人脐带源间充质干细胞体外成脂、成骨、成软骨诱导分化

目的 体外分离培养脐带来源间充质干细胞,确定其向脂肪、骨、软骨细胞的分化能力.方法 取新鲜的脐带组织,剔除脐动静脉,剩余部分剪成极为细小的组织块,0.2%Ⅱ型胶原酶37℃静止消化17 h,用含10%胎牛血清的达尔伯克改良伊格尔培养基/Ham＇s F12培养基终止消化,培养3 ~ 5 d后得到较为均一的贴壁细胞.取第3代细胞做流式检测,并定向诱导分化,14 d后成脂、成骨染色鉴定,21 d后取诱导分化的细胞团做冰冻切片,阿尔法蓝染色软骨鉴定.结果 体外培养的间充质干细胞高表达CD29、CD13、CD90、CD105、CD44等间充质细胞标志物,不表达CD34、CD45、人类白细胞抗原DR等造血细胞标志物;诱导分化后油红O染色、冯库萨染色均为阳性,冰冻切片阿尔法蓝染色呈明显阳性.结论 人脐带间充质干细胞在体外能够培养并定向分化为脂肪、骨、软骨细胞.

超顺磁性氧化铁标记神经干细胞及对其生物学特性的影响

背景:细胞标记与核磁共振联合,可无创性活体标记移植的神经干细胞存在部位、存在方式及其一些生物学特性。目的:观察超顺磁性氧化铁体外标记人神经干细胞的效果。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-12/2007-06在解放军海军总医院儿科实验室完成。材料:流产人胚胎由解放军海军总医院提供。超顺磁性氧化铁,Lot number97060601,为Advanced magnetics,inc.American产品。方法:取人胚胎脑海马组织,机械法分离单细胞悬液,加入含表皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的神经干细胞培养基体外培养。取11.2g/L超顺磁性氧化铁,用神经干细胞培养基稀释成28mg/L后,加入1.0mg/L多聚赖氨酸8μL混匀,制成超顺磁性氧化铁-多聚赖氨酸复合物的标记培养基。取增殖活跃的神经干细胞球,机械吹散制成浓度为1×109L-1的单细胞悬液,加入等体积的含超顺磁性氧化铁的无血清培养液。1周后撤除各种细胞因子,添加体积分数为5%的胎牛血清诱导神经干细胞分化24h。主要观察指标:普鲁士蓝染色鉴定标记阳性率,免疫荧光染色检测分化细胞胶质纤维酸性蛋白和神经丝的表达。结果:超顺磁性氧化铁标记的神经干细胞球颜色微黄,与未标记细胞比较,其克隆形成的速度并没有减慢。经超顺磁性氧化铁标记20h后,神经干细胞胞浆中含有蓝色铁颗粒,阳性率达90%。诱导后超顺磁性氧化铁标记的神经干细胞胶质纤维酸性蛋白、神经丝均呈阳性表达。结论:在体外超顺磁性氧化铁能够高效标记神经干细胞,且标记后不影响其生物学特性,仍可以正常扩增和定向分化为神经元、星形胶质细胞。

自体与异体脂肪间充质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死的比较研究

目的比较自体与异体脂肪间充质干细胞(ADMSCs)对大鼠急性心肌梗死(AMI)心脏结构以及功能的影响。方法 Lewis雄性大鼠通过结扎左冠状动脉前降支制备急性心肌梗死模型。45只大鼠随机分为模型组(n=15)、自体ADMSCs移植组(n=15)、异体(相同周龄的BN大鼠)ADMSCs移植组(n=15)。AMI模型制作成功1h内将氯甲基苯甲酰胺荧光染料(CM-Dil)标记的第3代脂肪间充质干细胞2×10~6个分三点植入大鼠心肌内,模型组仅注射等量的PBS(0.1ml)。细胞移植后4周进行大鼠心功能检测和免疫荧光、Masson染色等鉴定。结果细胞移植后4周,与模型组比较,两个细胞治疗组左室射血分数明显增加,左室收缩末内径和舒张末内径明显降低(P<0.05),胶原沉积分数明显降低(P<0.05)。与异体ADMSCs移植组比较,自体ADMSCs移植组左室射血分数增加,心肌梗死区新生毛细血管增加,梗死区心肌组织胶原沉积分数降低(P<0.05)。结论自体ADMSCs较异体ADMSCs能够更好地促进梗死区血管增生,通过降低局部胶原沉积、减轻AMI后心肌纤维化程度而抑制心肌梗死后的胶原重构,修复受损心肌组织,改善心脏功能。

