艾灸肺俞、膏肓俞治疗肺纤维化大鼠对E-cad、α-SMA、vimentin的影响

目的:动态观察艾灸肺俞、膏肓俞治疗肺纤维化大鼠E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)几种上皮-间质转分化(EMT)标志物的表达。方法:选用SD雄性大鼠44只,随机分为4组:正常对照组、模型组、艾灸治疗组、泼尼松治疗组。除正常对照组外,其余三组均采用博来霉素灌入气管复制肺纤维化模型,治疗组从造模后第1天开始分别艾灸及泼尼松灌胃治疗,在造模后第11天、第23天、第35天取材。采用HE染色、masson染色观察肺组织病理变化和采用免疫组化法检测E-cad、α-SMA、vimentin的表达。结果:艾灸组、泼尼松组与同时段模型组相比,肺组织病理程度明显降低,上皮细胞标记物E-cad表达升高,间质细胞标记物α-SMA、vimentin表达降低。结论:艾灸治疗能升高E-cad水平,降低α-SMA、vimentin水平,降低肺泡炎程度及延缓肺纤维化进程。

高脂饮食诱导的肥胖及肥胖抵抗小鼠肠道菌群元基因组的比较研究

目的比较高脂饮食诱导肥胖(DIO)小鼠及高脂饮食诱导肥胖抵抗(DIO-R)小鼠肠道菌群元基因组的差异。方法将40只C57BL/6J雄性小鼠适应性饲养2周后,随机分为正常组(10只)和高脂饮食造模组(30只),分别给予普通饮食和高脂饮食。造模8周后,按体重增量的不同,将高脂饮食组小鼠又分为肥胖组(DIO组,22只)和肥胖抵抗组(DIO-R组,8只)。搜集并提取3组小鼠粪便样本菌群基因组,采用Illumina公司的Hiseq2000分析样本的肠道宏基因组功能及物种组成。结果 DIO组小鼠肠道菌群在执行多糖代谢、氨基酸代谢、基因信息翻译、信号转导、细胞能动性多种功能的基因数与DIO-R组有差异,其余同DIO-R组无明显差异;两组的多项代谢功能及基因信息处理所对应的基因数均明显低于正常组。DIO组小鼠肠道变形杆菌门的相对含量百分比较正常组及DIO-R组显著增高;厚壁菌门的含量较DIO-R组升高,类杆菌门的含量则显著下降,类杆菌/厚壁菌的比值较DIO-R组明显下降;DIO-R组除变形杆菌门的含量低于正常组外,其余两组无明显差异。结论 DIO及DIO-R小鼠肠道菌群元基因组中的肠道菌群功能存在差异;DIO小鼠肠道菌群门级别与DIO-R小鼠有显著差异,两者与正常组相比,都处于代谢紊乱状态。

肥胖-肠道菌群-Toll样受体交互调控作用的研究进展

肥胖发病率逐年上升,已经成为全球性公共健康问题.肥胖的发生常伴有亚临床炎症表现,引起炎症水平升高与免疫功能紊乱,而这又与肠道菌群紊乱密切相关.肠道菌群与肠黏膜免疫构成动态平衡,其结构及功能异常均可引起机体免疫紊乱.肥胖性炎症反应的启动途径,涉及Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)活化、内质网应激与肠道菌群改变.其中,TLR4在感应肠道病原菌、诱导炎症与胰岛素抵抗进程中,扮演中心角色.另一方面,代谢、遗传与免疫等因素,整合性调控TLR功能.因此,我们从肥胖-肠道菌群-TLRs的复杂交互作用着手,阐释肠道菌群、肠道免疫与肥胖等代谢性疾病的高度相关性,以期发现这类疾病的新治疗靶点.

