伴有6;9染色体易位急性髓系白血病患者DEK-CAN融合基因表达分析

本研究旨在探讨急性髓系白血病(AML)患者6;9染色体易位与DEK-CAN融合基因表达之间的关系及临床意义。患者骨髓细胞短期培养后按常规方法制备染色体,采用R显带技术进行染色体核型分析。用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nest-PCR)对4例AML患者的骨髓或外周血单个核细胞DEK-CAN融合基因表达进行了分析,并对其中3例行异体骨髓移植(allo-BMT)患者进行动态随访。结果表明:4例急性髓系白血病患者为t(6;9)(p23;q34)易位;4例初诊、再发及完全缓解期患者均不同程度检出DEK-CAN融合基因,占100%;其中初诊、再发期表达明显增强,完全缓解期减弱;3例患者allo-BMT后1-24个月均表达DEK-CANmRNA。临床资料显示4例AML患者中2例于CR后1-24个月复发(其中1例接受异体骨髓移植)、死亡,其余2例完全缓解,在治疗中先后接受异体骨髓移植,现仍然生存。结论:DEK-CAN基因是AML发病的分子基础,检测DEK-CAN融合基因对于AML的诊断、疗效观察及预后判断有重要意义。

急性髓系白血病细胞Flt-3表达及Flt-3/ITD突变分析

本研究探讨急性白血病(acuteleukemia,AL)细胞株Flt-3基因表达和Flt-3/ITD突变与急性白血病特别是急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,AML)发病的关系。采用RT-PCR分析联合测序的方法检测82例白血病细胞株,其中包括20例AML细胞株和57例急性淋巴细胞白血病细胞株(ALL),5株CML细胞株的Flt-3表达和Flt-3/ITD突变。结果表明:77例AL细胞株中有48例Flt-3表达阳性,阳性表达率为62%,其中20例AML细胞株中有12例阳性,阳性表达率为60%;57例ALL细胞株中有33例阳性,阳性表达率为58%。5例CML细胞株中有3例阳性,阳性表达率为60%。12例Flt-3表达阳性的AML中有1例AMOL细胞株存在有异常表达(阳性率为8.3%),测序显示存在有29bp的两个编码重复序列,其余Flt-3表达阳性的细胞株未检出重复序列。未分化B细胞系Flt-3基因表达阳性率明显高于成熟B细胞ALL(P<0.05)。结论:Flt-3基因在不同种类的白血病细胞中存在着不同程度的表达,在其中1例AML中发现有Flt-3/ITD重复序列。Flt-3基因及Flt-3/ITD突变检测可能有助于ALL特别是AML的诊断。

碱性成纤维细胞生长因子对人晶体上皮细胞增殖及一氧化氮和诱导型一氧化氮合酶的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人晶体上皮细胞内一氧化氮(NO)含量和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性、基因及蛋白表达的影响。方法:以含10%胎牛血清(FBS)与100mg/L青霉素和100mg/L链霉素的DMEM培养液培养及传代人晶体上皮细胞。用0.001,0.01,0.1,1,10和100μg/L浓度的bFGF作用于晶体上皮细胞,用MTT法检测晶体上皮细胞的增殖情况;用Griess法测定NO含量;分别用RT-PCR方法及westernblot法检测iNOS基因及蛋白的表达。结果:①bFGF对细胞增殖的影响:与对照组比较,除100μg/L组外,其余浓度为0.001～10μg/L的bFGF对人晶体上皮细胞的增殖效应均大于对照组,其中0.01～10μg/L的bFGF对人晶体上皮细胞的增殖效应差异显著(P<0.05)。②bFGF对晶体细胞NO水平、NOS活性及iNOS的基因和蛋白表达的影响:对照组和0.001,0.01,0.1μg/LbFGF组NO水平较低,而在1μg/L和10μg/L的bFGF使人晶体上皮细胞的NO含量增高,0.1～10μg/L的bFGF使人晶体上皮细胞的NOS活性增高、使iNOS的基因和蛋白表达增强。结论:可以促进人晶体上皮细胞的增殖,使NO含量和iNOS的活性和蛋白表达增高。