骨髓间充质干细胞移植治疗小儿重度脑性瘫痪的疗效观察

目的观察自体骨髓间充质干细胞移植治疗重度脑性瘫痪儿童的临床疗效。方法对50例重症脑性瘫痪患儿进行骨髓间充质干细胞移植,移植前、后6个月进行自身对照,比较患儿粗大运动和综合功能的进步程度,并随访移植后0、1、3、6、12个月患儿一般情况。结果 50例患儿自体骨髓间充质干细胞培养均成功。移植后6个月失访1例,至12个月失访4例,余46例完成观察。移植后6例患儿在手术后3～5 d即出现显著临床改善,大部分患儿在移植后3个月左右运动能力进步,6个月之后进步幅度减缓。移植前6个月综合功能评估进步程度为(19.14±9.82)%,移植后6个月为(28.49±10.52)%,移植后进步显著大于移植前(P=0.001),其中以运动和认知改善明显。粗大运动功能评估总百分比从移植前的(23.80±10.64)%,上升到移植后(27.31±11.72)%,平均每月上升(1.05±0.49)%,显著大于移植前6个月进步幅度(P=0.001)。结论自体骨髓间充质干细胞移植对康复治疗效果不佳的重症脑瘫患儿有明显临床改善作用,能够有效促进患儿各功能区的发育。

高压氧对移植的外源性人神经干细胞体内神经元分化的影响

目的观察缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠移植人神经干细胞(hNSCs)后高压氧(HBO)对外源性hNSCs体内神经元分化的影响。方法新生7d的SD大鼠HIBD模型制作后3d经脑室移植hNSCs,并分成移植组(n=8)和移植+HBO组(n=8)。移植+HBO组于移植后1h进行HBO治疗,每日1次,10d后断头取脑,应用免疫荧光方法检测植入细胞在皮层、海马神经元分化情况。结果移植后10d,植入细胞分化形成神经元,分布以海马、皮层为主。统计学结果表明,在皮层,两组分化的神经元计数差异无显著性(P>0.05);而在海马区,移植+HBO组神经元分化存活的数量较单纯移植组多,差异有显著性(P<0.05)。结论HIBD新生大鼠移植hNSCs后HBO促进海马区外源性hNSC向神经元的分化。

