双McAb-ELISA夹心法检测HFRS病毒血凝素抗原的实验研究

作者采用抗HFRS病毒血凝素McAb和HRP标记的同一种McAb,建立了检验HFRS病毒血凝素抗原的双McAb-ELISA夹心法。经取代试验和抗原阻断试验均证明本法具有高度特异性,重复性也良好。用本法和血凝试验平行地检测了10批粗提HFRS陈株感染鼠脑的血凝素抗原,检出率分别为100％和70％,而前法滴度明显高于后法(GMT 1:506和1:26),有显著性差异(P<0.01)。用本法检验了10种从不同疫区不同宿主分离的HFRS病毒株的感染鼠脑或Vero—E6培养上清,结果均为阳性,虽血凝素抗原滴度高低不一,却再次说明不同HFRS病毒株血凝素之间有群共同性,因此本法在HFRS的临床诊断,流行病学监测,疫苗效价鉴定中都有实用价值,可取代血凝试验。

应用PCR技术特异扩增抗HFRS病毒血凝素McAb8F8V_H基因的克隆和序列分析

自本室近期克隆出抗肾综合征出血热病毒(HFRSV)血凝素单克隆抗体(McAb)3 G1重链可变区(V_H)基因,并进行了表达和鉴定后;我们又选用对野鼠型和家鼠型HFRSV感染鼠均具有保护作用的抗血凝素McAb 8F8株,采用聚合酶链反应(PCR)技术,克隆了8F8 McAb V_H基因。

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的研究

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈株感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素，特此粗制血箍素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G1与Sepherose 4B偶联的免疫吸附柱，获得纯化HFRS病毒血凝素抗原具有较高的血凝滴度和良好的免疫原性．用SDS—PAGE和Western-blot技术分析该纯化的血凝素抗原，并与同法纯他的正常鼠脑抗原比较，证明谊特异性血凝素抗原分子量为5×10^4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb，以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素，结果育10株McAb可阻断McAb3G1与其结合，其抗碌决定簇之间有部分相同或重叠，提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一蛋白上。以上结果表明，该SOK血疑素蛋白特性及结构均较复杂，尚待进一步研究。

用PCR鉴定大肠杆菌O157∶H7

根据大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７的编码ｅａｅ蛋白的ｅａｅＡ基因和大肠杆菌编码Ｈ７抗原的ｆｌｉＣ基因的核甘酸序列，合成了２对寡核苷酸引物，建立了一个检测大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７的ＰＣＲ方法。对１１株已知大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７（ＮＭ；无运动性）株和其他不同属的４２株已知肠道致病菌的检测结果表明，该方法只从大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７（ＮＭ）株的ＤＮＡ中产生预期的扩增产物，而从其他菌株的ＤＮＡ中未扩增出任何ＤＮＡ产物。该方法从基因水平直接确定大肠杆菌的血清型，特异性强，克服了以往血清学方法有非特异性反应的缺陷，为检测和鉴定大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７（ＮＭ）提供了一个新方法。

从长春地区牛肉和猪肉中检出产vero毒素大肠杆菌O157∶H7

用分离培养法、生化反应鉴定、胶乳凝集试验和聚合酶链式反应 ( PCR)对长春地区市售的 4 0份牛肉和 3 0份猪肉样品进行了调查 ,结果从 2份牛肉 ( 5%)和 1份猪肉 ( 3 .3 %)样品中检出了产 vero毒素大肠杆菌 O1 57∶

应用PCR检测产vero毒素大肠杆菌

根据产ｖｅｒｏ毒素大肠杆菌（ＶＴＥＣ）产生的ｖｅｒｏ毒素１（ＶＴ１）和ｖｅｒｏ毒素２（ＶＴ２）的基因序列，合成了２对寡核苷酸引物，建立了聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增方法。共对４株产ｖｅｒｏ毒素大肠杆菌和其他７个属的４１株肠道致病菌中的ＶＴ基因进行了检测，结果仅从用传统组织培养方法确定为ＶＴ阳性的产ｖｅｒｏ毒素大肠杆菌和痢疾１型志贺氏菌提取的ＤＮＡ中观察到了ＰＣＲ扩增产物，而从其他肠道致病菌提取的模板ＤＮＡ中未扩增出任何ＤＮＡ片段。用这２对引物可以清楚地区分产ＶＴ１、ＶＴ２或ＶＴ１／ＶＴ２的大肠杆菌。ＰＣＲ扩增方法的检测敏感性为３２０ｐｇ全细菌ＤＮＡ，用ｖｔ１引物可以检测出低达３２ｐｇ的全细菌ＤＮＡ。