bFGF诱导人晶状体上皮细胞增殖过程中细胞外信号调节激酶的作用

目的:检测细胞外信号调节激酶(extracellular regulated kinase,ERK)在碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)诱导的人晶状体上皮细胞增殖过程中的表达与活化;检测ERK1/2特异性阻断剂PD98059对人晶状体上皮细胞增殖的影响。方法:人晶状体上皮细胞系SRA01/04体外培养,采用MTT比色法和[3H]-TdR掺入法检测ERK阻断剂PD98059对人晶状体上皮细胞活力和DNA合成的影响;Westernblot法测定bFGF对培养的人晶状体上皮细胞ERK,c-Jun氨基末端激酶(JNK),P38蛋白表达及PD98059对环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。结果:10μg/LbFGF能显著刺激人晶状体上皮细胞增生,1μmol/LPD98059即能显著抑制bFGF启动的HLEC增殖,其效应呈浓度依赖性(P<0.01)。10μg/LbFGF可激活ERK信号通路,诱导COX-2蛋白表达,其效应在30min内达到高峰,6h后逐渐减弱,此作用可被10μmol/LPD98059阻断;10μg/LbFGF对非磷酸化ERK,磷酸化和非磷酸化JNK及P38表达无明显影响。结论:有丝分裂原活性蛋白激酶信号传导通路中ERK磷酸化对bFGF启动的人晶状体上皮细胞增殖具有重要的调节作用。

土槿皮乙酸通过PI3K/Akt信号通路诱导人肾癌细胞A498凋亡

目的:研究土槿皮乙酸对人肾癌细胞A498凋亡的影响,并探讨其内在的分子机制,为肾癌治疗寻找有效的新靶点和新策略。方法:人肾癌细胞A498经10、15μmol/L土槿皮乙酸处理48 h后,用流式细胞仪检测细胞凋亡,同时通过Western印迹和实时荧光定量PCR检测凋亡相关蛋白和m RNA的表达;加入PI3K/Akt通路抑制剂LY294002或15μmol/L土槿皮乙酸处理A498细胞48 h后,Western印迹检测相关蛋白的表达。结果:经不同浓度土槿皮乙酸作用A498细胞48 h后,与未加土槿皮乙酸组细胞相比,细胞凋亡率显著上升,且呈剂量依赖性,比较差异有统计学意义(P<0.05);同时,Blc-2表达减少,Bax、caspase-9、caspase-3表达增多。Blc-2蛋白的表达量随LY294002或土槿皮乙酸的逐步加入而减少,而Bax、caspase-9、caspase-3的表达呈增加趋势;PI3K和Akt蛋白的表达量与是否加入LY294002或土槿皮乙酸无关,p-PI3K和Aktp-Ser473蛋白的表达量随LY294002或土槿皮乙酸的逐步加入而减少。结论:土槿皮乙酸可抑制A498细胞凋亡,其作用机制可能与PI3K/Akt通路相关。

人参多糖对不同类型肿瘤细胞生长增殖的影响

目的:探讨人参多糖对不同类型肿瘤细胞生长抑制作用的构效关系。方法:采用MTT法检测人参多糖对肿瘤细胞生长增殖的影响。结果:人参淀粉样多糖WGPN和AG型果胶WGPA-2-RG对HEP-3B、A172和MCF-7肿瘤细胞的生长没有影响。AG+HG型果胶WGPA-4-RG、HG型果胶WGPA-1-HG和WGPA-3-HG对这几种肿瘤细胞的生长有显著的抑制作用。结论:不同结构的人参多糖对肿瘤细胞的影响明显不同。人参淀粉样多糖不具有直接地抑制肿瘤细胞生长的作用,而人参果胶具有直接地抑制肿瘤细胞生长的作用。其中HG含量越高,它的抑制生长作用越显著。

胃癌发生发展中可溶型Fas/FasL的表达及其意义

目的:探讨Fas/FasL基因蛋白在胃癌发生发展中的作用。方法:应用免疫组化、特定组织蛋白提取及Westem印迹杂交技术,对20例正常胃黏膜,22例癌前病变和35例胃癌组织中Fas/FasL的表达情况加以分析。结果:正常胃黏膜、癌前病变、胃癌组织的Fas阳性率分别为85%、45%、37%;FasL的阳性率分别为20%、27%、46%。Western印迹杂交显示:胃癌细胞产生的Fas蛋白以分子量30 kDa的可溶型Fas(sFas)为主,伴少量的43 kDa膜型Fas(mFas)。结论:Fas在正常胃黏膜和癌前病变、胃癌组织中的表达强度差异有显著性(P<0.05);FasL在胃癌组织和正常胃黏膜、癌前病变中的表达强度差异有显著性(P<0.05)。