高压氧对外源性人神经干细胞移植治疗损伤脑组织神经元病理状态的改善效应

目的:研究证明高压氧治疗能明显减轻缺氧后宿主脑区深部水肿,减少内源性神经元变性与坏死,并增加围产期鼠新生神经元数量与碱性成纤维生长因子活性。实验拟进一步观察缺氧缺血性脑损伤大鼠移植人神经干细胞后予高压氧治疗对脑组织神经元病理改变的影响。方法:实验于2007-04在解放军海军总医院完成。①细胞来源及动物:经医院伦理委员会授权,孕妇知情同意下留取孕12周流产的人胎儿脑组织。新生7d龄SD大鼠20只,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法:取胎儿脑组织,在无菌条件下培养扩增并制备成人神经干细胞单细胞悬液。20只大鼠均建立缺氧缺血性脑损伤模型,3只死亡,剩余鼠随机数字表法分为2组,细胞移植+高压氧组9只,单纯细胞移植组8只。造模后3d,两组大鼠均于左侧侧脑室进行细胞移植,注射位点以前囟为参照点,AP=-1mm,ML=-1.5mm,DV=-4.0mm,缓慢注入2×106L-1细胞悬液5μL。移植后1h,将细胞移植+高压氧组大鼠放入高压氧舱内,给予高压氧通气,升压及降压过程各15min,最终达压力为1.8个绝对大气压,稳压60min,1次/d,连续10d。两组大鼠麻醉后断头取脑,制备组织切片。③实验评估:免疫荧光法检测神经干细胞巢蛋白的表达、人神经干细胞植入后神经丝蛋白表达及其向神经元分化情况。尼氏染色检测移植后脑组织皮质、海马神经元形态、结构的变化。结果:移植过程中细胞移植+高压氧组有1只鼠因麻醉死亡,高压氧通气过程中没有动物死亡。①人神经干细胞的鉴定:人胎儿脑组织体外培养12d获取生长旺盛的人神经干细胞小集落,即神经球。倒置显微镜下观察可见每个小集落为数十个细胞构成,细胞折光性强,周边有清晰的光晕。免疫荧光标记大部分活细胞表达巢蛋白。②人神经干细胞植入后神经丝蛋白表达及其向神经元分化:植入后10d,两组在皮质及海马区均可见神经丝蛋白阳性细胞,即植入细胞分化形成的神经元,其细胞形态与宿主内源性细胞相似。③神经元尼氏染色:两组大鼠均没有发现肿瘤形成。移植后10d与单纯细胞移植组相比,细胞移植+高压氧组海马及皮质区组织细胞水肿程度明显减轻,且海马CA1区、CA3区、齿状回神经元排列更整齐,组织结构更完整。结论:缺氧缺血性脑损伤新生大鼠移植人神经干细胞后,高压氧治疗可减轻损伤易感区组织细胞水肿程度,并使海马区神经元结构更加完整,推测有可能促进细胞的成活、迁移及分化。

粒细胞集落刺激因子联合神经干细胞移植治疗重度缺氧缺血性脑病疗效分析

目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)联合神经干细胞(NSCs)移植治疗新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)的疗效,为临床更有效的治疗HIE提供理论基础。方法新生7 d的SD大鼠建立重度HIE模型后,分为对照组、G-CSF组、NSCs组和G-CSF+NSCs组。G-CSF组在建模后1 h皮下注射G-CSF 50μg/(kg·d),共5 d;NSCs组在建模后第2天经脑室移植NSCs;G-CSF+NSCs组则在每天注射G-CSF的基础上进行NSCs移植;对照组注射等量生理盐水。在建模1、2和4周后通过脑重和mNSS评分分析治疗效果,并在建模4周后对大鼠脑组织行冰冻切片进行病理学分析。结果建模1、2和4周后,对照组大鼠的脑重明显低于其他三组,且4周后NSCs组、G-CSF+NSCs组大鼠脑重高于G-CSF组,差异均有统计学意义(P<0.01)。建模1、2和4周后,对照组大鼠mNSS评分显著高于其他三组;建模2、4周后,G-CSF+NSCs组大鼠mNSS评分低于G-CSF组,差异均有统计学意义(P<0.05)。病理检查显示,G-CSF+NSCs组神经细胞排列最整齐,未见变性坏死的神经细胞。结论单独G-CSF或NSCs移植均可减轻HIE的神经损伤症状,联合治疗可取得最佳疗效。

人神经前体细胞移植治疗低功能型孤独症初步探讨

目的观察人神经前体细胞(human neural precursor cells,hNPCs)移植治疗低功能型孤独症的安全性及疗效。方法对9名低功能型儿童孤独症患儿经脑室移植人神经前体细胞。分别于手术前、术后1月、术后6月、术后1年采用孤独症行为评定量表(Autism Behavior Checklist,ABC)对移植患儿进行评估。结果移植后9例患儿中有8例患儿临床症状出现不同程度的改善。与术前相比,术后1个月,ABC总分及感觉、交往、运动、语言、自理等五个因子得分,统计学分析无显著性差异;术后6个月,社交因子得分出现显著性差异(P<0.05);术后1年,ABC总分、交往因子得分及语言因子得分均可见显著性差异(P<0.05)。患儿术中无一例发生手术相关不良反应及相关并发症,随访1年以上无远期不良事件出现。结论初步结果提示,经侧脑室穿刺hNPCs移植治疗低功能型孤独症是安全的并具有一定疗效。

