通过随机突变提高抗TNF-α单链抗体的亲和力

目的:提高抗TNFα单链抗体(scFv)的亲和力。方法:应用错配PCR技术在抗TNFαscFv基因中引入随机突变,再通过DNA交换(shuffling)使引入的点突变进一步重排组合,构建突变噬菌体抗体库。采用硫氰酸盐洗脱法对抗体库进行淘筛。挑选活性得到改良的克隆,用斑点ELISA法及硫氰酸盐洗脱ELISA法评估其亲和力的改善。结果:对PCR错配的突变库筛选未得到亲和力明显改善的抗体变种,经DNA交换进一步构建变种库后,筛选获得1个亲和力提高的克隆,其相对亲和指数为1.37mol/L,较亲本抗体的相对亲和指数0.48mol/L有明显提高。结论:通过错配PCR和DNA交换引入随机突变构建抗体库,可有效地提高scFv的亲和力。

CDR3突变提高抗TNF-αFab段的亲和力

目的通过抗体库技术在CDR3区引入限定性突变以提高抗TNF-α抗体Fab的亲和力.方法首先合成含CDR3区突变的寡核苷酸,限定突变率以保持50%～70%的亲本序列,通过重叠延伸PCR的方法引入突变,构建突变库,再以硫氰酸铵溶液作洗涤液,筛选亲和力得到提高的特异性克隆,用非竞争性ELISA法测定亲和常数.结果从轻链突变库中筛选得到1个活性提高的特异性克隆K8,在第93位发生N→R突变,其亲和常数为2.8×108 L/mol,较亲本抗体(0.1×108 L/mol)提高了近28倍;从重链突变库中筛选得到多个活性增高的克隆,部分克隆测序显示96、97和100 d位置发生R→K、Y→Q、M→L突变的几率最高,且对亲和力提高贡献大.测定了10个变种的亲和常数,分别为0.2×108、0.22×108、1.8×108、3.2×108、3.3×108、3.5×108、3.7×108、4.0×108、 6.3×108和6.5×108 L/mol,最大的提高了近65倍.结论 CDR3区的限定性突变可显著提高抗体亲和力.

环境污染物三丁基氯化锡和氯化三苯锡对大鼠睾丸Leydig细胞的影响

目的：探讨环境污染物三丁基氯化锡（TBT）和氯化三苯锡（TPT）对大鼠睾丸Leydig细胞的影响。方法：①用0～80nmol／L浓度的TBT和TPT处理大鼠睾丸Leydig（LC-540）细胞24～96h，用四唑蓝（MTT）法确定细胞的存活率；②用DNA片段法确定是否存在细胞凋亡；③观察细胞内Ca^2＋螯合剂氨基苯乙烷四乙酸（BAPTA）和蛋白激酶A（PKA）抑制剂H-89、蛋白激酶C（PKC）抑制剂GF109203X、酪氨酸蛋白激酶（TPK）抑制剂Genistein是否可以阻断TBT所致的细胞凋亡；④检测TBT处理的原代大鼠睾丸Leydig细胞分泌睾酮的变化。结果：@TBT和TPT影响Leydig细胞存活率的强度基本相同，在20～80nmol／L浓度时细胞存活率呈剂量和时间依赖性降低；②DNA片段法研究证实TBT和TPT可引起细胞凋亡；③BAPTA可阻断20nmol／L的TBT所致的细胞凋亡，而PKA、PKC和TPK抑制剂对细胞存活率没有影响；@TBT可减少Leydig细胞分泌睾酮，并使其对人绒毛膜促性腺激素（hCG）刺激的反应性降低。结论：环境污染物TBT和TPT能直接导致睾丸Leydig细胞凋亡，并抑制睾酮分泌，这种致凋亡作用可能与细胞内Ca^2＋浓度增加有关。

促肾上腺皮质激素单克隆抗体的筛选和鉴定

目的制备促肾上腺皮质激素 ( ACTH)单克隆抗体 ,拟建立高灵敏度 ACTH- IRMA或 EL ISA。方法 ACTH1 - 1 3、ACTH1 - 2 8、ACTH 1 - 39和 ACTH1 8- 39分别与牛血清白蛋白偶联制备免疫原 ,在背部皮下和腹腔注射免疫 BAL B/ c鼠。按常规方法进行细胞融合 ,以 RIA法检测培养上清液 ,阳性孔经亚克隆 ,获得 2株分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株 ;瘤细胞种于预致敏的BAL B/ c鼠腹腔 ,批量生产单抗性腹水 ;琼脂扩散法鉴定抗体类型 ;利用标准曲线的参数计算单抗的亲合常数 ;亲合纯化单抗并进行抗体固化试验。结果从 ACTH1 - 2 8免疫鼠获得单抗株为 5 G2 ,从 ACTH1 - 1 3免疫鼠获得单抗株为 D3 ;单抗腹水 5 0 %结合率时腹水最终稀释度分别为 5× 10 3和 2× 10 3;抗体类型均为 Ig G1/λ;5 G2和 D3亲合常数分别为 5 .1× 10 9L M- 1 和 4 .9× 10 7L M- 1 ;抗体包被实验显示 5 G2和 D3的固化抗体量分别为 1.4μg和 8.8μg时结合率达到饱和。结论 5 G2和 D3可以用于构建灵敏的 ACTH- IRMA或 EL ISA。