阿司匹林对体外培养的人晶状体上皮细胞凋亡调节基因表达的影响

目的:研究阿司匹林(Asp)对培养的人晶状体上皮细胞(humanlens epithelial cells,hLEC)Bax,Bcl-2,caspase-3表达的影响。方法:人晶状体上皮细胞系SRA01/04传代培养,MTT比色法检测Asp对bFGF诱导的hLEC增殖的影响;Western-blot方法检测Asp作用1,3,6,12,24h后凋亡相关因子Bcl-2,Bax,caspses-3蛋白的表达。结果:Asp5mmol/L可明显抑制bFGF诱导的hLEC增殖(P<0.01),且抑制作用呈浓度依赖性。Western-blot结果显示,10mmol/LAsp作用1h后Bax蛋白表达增强,随着时间的延长,表达逐渐增加,6h达到高峰,24h后恢复至基础水平;而Bcl-2的表达与其相反,Asp作用1h后Bcl-2蛋白表达明显下降,6h降到最低点,然后有上升趋势。caspase-3的表达与Bax相似,Asp作用1h后caspase-3表达增加,6h达到高峰,持续24h仍有较高的表达。结论:凋亡因子Bcl-2,Bax,caspase-3参与了Asp诱导的人晶状体上皮细胞凋亡途径。Asp通过调节凋亡基因蛋白产物的表达,诱导hLEC的凋亡。

阿司匹林对人晶状体上皮细胞增殖及环氧合酶-2表达的影响

目的检测环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)增殖过程中的表达,以及阿司匹林对COX-2表达及细胞增殖的抑制作用。方法HLEC系SRA01/04传代培养,MTT比色和[3H]-TdR掺入实验检测阿司匹林对bFGF诱导的HLEC增殖和DNA合成的影响;采用逆转录聚合酶链反应和Westernblot法检测阿司匹林对COX-2mRNA和蛋白表达的影响。结果显微镜下可见,随着阿司匹林浓度增加,细胞形态学的改变逐渐明显。5mmol.L-1、10mmol.L-1、20mmol.L-1阿司匹林可明显抑制bFGF诱导的HLEC增殖,吸光度值分别是0.3662±0.0644、0.2378±0.0295、0.1898±0.0198,对照组为0.5200±0.0184,3组与对照组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.001),抑制作用呈浓度依赖性。[3H]-TdR掺入实验结果显示,阿司匹林对晶状体上皮细胞DNA合成具有抑制作用,药物浓度与[3H]-TdR掺入量呈负相关。逆转录聚合酶链反应及Westernblot结果提示10μg.L-1bFGF组电泳COX-2mRNA及蛋白呈阳性表达,10mmol.L-1阿司匹林与10μg.L-1bFGF共同作用组电泳未见有相应条带出现。结论阿司匹林能有效抑制bFGF诱导的HLEC的生长,这种作用可能是通过抑制COX-2的表达而实现的。

IL-1β对人晶体上皮细胞中NO和iNOS活性的影响

目的:探讨白细胞介素-1β(interleukin-1,βIL-1β)对人晶体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)中一氧化氮(nitric oxygen,NO)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)活性的影响。方法:用IL-1β作用于HLEC后,用MTT法检测细胞增殖;用Griess法测定NO含量和iNOS的活性。结果:IL-1β作用于HLEC 24 h后刺激细胞增殖,NO含量增高,iNOS活性增高。结论:IL-1β诱导的NO和iNOS在HLEC增殖中可能发挥重要作用。

提高生化理论教学直观性的几点尝试

生物化学是一门抽象的学科,教师能否恰当地化抽象为具体对教学效果起到至关重要的作用。教学过程中以学生感兴趣和熟悉的背景知识作为铺垫来讲解抽象理论,采用临床实例、类比日常生活实例及多媒体,可以帮助学生对微观的生化知识建立起感性认识,从而消除畏难和恐惧心理,在轻松的氛围中理解生化知识。

苯酞-3-羧酸合成工艺的改进

该文以邻苯二甲酸酐为原料,经硼氢化钠还原,在六甲基二硅基氨基钾作用下与氯甲酸乙酯缩合,最后水解,得到目标化合物苯酞-3-羧酸。考察了还原反应还原剂用量、反应时间、反应温度,缩合反应的投料比、反应时间、反应温度对反应收率的影响。优化后3步反应总收率可达64.2%,终产品纯度为96.8%,且反应条件温和避免了氰化钠等剧毒性物质的使用,产品经ESI-MS和1HNMR确证结构。

