为浸提液,在40℃浸提2h,酶活力可达2380U/g鲜曲。

酵母菌S-2对草甘膦除草剂的降解特性

[目的]从福建三农集团污水处理池的活性污泥中分离草甘膦降解菌株,研究其降解特性。[方法]采用富集驯化和选择性培养,分离能以草甘膦为唯一碳源、氮源的酵母菌S-2,对其降解特性进行了研究。[结果]适宜菌株S-2生长和获得最佳降解率的条件为:接种量4%、pH值7.0、温度30℃、转速130～160r/min。[结论]该研究为草甘膦的生物降解与污染土壤的生物修复提供必要的参考。

米曲霉F-81菌株产中性蛋白酶的分离纯化

对米曲霉菌种F-81所产中性蛋白酶进行分离纯化。经过硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Sephacryl-S200凝胶过滤层析后,得到一种电泳纯的中性蛋白酶,纯化倍数为26.3倍,活性回收率为6.7%。经SDS-PAGE电泳测定其相对分子质量约为73.4kD。

喷施宝叶面肥对农药胁迫下土壤中常见微生物生长的影响

采用室内培养法研究叶面肥喷施宝对农药(草甘膦异丙胺盐、三唑磷和乙草胺)胁迫下土壤中常见微生物生长的影响。结果表明,与对照相比,叶面肥喷施宝能促进施用草甘膦异丙胺盐土壤中细菌与放线菌的生长,但受施药时间与使用浓度的影响;叶面肥喷施宝对施用三唑磷土壤的微生物生长影响不显著;能显著促进施用乙草胺土壤中细菌与真菌的生长,但对放线菌生长的影响不显著。

黑曲霉SL2-111产果胶酯酶的纯化与性质

通过硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析、Sephacryl S-200分子筛柱层析3个步骤,从黑曲霉SL2-111发酵的果胶酶粗品中纯化出一种电泳纯的果胶酯酶。经SDS-PAGE测定其分子质量约为48.8ku。最适pH值和最适温度分别为5.8和60℃。在50℃以下,pH值5.8-6.2之间酶活力相对稳定。

黑曲霉SL2-111固体发酵生产果胶酯酶的研究

目的：研究黑曲霉（Aspergillus niger）诱变菌株SL2-111产果胶酯酶的发酵及浸提条件。方法：通过固体发酵，考察碳氮源、无机盐及培养条件等因素对产酶的影响。采用不同浸提剂与硫酸铵浓度，比较浸提与分离效果。结果：以麸皮为主要原料，培养物最高酶活力可达到32 975U／g鲜曲。产酶最适培养基为：麸皮10g，柚皮粉1．5g，（NH4）2SO41．0g，CaCl20．075g。最佳产酶条件为：28℃，pH6．5，培养52h。成曲的最佳浸提剂为蒸馏水，果胶酯酶硫酸铵分级沉淀的浓度为50-90％。结论：黑曲霉（Aspergilus niger）诱变菌株S12-111产果胶酯酶的发酵及浸提条件值得进一步研究。

三唑磷农药降解酶的定位及酶学性质研究

采用超声波破碎法破碎三唑磷农药降解菌芽孢杆菌TAP-1,研究不同细胞组分对三唑磷农药的降解率,应用液相色谱法研究三唑磷农药降解酶的酶学性质。结果表明,胞外酶、胞间粗酶液和胞内酶对三唑磷的降解率分别为2.8(±0.34)%、12.8(±2.44)%和84.4(±6.71)%。菌株TAP-1降解三唑磷农药的主要活性物质位于降解菌细胞内,属于胞内酶组分。该酶最适作用pH值为6.5~7.0,在pH 5.0~7.5之间,酶活力均能保持在最高酶活力的68%以上。最适反应温度为30℃,在25~40℃温度范围内能保持75%以上的降解活性。不同化学试剂和金属离子对酶活性产生不同的影响。巯基修饰剂、EDTA、Hg^(2+)和Mn^(2+)对酶活性有抑制作用。Mg^(2+)、Co^(2+)和Fe^(3+)对酶活性有促进作用。该降解酶米氏常数(Km)为23.02μmol/L,最大反应速度(Vmax)为0.738μmol/mg·min。

桔子园土壤中果胶分解菌的分离及其特性

通过富集培养结合刚果红平板水解圈法,从福建南安桔子园土壤中筛选到11株果胶分解细菌。采用DNS法测定果胶酶活力,筛选到酶活力最高的1株细菌272-1菌株,其形态与部分生理生化特性实验表明,272-1菌株归属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae),沙门氏菌属(Salmonella)。单因素实验表明,272-1菌株液体发酵产果胶酶的最适条件为温度30℃,摇瓶转速160r/min,最适pH值为7.5。