电针对食源性肥胖小鼠肠黏膜TLR4/MyD88信号通路的影响

目的:探究电针对高脂饮食诱导的肥胖小鼠肠黏膜TLR4/My D88信号通路的调控效应。方法:选取150只C57BL/6小鼠,适应性喂养1周后,随机选择15只作为正常组,余下135只饲养高脂饮食。8周后筛选出体重大于正常组均值20%的肥胖鼠50只,随机均分成模型组、电针7天组(EA-7组)、电针14天组(EA-14组)、电针21天组(EA-21组)、电针28天组(EA-28组)。电针组选择针刺天枢、关元、足三里及三阴交等四穴,得气后,接通电针仪治疗10min。观察各组小鼠体重、Lee's指数、生殖器周围脂肪重量的差异,及肠中段黏膜组织中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量变化。应用实时荧光定量(QPCR)法检测TLR4及其下游信号通路关键因子My D88基因表达情况,并通过免疫组织化学(IHC)观察肠黏膜TLR4蛋白分布变化。结果:治疗后电针组的体重、Lee's指数、生殖器周围脂肪重量显著低于模型组,肠组织IL-6、IL-10及TNF-α显著低于模型组;QPCR结果相对于正常组的TLR4(1.258±0.127)及My D88(1.497±0.241)基因表达情况,肥胖组肠黏膜组织中TLR4(1.479±0.256)基因表达明显增加而My D88基因(1.261±0.192)表达明显下降,电针干预后下调其过度表达;模型组IHC显示TLR4的光密度检测(0.1949±0.0040)显著高于正常组(0.1624±0.0180),电针后能够显著下调其蛋白密度。结论:电针通过调控TLR4/My D88信号通路,降低TLR4的基因表达及蛋白分布,降低低水平的炎症反应相关过程,达到治疗肥胖的目的。

化纤方对肺纤维化模型大鼠的肺系数及炎症因子MCP-1、IL-1β的影响

目的:探讨化纤方对博莱霉素造模的肺纤维化模型大鼠肺系数及血清炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响。方法:SD大鼠雌雄各半,随机分成空白对照组,模型组,阳性对照泼尼松组,化纤方组。除空白对照组外,其余3组均予博莱霉素制作肺纤维化大鼠模型,造模第2天起泼尼松组和化纤方组给予每日灌胃给药,分别于给药后7、11、23 d取材,分离肺组织并计算肺指数。ELISA法测定肺组织中炎症因子IL-1β及MCP-1的含量。结果:与空白对照组相比,模型组大鼠肺系数明显增加(P<0.05);与模型组比较,各给药组大鼠肺系数有不同程度的下降(P<0.01);化纤方与泼尼松比较,有统计学意义(P<0.05);模型组、泼尼松组和化纤方组血清中IL-1β含量较空白对照组明显升高(P<0.05),化纤方组血清中IL-1β含量较模型组明显降低(P<0.01);模型组和化纤方组血清中MCP-1含量较空白对照组明显增高(P<0.01或P<0.05),化纤方组血清MCP-1含量与模型组相比显著下降(P<0.01),但与泼尼松组比较明显增高(P<0.05)。结论:化纤方能够较好地控制模型大鼠肺系数的增长,并通过降低血清中IL-1β和MCP-1的含量抑制肺纤维化,对博莱霉素致大鼠肺损伤具有一定的保护作用。

艾灸“肺俞、膏肓俞”对BLMA5所致肺纤维化大鼠肺上皮细胞E-cad基因表达的实验研究

目的:探究艾灸"肺俞、膏肓俞"抑制肺纤维化进程的作用机制。方法 :将81只8周龄SPF级大鼠随机分9组:空白对照组;模型组(7 d组、11 d组、23 d组、35 d组);艾灸组(11 d组、23 d组、35 d组);阳性对照(泼尼松)组,每组9只。采用气管内一次性注入博来霉素复制肺纤维化模型。各组造模均于第二天进行治疗及干预。艾灸组交替艾灸双侧肺俞和膏育俞,3壮/穴,5 mg/壮,1次/d,10次/疗程。泼尼松组以泼尼松灌胃。空白组和所有模型组与艾灸组采取同样的抓取和固定,不给予任何治疗。共治疗3个疗程,疗程间休息2 d。各组在设定的时间窗口处死动物,采用定量PCR法检测E-cad基因的表达水平。结果:艾灸治疗组E-cad基因表达量比同期模型组高,尤以第35 d明显。艾灸35 d组(0.32±0.07)明显高于模型35 d组(0.10±0.04)(P<0.01)。艾灸组和泼尼松组无明显差异,统计学无意义(P>0.05)。结论:艾灸"肺俞、膏肓俞"可抑制肺纤维化的进程,其内在机制可能与升高肺上皮细胞E-cad基因表达有关。