恩替卡韦4'-氨基酸酯化衍生物的合成及生物活性评价

恩替卡韦是一种常用的治疗乙型肝炎病毒的拟核苷类药物,可以显著的抑制病毒HBV-DNA在人体内的复制水平,降低HBV-DNA在人体血浆中的含量;但临床实验表明恩替卡韦在人体中的口服生物利用度偏低,稳定性不好。选择性的合成了8种恩替卡韦4'-氨基酸酯化衍生物,以期提高其在体内的吸收效率;并保留其抗HBV活性。所有的化合物之前均未见报道,其结构经ESI-MS和1HNMR确证,同时其对于Caco-2细胞的膜渗透活性及其在HepG 2.2.15细胞中的抗HBV活性都在体外进行了进一步的评价。结果表明与恩替卡韦相比,所有的4'-氨基酸酯化衍生物的膜渗透活性都有一定程度的提高,同时化合物5c还表现出了与恩替卡韦相接近的抗HBV活性。

TIG2蛋白在皮肤疾病患者中的表达及临床意义

目的:研究TIG2蛋白在皮肤病患者中的表达及临床意义。方法:收集沈阳市第七人民医院2012年3月至5月收治的150例不同类型皮肤病患者和10例健康体检者的血清用双抗体夹心ABC-ELISA法测定TIG2蛋白质水平,并对结果进行统计学分析。结果:(1)皮肤病患者组的血清检测水平均明显高于健康体检组,差异有显著性(P<0.01)。(2)寻常型银屑病和红斑狼疮患者血清检测水平略高于过敏性紫癜、泛发性湿疹和带状疱疹的患者。(3)白疕患者的血清检测水平略低于其他类型皮肤病的检测水平。结论:TIG2蛋白在皮肤病患者中呈高表达。

吉西他滨3'-氨基酸酯化拟肽类化合物的合成及生物活性评价

吉西他滨是临床上常用的一种拟核苷类抗肿瘤药物,临床实验表明吉西他滨在小肠中的渗透效率偏低,其在体内的平均口服生物利用度仅为37.6%。小肠寡肽转运蛋白(PEPT 1)是位于小肠细胞膜上的一种跨膜转运蛋白,其对于体内拟肽类化合物具有显著的主动跨膜转运活性。针对于PEPT 1的转运特性,选择性地合成了8种吉西他滨3'-氨基酸酯化拟肽类化合物,所有的化合物结构经ESI-MS和1HNMR确证。同时体外活性实验表明,所有化合物与PEPT 1的亲和度都有一定程度的提高,其在Caco-2细胞的膜渗透效显著增强,同时部分化合物5c,5e还展现出了很好的体外抗肿瘤细胞增殖活性。

水溶性酞菁锌纳米粒的合成及光动力活性研究

目的:合成Zn Pc-PLGA-PEG纳米粒改善Zn Pc光敏剂的水溶性,并利用光动力学疗法(PDT)原理,考察新型光敏剂对人肝癌细胞Hep G2的杀伤和抑制作用。方法:利用溶剂扩散法制备Zn Pc-PLGA-PEG纳米粒和PLGA-PEG空白纳米粒;采用浓度依赖性实验考察Zn Pc-PLGA-PEG纳米粒和PLGA-PEG空白纳米粒对人肝癌细胞Hep G2的光毒性及暗毒性。结果:合成的Zn Pc-PLGA-PEG纳米粒具有很好的水溶性和稳定性,且对Hep G2细胞具有很强的光毒性,几乎没有暗毒性;PLGA-PEG空白纳米粒的光毒性和暗毒性均不明显。结论:通过纳米载体改造的酞菁光敏剂Zn Pc-PLGA-PEG提高了水溶性,并且对Hep G2细胞具有很强的杀伤和抑制作用。

耕牛水肿型巴氏杆菌病的防治

耕牛水肿型巴氏杆菌病的防治汪亚伦（湖北省蕲春县畜牧局，４３６３００）董元付（湖北省蕲春县横车镇畜牧兽医站，４３６３０４）笔者３０余年诊治耕牛巴氏杆菌病４１５例中，仅见带犊母牛发生６例，占１．４５％，其余均为小牛，占９８．５５％。其中水肿型３６６头，占...