肾综合征出血热病毒50kD结构蛋白的抗原位点分析

采用23株抗HFRS病毒McAb,以放射免疫沉淀及ELISA等试验,证实HFRS病毒的50kD蛋白为该病毒的核蛋白(NP)。用抗NP的McAb对经亲和层析纯化的NP以ELISA阻断试验进行抗原位点分析,结果表明该蛋白与一般有囊膜病毒的NP相比,有两点明显的不同。一是HFRS病毒的NP上不仅有组特异性抗原位点,而且有型特异性抗原位点,两者都至少分布在2个区域,这些抗原位点及其分布区域之间有部分重叠或比较靠近。二是HFRS病毒的NP上可能存在中和抗原及血凝抗原位点。

单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染乳鼠保护作用的研究

HFRS病毒陈株100LD_(50)腹腔感染新生乳鼠后24小时,腹腔分别接种24株抗HFRS病毒McAb,观察McAb对感染新生乳鼠的保护作用。结果发现,有5株McAb保护率为100％,1株McAb保护率为17％,另有7株McAb可使感染乳鼠的发病死亡时间推迟。取有明显保护作用的5株McAb分别接种感染后不同时间的乳鼠,结果在48小时内接种保护率均达100％;但随接种时间推后,保护率逐渐下降,感染后10天接种几乎无保护作用。此5株McAb保护作用均优于多克隆的免疫血清。应用不同稀释的McAb 3D8进行保护试验,发现保护效果与接种剂量密切相关。采用固定抗体,稀释病毒方法测得McAb 3D8对HFRS病毒陈株感染乳鼠的保护指数为5.8。

单克隆抗体对HFRS病毒两种粗制抗原相对亲和力的测定

采用ELISA测定32株抗HFRS病毒McAb对该病毒两种粗制抗原的相对亲和力,发现每一株McAb对两种病毒抗原的亲和力相同或基本相同,而各株McAb对同一病毒抗原的亲和力则有所不同,有些差别很大。按50％最大结合浓度分析,可分为3组。1组13株McAb为0.003～0.8μg/ml,Ⅱ组9株McAb为0.1～8μg/ml,Ⅲ组10株McAb为50～300μg/ml。这一结果为选择应用这些McAb提供了依据。

流行性出血热沙鼠肾细胞灭活疫苗的现场评价

为比较沙鼠肾细胞灭活疫苗3个连续批号间和2个免疫程序间的免疫效果与安全性,作者于1992年3～6月在驻陕某军校学员与战士1186人中进行整群接种.其中550人分为5个抗体检测组(含1个安慰剂组).随机决定疫苗接种的批次和程序,仅91-32批按两个程序(0、7、28 d和0,30,60 d)各接种1个组,余均按0,7,28 d接种.另638人仅做反应观察.完成全程免疫的接种率为93.5％.接种反应率按人次计算为0.6％,反应轻,无异常反应,疫苗是安全的.用抗血凝素单克隆抗体ELISA与ELISA捕捉法检测了血清特异性HI与IgM抗体.3批疫苗(0,7,28d程序组)血清抗体阳转率[HI阳性和(或)IgM阳性]平均为49.5%(35.7％～53.8％),HI抗体的GMT分别为1:208,1:211与1:156,阳转率与GMT均无显著差异,表明疫苗生产工艺较稳定,91-32批2个免疫程序间免疫效果未示明显差别.而安慰剂组各种抗体阳转率均为0％,说明疫苗是有效的.