免疫性血小板减少症患儿骨髓间充质干细胞与其他来源的间充质干细胞免疫调节作用的比较研究

目的比较免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)患儿与正常人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)及脐带来源间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)的性质及其对正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)分泌干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白介素-10(interleukin-10,IL-10)的调节能力。方法用密度梯度离心法体外分离培养16例ITP患儿和8例正常成人BMMSCs至5-6代,用酶消化法从10例健康胎儿脐带组织中分离培养UC-MSCs至5-6代。在培养过程中观察三种来源间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)形态,进行细胞表面分子及成脂成骨分化鉴定并用细胞增殖检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测三种MSCs的增殖能力。将上述三种MSCs用丝裂霉素(mitomycin C,MMC)处理后与植物血凝素(phytohaemagglutinin,PHA)刺激的PBMC按不同比例(1∶40,3∶40,9∶40)混合培养3 d,收集培养上清液。用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组共培养上清液中IL-10和IFN-γ的含量。结果三种MSCs有相似的细胞形态,UC-MSCs增殖速度最快,正常成人BMMSCs次之,ITP患儿BMMSCs最慢;三种MSCs有相似的分化能力。三种来源MSCs与PBMC以不同比例混合培养,随着MSCs比例的增加,PBMC分泌IL-10增加,在ITP患儿BMMSCs组中不同比例之间差异有显著性(P<0.05),而在正常人BMMSCs、UC-MSCs组中不同比例之间差异有非常显著性(P<0.01);随着MSCs比例的增加,PBMC分泌的IFN-γ减少,在ITP患儿及正常人BMMSCs组中不同比例之间差异有显著性(P<0.05),而在UC-MSCs组中不同比例之间差异有非常显著性(P<0.01)。在相同共培养比例条件下,三种MSCs刺激PBMC分泌IL-10和IFN-γ的量差异均无显著性(P>0.05)。结论 ITP患儿BMMSCs较其他两种来源的MSCs增殖速度慢,说明其体外增殖存在缺陷。但ITP患儿BMMSCs与其他两种来源MSCs对PBMC分泌IL-10、IFN-γ的调节具有相同的特点,即促进IL-10分泌,抑制IFN-γ分泌,均呈剂量依赖性,即三种细胞调节PBMC分泌IL-10及IFN-γ能力未见明显差异。

自体骨髓单个核细胞移植治疗重度精神发育迟滞儿童临床观察

目的观察自体骨髓单个核细胞（bone marrow mononuelearcell，BM-MNC）移植治疗重度精神发育迟滞（mental retardation，MR）儿童的临床疗效。方法海军总医院儿科自2011年1月2012年3月收治的重度MR患儿40例（年龄2～14岁），骨髓动员后进行BM-MNC分选，分别进行右侧颈动脉穿刺1次及腰椎穿刺3次行BM-MNC移植。每次移植的BM—MNC细胞数为l×10^6／kg。每例患儿对其进行术前6个月及术后6个月自身对照观察，采用家长随访量表，评估2个相同长度时间段内患儿智力、运动的发育状态。同时对移植术后1、3、6个月及1年患儿的发育情况进行追踪随访分析。结果40例中3例失访，余37例完成评估随访。其中，术后有明显进步19例，有效率为51．3％；患儿在术后3d至1个月逐渐出现不同程度的变化，持续至术后6个月后无再进步病例。随访量表进步值术前6个月为（4．69±4．33）分，术后6个月为（16．04±12．54）分，进步幅度术后较术前明显增加，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论自体BM-MNC移植安全可靠，能在短时问内改善重度MR患儿智力发育水平，移植及手术不良事件极其轻微。

纳入管理体系 注重过程控制

作为拥有六十多年历史的国立科研机构,长春光机所始终把档案工作纳入管理体系,注重档案质量的过程控制,扎实做好科技档案的管理与服务工作,为研究所的科技创新与改革发展提供了有力支撑和服务。机构设置及历史沿革长春光机所在成立伊始,档案工作就有相应管理部门负责。1952年建所时,由办公室负责各类档案管理;1958年成立独立资料室,负责科技档案管理;1969年科技档案划归科研处管理;1972年科技档案划归图书资料情报室管理;

