高压均质鸡蛋卵黄对猪冷冻精子凋亡的影响

为探究高压均质鸡蛋卵黄对猪冷冻精子凋亡的影响,本试验采集5头健康状态良好的杜洛克公猪精液,以普通鸡蛋卵黄+Tris-柠檬酸-葡萄糖(TCG)冷冻基础稀释液为对照组,以添加高压均质处理的鸡蛋卵黄+Tris-柠檬酸-葡萄糖(TCG)冷冻基础稀释液为试验组;精液冷冻-解冻后观察精子活力、DNA完整性、线粒体膜电位变化、细胞凋亡率、多种Caspase活性;同时利用qRT-PCR检测相关凋亡功能基因的mRNA表达水平,并进行数据统计。结果表明,经高压均质处理后,猪精子冻后活力、活率和顶体完整率显著高于对照组(P<0.05),为87.64%、87.14%和66.61%,较对照组分别提高了12.58%、5.82%和12.48%;线粒体膜电位和DNA完整率显著高于对照组(P<0.05),为0.74和61.76%;精子凋亡水平显著减少(P<0.05),为37.74%;试验组的Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活性为17.15、11.19和15.18,较对照组分别减少了6.17、2.18和3.51(P<0.05);对照组的Bax、TNF-α、Caspase-9基因表达均明显高于试验组(P<0.05),Bcl-2基因表达量较试验组降低(P>0.05)。综上,高压均质鸡蛋卵黄能提高猪精子冻后质量,促进线粒体功能完整性、降低精子细胞早期凋亡水平和细胞内Caspase活性,同时降低凋亡相关基因mRNA表达量。

上海水牛的保种冻精技术

采集上海水牛成年公牛精液进行冷冻保存,从而抢救性保护该品种。测定结果表明:上海水牛原精活率平均高于50%,活力平均高于45%;冻精解冻后精子活率平均高于45%,活力均高于40%。

6种鸡精液冷冻稀释液以及冻后保存条件比较

为探究不同稀释液对鸡精液冷冻保存效果的影响,选择LR、Lake’s、BPSE、Modified Sasaki、Beltsville和Nabi共6种稀释液对霞烟鸡精液进行冷冻,解冻后分别在37或4℃条件下短时间保存,分析不同冷冻稀释液和保存条件对精子活率、活力、功能完整性和抗氧化指标的影响。结果表明,6种稀释液中Lake’s稀释液的冻后活率、活力和顶体完整性最高,分别为48.20%、45.70%和45.26%;LR稀释液虽然获得了48.16%的冻后活率,但其活力显著低于Lake’s稀释液。解冻后4℃保存更适合鸡精子的短时间保存,Lake’s和Nabi稀释液在4℃条件下保存45 min后活力仍达30%以上。虽然Nabi稀释液解冻初始时的精子活率和活力低于LR和Lake’s稀释液,但随着保存时间的延长,其冻后精子存活能力表现最佳。随着冻后保存时间的延长,LR、Lake’s和Nabi稀释液冻后精子的线粒体活性、质膜完整性和抗氧化能力均呈现下降趋势,且37℃保存时下降更为明显,同时LR稀释液在这些指标上表现出较差的耐受性。综上所述,Lake’s和Nabi冷冻稀释液对鸡精子冷冻保存的效果最佳;解冻后4℃保存可延长冻精的体外存活时间;LR稀释液虽获得了较高的冻后活率,但其活力和冻后耐保存性能较差。

卵黄在鸡精液冷冻保存中的应用研究

以Lake’s为基础稀释液,通过在鸡精液冷冻过程中添加全卵黄和不同浓度卵黄上清,探究卵黄及其离心处理在鸡精液冷冻中的应用效果。结果表明:与对照相比,稀释液中添加10%的全成分卵黄处理鸡精液冷冻保存后活率(22.33%)和活力(13.26%)显著下降(47.81%,42.55%),质膜完整性、顶体完整性和线粒体活性也下降显著。卵黄经稀释和离心处理后,添加5%-15%的卵黄上清可提高鸡精液的冷冻保存效果,其中以10%的卵黄上清效果最佳,其冻后活率和活力可达58.93%和55.36%,显著高于对照组。当卵黄上清添加浓度达到25%时,冻精质量开始明显下降。综上,在鸡精液冷冻过程中,添加全卵黄成分不利于其冷冻保存;10%的卵黄上清可显著提高鸡精子的抗冻能力。

高压均质(HPH)大豆卵磷脂替代卵黄在猪精液冷冻保存效果的研究

为探究大豆卵磷脂高压均质(HPH)处理对猪精液冷冻保存的影响,用6个浓度的经高压均质处理的大豆卵磷脂(A1:1%;A2:2%;A3:4%;A4:5%;A5:6%;A6:8%)替代Tris-柠檬酸-葡萄糖基础稀释液(B组)中的卵黄(20%)进行猪精液冷冻保存试验。冷冻-解冻后分别对精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性进行质量检测,同时利用各种试剂盒对解冻后精子的抗氧化指标、DNA完整率和凋亡指标进行检测。结果显示,当高压均质大豆卵磷脂浓度为5%时,精子活力、活率、质膜完整率和顶体完整率最高,分别为67.15%、62.54%、55.21%和52.96%(P<0.05);冻后精子线粒体完整率和DNA完整率最高,为68.61%和64.39%(P<0.05);凋亡率最低,为23.31%(P<0.05);活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)最低,分别为337.59 U/m L和2.01 nmol/L(P<0.05)。当添加6%的大豆卵磷脂时超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平最高,分别为74.65 U/m L和246.92 U/L(P<0.05)。结果表明,利用5%高压均质大豆卵磷脂替代鸡蛋卵黄对猪精液冷冻保存具有良好的效果,能提高精子冻后质量、功能完整性和抗氧化性。

高压均质(HPH)处理鸡蛋卵黄对猪冻精质量的影响

为探究高压均质(HPH)处理鸡蛋卵黄对猪精液冷冻效果的影响。选取Tris—柠檬酸—葡萄糖基础稀释液,以未处理的鸡蛋卵黄(20%EY)为对照组,添加经HPH处理后的鸡蛋卵黄(20%EY)为试验组,制成Ⅰ液和Ⅱ液,冷冻-解冻后分别对猪精子活力、活率、顶体完整率、质膜完整率、线粒体活性、抗氧化指标及DNA完整率和凋亡指标进行检测。结果显示,经HPH处理能有效提高猪精子冻后质量。精液解冻后精子活力、活率、顶体完整率、质膜完整率分别为84.32%、86.71%、68.92%、59.09%,较对照组分别提高了13.7%、16.58%、6.5%、4.88%(P<0.05)。与对照组相比,试验组的MDA和ROS较对照组均有所上升(P>0.05),SOD较对照组有所下降(P>0.05)。但冻后精子NO和NOS含量显著降低(P<0.05)。试验组的精子解冻后DNA片段完整性较对照组明显提高(P<0.05),凋亡率下降(P<0.05)。结果表明,HPH处理鸡蛋卵黄能有效提高猪精液冷冻后质量。