两种纯化二抗IgG方法的比较

两种纯化二抗ＩｇＧ方法的比较汪保安，汪寅章，黄兆坚（解放军总医院，北京１００８５３）近年来，我国固相放免技术已有了很大进展，其中重要的一步是必须使用纯化的抗体，以保证有足量的ＩｇＧ固定在塑料管壁上。本文介绍Ｓｅｐｈａｃｒｙｌｓ３００与正兔ＩｇＧ共价结...

高表达LRP16基因对前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的研究LRP16基因高表达对前列腺癌细胞增殖及侵袭生长的影响。方法利用稳定转染LRP16基因的细胞系,以MTT法测定细胞增殖活性,以平铺Matrigel胶的Transwell培养小室检测细胞的侵袭生长能力。结果高表达LRP16基因对ALVA41细胞(雄激素受体阳性)的增殖没有影响,而对DU145细胞(雄激素受体阴性)则有促进增殖的作用;高表达LRP16基因可抑制ALVA41细胞的侵袭生长,而对DU145细胞的侵袭生长没有影响。结论高表达LRP16基因促进DU145细胞增殖,而抑制ALVA41细胞侵袭生长,可能与除雄激素受体以外的其他机制有关。

大学内部治理结构改革与党风廉政建设

深化内部治理结构、加强党风廉政建设,既是中国特色现代大学制度的核心内容,也是全面推进高校综合改革的重要保障。高校腐败现象发生的根源在于权力配置和责任不清晰、权力约束机制不健全、权力监督问责弱化等问题。制定和实施大学章程,推动大学治理现代化,从源头上规范、制衡、监督权力,从根本上促进高校党风廉政建设,这也是中国特色现代大学走向成熟的标志和必然选择。

甲状腺激素对大鼠脾淋巴细胞内ACTH的影响

本实验通过药物诱发 SD大鼠发生甲亢和甲低 ,研究甲状腺激素对脾淋巴细胞内免疫反应性 ACTH( ir ACTH)的影响。甲亢组大鼠体重显著低于甲低组和对照组 ;血清 TT3、FT3、TT4、FT4在甲亢组和甲低组间有显著差异 ;相同细胞数内 ir ACTH量 ,甲亢组略高于对照组 ,而甲低组则显著低于另两组 ,表明甲状腺激素对淋巴细胞内 ir

女性特发性低促性腺激素性性腺功能减退症的临床评价及KAL1和FGFR1基因突变分析

目的探讨女性特发性低促性腺激素性性腺功能减退症(Idiopathic Hypogonadotropic Hypogonadism,IHH)的临床特征和相关基因。方法分析4例IHH的临床资料和实验室检查结果,PCR直接测序法对其中3例与健康对照的促性腺激素释放激素受体(GnRHR)、卡尔曼综合征1(KAL1)和纤维母细胞生长因子受体1(FGFR1)基因编码区进行测序分析。结果 4例均具无第二性征发育,逾青春期无月经来潮,促性腺激素及性腺激素水平显著低于正常;正常女性染色体核型,无嗅觉障碍,头部核磁示嗅球和嗅沟均正常。其中3例进行基因检测,未发现GnRHR基因突变,但例3和例4 KAL1基因有两个核苷酸多肽性;例3 FGFR1基因第3外显子第251核苷酸A转换成T,导致错义突变Glu84Val。结论 3例中仅1例发现FGFR1基因突变,提示可能有其他因素导致IHH。

血清T_3双抗体固相放射免疫分析的方法探讨

血清Ｔ_３双抗体固相放射免疫分析的方法探讨汪保安，汪寅章，陆思珍，黄兆坚自７０年代末期国内推广应用血清Ｔ：ＲＩＡ以来，测定方法不断改进。曾应用微晶纤维或磁颗粒固化抗体建立了固相ＲＩＡ，但并未达到简化测定方法的目的。近年来，有报告用聚苯乙烯徽孔板固化抗?..