骨髓间充质干细胞的培养和超顺磁氧化铁标记

目的探讨全血贴壁法培养成年大鼠骨髓间充质于细胞的可行性，寻找一种对间充质干细胞进行示踪的方法。方法取6～8周龄雄性SD大鼠胫骨、股骨，收集骨髓腔冲洗悬液直接培养，经多次换液、传代，免疫组化法检测CD34、CD44表达情况。以超顺磁氧化铁和P1代间充质干细胞共同孵育培养24h，普鲁士蓝染色评价标记效率，台盼蓝染色检验标记后细胞的活性。结果全血贴壁法培养的大鼠间充质干细胞贴壁，呈纤维细胞样生长，CD44阳性细胞比率为96％，不表达CD34。经超顺磁氧化铁标记后，普鲁士蓝染色标记效率为90％，标记后98％的细胞保持活性。结论全血贴壁法能成功培养大鼠间充质干细胞，超顺磁氧化铁可以安全、有效地标记间充质干细胞。

不同厚度神经球冰冻切片免疫荧光细胞化学染色结果的比较

目的探索适合免疫荧光细胞化学染色的神经球最佳冰冻切片厚度。方法选取悬浮培养10～12 d的神经球,制作厚度分别为4、7、10μm的冰冻切片。采用免疫荧光细胞化学染色比较神经球神经上皮干细胞蛋白(nestin)的表达和定位。结果培养10～12 d的神经球直径为200～250μm,状态良好,折光性强,呈圆球状,周边有毛刺。4μm的神经球冰冻切片制作较难,容易卷片,但细胞层次清楚,染色均匀,密疏适宜,可较清楚计数细胞。成像清楚。胞核清晰,可见较多nestin染色阳性的完整胞质包绕4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色阳性的胞核,能观察更多的细胞间细节。7μm切片较4μm切片制作容易,切片较平整,细胞层次不如4μm切片清楚,染色较均匀。所含细胞数较4μm多,可粗略计算细胞数。荧光拍照不能完全对焦,可见部分完整细胞形态。10μm的冰冻切片制作相对容易,切片平整,但细胞层次不清楚,堆叠严重,成像不清楚,难以看到完整细胞形态。结论 4μm厚度的神经球冰冻切片较适合进行免疫荧光细胞化学染色和分析。

自体骨髓间充质干细胞移植治疗唐氏综合征临床观察

目的探讨自体骨髓间充质干细胞移植治疗唐氏综合征患儿的有效性。方法海军总医院儿科自2012年11月—2014年11月收治的骨髓间充质干细胞移植的唐氏综合征患儿51例（年龄0.5-7岁）,骨髓动员后进行骨髓采集间充质分选,分别行右侧侧脑室穿刺1次及腰椎穿刺2次骨髓间充质干细胞移植。每次移植的细胞数为1×10^6/kg。每例患儿进行Gesell发育诊断量表评估,对术前6个月及术后6个月2个相同长度时间内发育速率进行自身对照观察。同时,对移植术后1、3、6个月患儿的发育情况进行追踪随访。结果 51例中1例失访,余50例完成观察。其中32例在术后1-6个月逐渐出现不同程度智力、语言、运动进步,术后6个月患儿细动作能、应物能、应人能进步月份值较术前6个月明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论骨髓间充质干细胞移植安全可靠,能改善唐氏综合征患儿智力和运动发育水平,且主要表现在情绪、细动作能、应人能及应物能的改善。

小鼠变应性鼻炎动物模型的建立与评估

建立和评价Balb/c小鼠过敏性鼻炎模型。方法 将40只雌性6周龄Balb/c小鼠随机分4组:空白组、模型1组(造模后24h)、模型2组(造模后2周)、模型3组(造模后4周),采用卵清蛋白(OVA)致敏法进行腹腔注射致敏和局部滴鼻激发。对动物模型进行行为学评分;对各组进行苏木精—伊红染色法(HE )染色观察鼻粘膜病理改变;酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血免疫球蛋白E(IgE)、免疫球蛋白G(IgG)、干扰素r(IFN-r)、白细胞介素-4(IL-4)水平。结果 滴鼻激发14天后模型组行为学总评分为6.27±0.88,大于5分,较空白组评分0.800.41明显增高,具有统计学意义(P<0.05);模型组鼻粘膜组织HE染色可见杯状细胞增多、组织水肿等改变;模型组外周血IgE、IgG、IL-4水平较对照组增高,IFN-r较对照组降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 通过OVA致敏可成功建立长期稳定的小鼠过敏性鼻炎动物模型,为今后过敏性鼻炎的研究提供了有效的模型参考。