叶面肥喷施宝对芥蓝菜农药残留及抗氧化酶活性的效应

为探明叶面肥喷施宝对蔬菜农药残留及抗氧化酶活性的效应,以芥蓝(Brassica albograbra)为材料,在室外栽培条件下研究叶面肥喷施宝对芥蓝菜叶片3种杀虫剂(吡虫啉、毒死蜱和高效氯氰菊酯)残留及其超氧歧化酶(SOD)、过氧化氢酶、过氧化物酶(POD)活性的影响。结果表明,与对照相比,喷施宝能促进芥蓝菜吡虫啉、毒死蜱和高效氯氰菊酯残留的降解,但受使用时间与浓度的影响。叶面肥喷施宝能提高高效氯氰菊酯使用后芥蓝菜过氧化氢酶(CAT)与超氧歧化酶(SOD)的活性和毒死蜱胁迫下芥蓝菜CAT的活性,对过氧化物酶(POD)的影响不显著。喷施宝能明显提高吡虫啉胁迫下芥蓝菜POD的活性,对CAT的影响受使用浓度与取样时间的影响,但对SOD的影响不显著。

草甘膦降解菌C-17的分离鉴定及生物学特性

从福建三农集团污水处理池分离到一株降解草甘膦的菌株C-17,经形态与生理生化实验,C-17初步鉴定为胶红酵母属真菌。在草甘膦基础培养基上,C-17菌株对草甘膦的最高耐受浓度为6000mg/L,草甘膦浓度为3000mg/L时生长量最高。C-17菌株能以草甘膦为唯一氮、磷源,培养7d对草甘膦的降解率为83.6%,培养基中缺乏别的磷源,有利于促进C-17菌株对草甘膦的降解。

一株甲胺磷分解菌的分离及其特性研究

通过富集驯化和选择性培养,从福建三农集团污水处理池的活性污泥中筛选到一株能以甲胺磷为惟一碳源和氮源的细菌DM-1。研究了该菌形态与部分生理生化特性。DM-1菌在无机盐基础培养基中对甲胺磷的最高耐受浓度为1500mg/L,DM-1菌最适生长条件:起始pH值8.0,培养温度28℃,接种量3.0%,摇床转速150r/min,培养时间72h。最佳碳、氮源分别为D-甘露醇和蛋白胨。

化学农药对三沙湾滩涂土壤细菌多样性及其功能的影响

为探究除草剂草甘膦和杀虫剂毒死蜱对三沙湾滩涂土壤细菌群落结构及多样性的影响,利用五点采样法于2021年3月采集福建省霞浦县东吾洋沿岸滩涂土壤,通过模拟自然环境在室内进行农药添加试验,两种农药分别设置3个浓度,即草甘膦5、25、125 mg·kg^(-1),毒死蜱6、30、150 mg·kg^(-1),染毒时间分别取3 d和10 d,以未添加农药的滩涂土壤为对照。使用Illumina MiSeq PE300二代高通量测序平台对各处理及对照滩涂土壤细菌16S rRNA基因的V3~V4区进行测序,分析不同处理土壤细菌群落组成结构和功能差异及其影响因素。结果表明:草甘膦和毒死蜱显著降低了三沙湾滩涂土壤细菌α多样性(P<0.05)。门水平上,滩涂土壤中优势菌群包括变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、绿弯菌门(Chloroflexi)和ε-变形菌门(Epsilonbacteraeota),其丰度占比分别为32.69%、20.38%、12.46%和9.14%,农药处理后其优势菌群主要由变形菌门、厚壁菌门和拟杆菌门(Bacteroidetes)组成。属水平上,对照土壤以深海芽孢杆菌属(Thalassobacillus)、海杆菌属(Marinobacter)、硫卵菌属(Sulfurovum)和芽孢杆菌属(Bacillus)为主,农药处理后其优势菌群海杆菌属和芽孢杆菌属得到大量扩增,其他菌属呈现不同程度的衰退。Tax4Fun功能分析结果显示,各处理滩涂土壤的功能类群主要集中在新陈代谢方面,不同阶段细菌功能主要分布于38类代谢通路。经农药处理,滩涂土壤中氨基酸代谢、异生素降解和代谢、脂类代谢、萜类化合物和聚酮的代谢以及环境信息处理中膜运输、细胞运动和细胞运输同化作用等功能得到明显增强,而能量代谢、聚糖生物合成和代谢、遗传信息处理等功能有不同程度的削弱。由此可见,化学农药的加入降低了三沙湾滩涂土壤细菌群落多样性,微生物多样性的损失将改变生态系统的功能,降低生态系统的稳定性。

微生物降解有机磷农药的研究进展

果蔬菜等农产品有机磷农药残留越来越严重,利用微生物降解有机磷农药,在改善环境和人们生活质量方面已显得经济而有效。本文就降解有机磷农药的微生物种类,降解机制及编码降解酶的相应基因,以及工程菌的构建作了综述。