抗肾综合征出血热病毒血凝素单抗重链可变区基因的克隆及序列分析(研究简报)

近年来,基因工程抗体的研究在国内外受到广泛重视,人们试图通过研制鼠/人嵌合抗体及小分于抗体来解决鼠McAb应用于人体而产生的抗鼠抗体反应。而制备基因工程抗体的关键是获得McAb可变区基因。肾综合征出血热(HFRS)迄今尚无特异疗法。本室自1984年以来研制了几十株抗HFRS病毒及其血凝素抗原的鼠McAb,其中有5株经体内、体外实验证明,对病毒感染小鼠具有较强的中和活性和保护作用,显示出良好的应用前景。本文报告其中一株3G1重链可变区基因的克隆及序列分析结果。

丙型肝炎高变区1合成肽对免疫小鼠脾淋巴细胞增殖作用的研究

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)高变区1(HVR1)模拟表位7肽(7P)在体外免疫小鼠后,小鼠脾淋巴细胞的增殖情况。方法20只小鼠随机分为实验组和对照组(n=10)。实验组小鼠皮下多点注射7P(500μl/只,含量5μg),对照组皮下多点注射等量生理盐水,单溶液细胞增殖法(MTS)检测前一天脾内直接注射7P(200μl/只,含量2.5μg)加强。收集脾淋巴细胞,分别加入不同浓度(6.25、12.50、25.0、50.0、100.0μg/ml)的7P,培养24、48、72h后光镜下观察细胞生长情况,应用MTS法检测小鼠脾淋巴细胞增殖活力,并计算增殖率。结果实验组小鼠脾淋巴细胞加入7P后第2天,镜下观察见细胞生长良好,可见散在的细胞增殖集落,对照组未见明显集落出现。与对照组比较,实验组经不同浓度7P诱导后,脾淋巴细胞的增殖活性均明显增强(P<0.01)。培养72h,7P诱导浓度为12.5μg/ml时,对脾淋巴细胞的增殖具有最佳促进效果,增殖率达到184.92%。在相同诱导浓度下,7P的最佳诱导效应随培养时间的延长而增加。结论合成的HVR1模拟表位7P在体外对免疫小鼠脾淋巴细胞具有一定的增殖作用。

应用McAb和免疫血清对不同HFRS病毒株感染乳鼠保护作用的比较

HFRS病毒陈茱、76-118株和R22株100LD_(50)分别感染新生乳鼠。感染后24h,经腹腔分别接种McAb(3D8、3G1、8F8、8G3和8G2)和免疫血清(陈株、76-118株和R22株),结果发现,这5株McAb对陈林和76-118株感染乳鼠100％保护,而对R22株感染乳鼠只有McAb8F8有25％保护,而其佘McAb均无保护。免疫血清的保护实验也表明,陈株和76-118株可以交互保护。上述结果提示,陈株与76-118株保护性抗原较一致,但R22株与前两株差别较大。

抗肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体8F8轻链可变区基因的克隆和序列分析

作者从抗肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体(单抗)8F8杂交瘤细胞提取RNA,逆转录成cD-NA,应用PCR快速克隆出8F8单抗的轻链可变区基因(V_L)。并对8F8单抗V_L的核苷酸序列和相应编码的氨基酸序列进行了测定和推导。

抗肾综合征出血热病毒单克隆抗体纯化制剂的免疫学活性鉴定

采用多种方法对两株经辛酸－硫酸按沉淀法纯化的抗ＨＦＥＳ病毒ＭｃＡｂ进行了免疫学鉴定．结果表明，纯化后的ＭｃＡｂ的免疫学活性（抗体效价）无明显改变，特别是仍保留了很高的中和活性、血凝抑制活性及对感染乳鼠的保护活性．纯化ＭｃＡｂ制剂置４℃保存。

1999年腹泻病源菌分型及药敏试验数据分析

1.材料和方法 1.1 材料卫生部兰州生物制品研究所生产的菌型鉴定血清。卫生部生物制品鉴定所生产的M-H培养基及药敏纸片,WHONET4药敏分析软件,标准菌株ATCC25922、ATCC25923、ATCC27853。本室自制的SS培养基。

单克隆抗体用于肾综合征出血热病原学及感染动物保护作用的研究

本项研究是基础与应用相结合的系列研究,主要包括以下五个方面的内容。 1.高特异性、高中和活性抗 HFRS病毒McAb的制备先后建立了89株稳定分泌抗肾综合征出血热(HFRS)病毒单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。(1)上述McAb的特异性各不相同,包括HFRS病毒组特异性的、亚组特异性的、