体外标记CFSE对BV-2细胞活率的影响

探究荧光染料羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)在不同使用浓度和孵育时间下对BV-2细胞系的影响。方法:采用0、1、2、5、10μmol/L的CFSE标记BV-2细胞系,染料孵育时间分别为10、20、30min,采用流式细胞术检测细胞的阳性率和荧光强度,采用CCK-8法检测在孵育时间为10min的条件下不同浓度CFSE对于24h后细胞活率的影响;选出合适的浓度后CCK-8法检测该条件下的最佳孵育时间,结果:随着CFSE标记浓度提高,细胞标记率也随之提高,而CFSE孵育时间的延长对细胞标记率无明显改变且使细胞活率下降,孵育20和30min对细胞活率有影响(P<0.05),在细胞标记率接近100%后,提高CFSE的浓度,对细胞的活率也有影响,10μmol/L浓度的CFSE孵育10min就降低了细胞的活率。因此,在本研究实验条件下,体外标记浓度5μmol/L并孵育10min可能是CFSE染料标记BV-2细胞的最适条件。

脂肪间充质干细胞移植改善急性心肌梗死大鼠心功能

目的探讨自体与异体脂肪间充质干细胞(ADMSC)移植对急性心肌梗死(AMI)大鼠心功能的影响。方法分离BN大鼠和Lewis大鼠ADMSC,将培养的第3代的ADMSC用氯甲基苯并胺二烷基碳花青(CM-DiI)标记。雄性Lewis大鼠45只随机分为对照组、自体细胞移植组(移植自体ADMSC)、异体细胞移植组(移植BN大鼠ADMSC)。结扎大鼠左冠状动脉前降支制备AMI模型,经心内膜将标记后的ADMSC注入大鼠梗死心肌及其周边部位。ADMSC移植后7 d,免疫荧光技术检测CD4^+ T淋巴细胞、 CD8^+ T淋巴细胞和CD68^+巨噬细胞浸润情况; ADMSC移植后7、 14、 28 d,比较移植细胞存活率;细胞移植后28 d,超声心动图检测大鼠心功能,免疫荧光技术检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达观察移植细胞附近血管生成情况。结果经CM-DiI标记的细胞阳性率近100%;细胞移植后7 d,异体细胞移植组移植细胞周围可见淋巴细胞浸润和巨噬细胞增多,自体细胞移植组未见淋巴细胞浸润和巨噬细胞增加;与异体细胞移植组相比,自体细胞移植组细胞移植后7、 14、 28 d,移植细胞存活率明显增加,左心室短轴缩短率(LVFS)以及舒张期左心室前壁厚度(LVAWTd)增加,梗死心肌周边血管生成数量要明显增多。结论自体ADMSC移植对AMI大鼠心功能改善作用明显优于异体ADMSC移植。