β-连环蛋白在艾灸肺俞、膏肓俞治疗肺纤维化大鼠中的表达变化

目的:观察β-连环蛋白(β-catenin)在艾灸肺俞、膏肓俞治疗肺纤维化大鼠中的表达的变化情况。方法:选用SD雄性大鼠32只,随机分为4组:正常对照组、模型组、艾灸治疗组、泼尼松治疗组。除正常对照组外,其余3组均采用博来霉素(5 mg/kg)灌入气管复制肺纤维化模型,治疗组从造模后第1天开始分别艾灸及泼尼松灌胃治疗,在造模后第11天取材。采用HE染色、Masson染色观察肺组织病理变化;分别采用免疫组化法和Q-PCR法检测β-catenin的表达水平。结果:艾灸组与模型组相比,肺组织病理程度明显降低,β-catenin表达显著降低,艾灸组与泼尼松组相比无明显差异。结论:艾灸治疗能降低β-catenin表达水平,降低肺泡炎程度及延缓肺纤维化进程。

电针对高脂饮食诱导的肥胖C57小鼠血清瘦素及脂联素的影响

目的:观察电针对高脂饮食诱导的肥胖小鼠瘦素及脂联素的调控作用,探讨针刺减肥的机制。方法:C57小鼠随机抽取6只为空白对照组,其余54只用于肥胖造模,造模8周成功后将其随机分为模型组,针刺组和肥胖抵抗组,针刺组给予针刺三阴交、后三里、天枢、关元,其余组给予捆绑干预。观察小鼠体质量的改变,治疗结束后,检测附睾脂肪含量、Lee's指数,ELISA法测定血清中瘦素及脂联素的含量。结果:针刺组的Lee's指数与模型组相比有明显的下降,模型组的附睾脂肪湿重明显高于正常组,针刺组附睾脂肪湿重明显低于模型组(P<0.01),针刺组的瘦素和脂联素血清含量高于模型组,模型组低于空白组(P<0.01或P<0.05)结论:高脂饲料能够诱导部分C57小鼠发展为饮食性肥胖。电针对肥胖小鼠具有良好的减肥效果,并能够调节高脂饮食诱导的肥胖小鼠的瘦素及脂联素水平。

中药复方作为免疫增强剂的可行性分析及探讨

中药复方作为免疫增强剂是近些年国内佐剂研究的新方向,其研究策略强调的是通过多种中药成分的组合,更有效的提高机体的免疫功能。近年来,多种不同的中药复方作为免疫增强剂的研究日益增多,本文通过对中药复方作为免疫增强剂的提出、发展以及影响组方效果的因素进行了系统的认识,对中药复方作为免疫增强剂的可行性、发展前景以及更合理有效的开发途径具有重要意义。

聚乙二醇沉淀剂有效分离尿外泌体(英文)