高校构建“三不腐”有效机制研究

"不敢腐、不能腐、不想腐"的"三不腐"有效机制,是坚决遏制和预防腐败现象的目标和方向,对高校落实党风廉政建设"两个责任"、依法治校、提高人才培养质量具有重要意义。高校构建"三不腐"有效机制,要通过发现问题、严肃惩治、公开曝光,形成"不敢腐"的惩戒机制;通过大学章程、制度体系、保障监督,形成"不能腐"的防范机制;通过党性教育、干部管理、廉洁文化,形成"不想腐"的自律机制。

纪委监委监督的嵌入性研究

"嵌入性"是新经济社会学的一个研究范式,本质在于强调事物之间的联系和影响。监督是纪委监委的首要职责。嵌入式监督具有整体性、主动性、互动性及信息化四个特征。纪委监委嵌入式监督的主体是纪委监委机关,被嵌入的对象是党组织、党员领导干部和公职人员的履职用权行为。从党纪法规、机构人员、网络信息三个维度分析纪委监委监督的嵌入机理,对提高监督质量的理论研究和实践探索具有重要指导价值。

高校研究生招生监督机制研究

研究生招生监督机制在完善大学治理结构、提高人才培养质量、遏制招生腐败、彰显教育公等方面具有重要意义。文章分析了高校研究生招生监督体制的四个有机组织部分,包括纵向层级监督机制、横向协作监督机制、社会监督机制,提出强化监督的法制化、制度化、信息化、责任化思路,建议完善立法、创新制度、加大责任追究力度,提高监督实效。

论高校党委全委会建设与创新的路径探索

高校党委全委会是党员代表大会闭会期间学校的最高权力机关和监督机关。当前高校党委全委会的作用并没有得到应有的发挥,面临着诸多的困难与挑战。必须通过多种途径加强高校党委全委会的建设与创新,特别是要充分利用高校快捷方便的网络资源,形成全委会发挥作用的独特优势。

抗甲状腺药物和^(131)Ⅰ对Graves病人免疫系统的影响

Graves 病是甲亢中最为常见的一种类型。已证实本病是一种自身免疫性疾病,患者体内存在着多种针对甲状腺内各组分的自身抗体。应用抗甲状腺药物和^(131)Ⅰ治疗后,可引起免疫学方面的改变。本文简介这两种治疗方法对 Graves 病人细胞免疫和体液免疫的影响。

联合应用错配PCR和交替延伸PCR法提高抗TNFα抗体亲和力

目的 :通过突变方法提高抗TNFα单链抗体pscTNF的亲和力。方法 :以pscTNF质粒为模板 ,应用错配PCR构建突变抗体库 ,筛选亲和力得到改善的变种 ,再以所获变种为模板 ,用交替延伸PCR技术 ,再次构建突变库 ,筛选活性得到改良的克隆。以斑点ELISA方法及硫氰酸盐洗脱ELISA法评估其亲和力的改善。结果 :从错配PCR抗体库中筛选得到 7个活性有所增强的变种 ,再通过交替延伸PCR使这 7个变种的突变位点交换重组 ,获得了亲和力进一步提高的克隆。结论 :联合应用错配PCR和交替延伸PCR法可提高单链抗体亲和力。

基因工程抗体的体外亲和力成熟

抗体库技术的出现使得改造基因工程抗体更方便、更有效。利用不同方法在抗体基因中引入突变, 构建抗体突变库,通过筛选过程在体外模拟抗体生成过程,进行体外亲和力成熟。

论高校校报的内在矛盾与发展趋向

高校校报是学校的一面镜子,承担着极为重要的宣传和报道任务。校报本身具有宣传和新闻的双重属性。在互联网普及之前,校报宣传性和新闻性之间的矛盾较为突出,制约了校报的发展,影响了宣传报道的效果。校园网络传媒在迅速成长的过程中,与校报取得了很好的融合,化解了校报发展过程中的一些突出矛盾,使校报的发展呈现出三个明显的趋向,即由"校内宣传教育"转向"塑造学校公众形象"、由"普通的新闻报道"转向"经过精心策划的专题报道"、由"缺乏新闻评论"转向"新闻评论持续增多"。

276例很低TSH值的病因分析

２７６例很低ＴＳＨ值的病因分析汪保安，石金升，汪寅章，陆思珍，郭爱岩，张哲庆促甲状腺激素（ＴＳＨ）水平，特别是它低于０．１５ｍＩＵ／Ｌ时是诊断甲亢的最重要指标，但某些甲亢病人血清ＴＳＨ也可低到０．１５ｍＩＵ／Ｌ以下。为了进一步明确这种很低ＴＳＨ水平的...