冷藏保存时间对人少突胶质前体细胞的影响

目的评价冷藏保存时间对人少突胶质前体细胞生物学特性的影响。方法取生长状态良好的第3代人少突胶质前体细胞,按照4×10^(7) mL^(-1)细胞浓度重悬于含有10 g/L人血清白蛋白的50 g/L葡萄糖保存介质中,置于2~8℃冷链运输箱中保存24 h、48 h、72 h,与新鲜制备的少突胶质前体细胞(即冷藏保存0 h细胞)比较,评价冷藏保存时间对细胞活率、增殖能力、迁移能力、免疫表型及分化能力的影响。将冷藏保存24 h的少突胶质前体细胞移植到脑白质损伤大鼠侧脑室内,观察移植细胞在体内成髓鞘情况。结果与冷藏保存0 h细胞比较,冷藏保存24 h、48 h细胞活率没有显著差异,冷藏保存72 h细胞活率明显下降(P<0.05);通过CCK8法检测各组细胞增殖能力,结果显示冷藏保存24 h和48 h细胞增殖能力与冷藏保存0 h的细胞比较无显著差异,冷藏保存72 h细胞增殖能力显著下降(P<0.05);细胞体外迁移和分化结果显示,与冷藏保存0 h细胞比较,冷藏保存24 h的细胞迁移和分化能力无显著差异,冷藏保存48 h和72 h,细胞迁移和分化能力显著下降。体内实验证实,冷藏保存24 h的少突胶质前体细胞在体内可以分化为产髓鞘碱性蛋白的少突胶质细胞。结论人少突胶质前体细胞在含有10 g/L人血白蛋白的50 g/L葡萄糖保存介质中冷藏保存24 h,细胞活率、迁移和分化能力较好,因此,建议少突胶质前体细胞制剂冷藏保存24 h内移植,以确保最佳治疗效果。

不同保存介质对人少突胶质前体细胞生物学特性的影响

背景:保存介质直接影响干细胞活性以及细胞功能,目前国内外缺乏对人少突胶质前体细胞保存介质方面的研究。目的:评价临床常用的保存介质对人少突胶质前体细胞活率的影响。方法:在4℃条件下,将处于对数生长期的人少突胶质前体细胞分别在少突细胞完全培养基、含有1%白蛋白的生理盐水、生理盐水中放置24h,比较不同保存介质中的细胞活性以及继续培养后的细胞增殖能力。结果与结论:①细胞冷藏24h进行锥虫蓝染色,少突细胞完全培养基组、含有1%白蛋白的生理盐水组、生理盐水组细胞活率分别为83%,68%和51%,少突细胞完全培养基组细胞活率最高,单纯生理盐水组细胞活率最低;②细胞冷藏后继续培养1代,3种保存介质中少突胶质前体细胞的扩增能力有逐渐降低的趋势,少突细胞完全培养基组细胞增殖能力最高,其次是含有1%白蛋白的生理盐水组,单纯生理盐水中保存的细胞无法继续增殖。

两种干细胞经鼻移植治疗大鼠早产儿脑白质损伤

背景:干细胞移植对神经系统疾病具有显著的神经保护作用,目前的移植方式如动静脉移植、脑立体定位移植等均不适用于早产儿临床应用。目的:探讨人脐带间充质干细胞和人神经干细胞经鼻移植治疗大鼠早产儿脑白质损伤的可行性。方法:采用人脐带组织制备人脐带间充质干细胞,人胚胎脑组织制备人神经干细胞,通过Transwell法测定两种细胞体外迁移情况;将40只3 d龄SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、人脐带间充质干细胞移植组和人神经干细胞移植组,每组10只;除假手术组,其余各组行右颈总动脉离断并缺氧90 min制备大鼠早产儿脑白质损伤模型。移植组于造模后3 d经鼻滴注总量为1×10^6细胞,每侧鼻孔滴注5×10^5,双侧鼻孔分别滴注1次。造模后第7天采用免疫荧光染色检测脑白质MBP表达来鉴定脑白质损伤情况;移植后24 h抗HuNu免疫组化方法检测人脐带间充质干细胞迁移情况,CM-Dil荧光标记法检测人神经干细胞迁移情况。结果与结论:①造模后第7天早产儿脑白质损伤模型鼠患侧扣带、胼胝体和外囊与正常侧对比,MBP阳性面积减少(P<0.05),表明造模成功;②体外实验发现人神经干细胞和人脐带间充质干细胞迁移率一样;③经鼻移植细胞后24 h,人脐带间充质干细胞迁移至正常侧和损伤侧皮质、胼胝体和海马区域,人神经干细胞迁移至损伤侧皮质、胼胝体和海马区域,且人脐带间充质干细胞迁移量相对人神经干细胞较多;④结果表明,经鼻移植24 h后,人脐带间充质干细胞能够存活并向正常侧和损伤侧迁移,人神经干细胞能够存活并向损伤侧迁移,且人脐带间充质干细胞迁移较人神经干细胞体内迁移更广泛。