尿外泌体是病毒大小的胞外囊泡,是非侵入性获得肾及泌尿生殖道细胞生理病理信息的重要靶标。聚乙二醇沉淀剂可经济高效地分离富集血清等外泌体,但未见用于尿外泌体富集的详细报道。本研究采用聚乙二醇沉淀剂分离鉴定尿外泌体,并对其RNA组分进行检测,以期建立一个经济、高效、简便的尿外泌体分离富集方法。采集10例健康志愿者晨尿20 m L,聚乙二醇沉淀剂分离尿外泌体。透射电镜观察到直径30~100 nm双层膜包绕的囊性小泡,中央有直径5~15 nm高电子密度区。Western印迹检测到外泌体标记蛋白CD63、CD9、TSG101、ADAM10和内标蛋白β-肌动蛋白的表达。纳米粒径仪测定粒子直径介于30~130 nm,并可见25.37 nm和95.07 nm二个粒子峰。qRT-PCR扩增得到β-肌动蛋白和RNU6 RNA产物带。上述结果表明,聚乙二醇沉淀剂可分离富集尿外泌体,该法简单、高效,不需要超速离心机等昂贵设备,且采用该法富集到的外泌体可用于后续蛋白质与核酸分析。该方法可望加速液体活检应用,尤其是肾及泌尿生殖道病变的无创检测。

肾纤维化患者尿沉渣及尿外泌体源RNA的比较分析

目的核糖核酸[如信使核糖核酸(mRNA)和微核糖核酸(miRNA)等]可在尿液标本中检测到,但尿液是复杂的混合物,包含尿沉渣和尿外泌体等组分.目前,仍不清楚哪种组分之中的核酸能够更直接准确地反映肾纤维化情况.方法我们对健康志愿者和肾纤维化患者,检测和分析了4个不同的肾纤维化相关核糖核酸(RNA),以及miRNA内参基因U6和mRNA内参基因β-肌动蛋白(β-actin)在尿沉渣和尿外泌体中的相对含量.结果定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测结果显示,在健康志愿者中,尿外泌体和尿沉渣中RNA水平相似.但方差齐性检验(F检验)结果显示,部分尿外泌体源RNA比尿沉渣中相应RNA含量更稳定,结果变异更小,且在健康志愿者和肾纤维化患者中这些相对稳定的RNA不同,前者为miR-29c、miR-21和E-钙黏附蛋白(E-cadherin),后者为miR-29c和E-cadherin.在肾纤维化患者,miR-29c水平在外泌体中含量高于尿沉渣中含量,差异有统计学意义(P<0.05).结论尿外泌体可能是一种比尿沉渣更好的肾纤维化生物标志物检测对象.肾纤维化患者尿外泌体源miR-29c可能是一项较好的检测指标.

芍药汤治疗溃疡性结肠炎的作用机制研究进展

溃疡性结肠炎是发生在结肠黏膜层的消化道疾病。中医学认为此病属"泄泻"、"痢疾"范畴,湿热内蕴是其发病机制之一。清热利湿之芍药汤作为中医经典方治疗湿热型溃疡性结肠炎,其治疗的相关信号通路,在近年来取得了一些研究成果,本文将近年来芍药汤治疗溃疡性结肠炎的作用与机制进行综述,旨在为今后复方研究提供新的思路。

中医动物模型研究进展

自20世纪60年代以来,中医动物证候模型的研究已有50多年.但其发展还不十分完善,尚存在许多问题.本文就中医证候模型的分类与评价做一个简单的总结,为动物证候模型的研究提供方法和依据.

冰片体外对RBMEC细胞Mdr1表达的调控研究

目的:观察冰片体外对RBMEC细胞Mdr1表达的影响并探讨其影响机制。方法:CCK-8法检测冰片对RBMEC细胞增殖的影响,QPCR法检测RBMEC细胞Mdr1表达水平。结果:冰片在体外能下调RBMEC细胞Mdr1a、Mdr1b的表达水平。结论:冰片能逆转RBMEC细胞对Mdr1的表达,其作用可能与下调RBMEC细胞P-gp的表达有关。

健脾益气针法对肥胖鼠瘦素、脂联素及脂肪细胞形态的影响

目的探讨健脾益气针法对肥胖鼠减肥效应的影响。方法选取60只C57BL/6小鼠,随机选取6只作为正常组,余鼠饲以高脂饮食。8周后,将肥胖鼠分成模型组、针刺14天组和针刺21天组。针刺组针刺天枢、关元、足三里及三阴交,施以补法干预,得气后接通电针。观察比较各组小鼠体重、Lee's指数及附睾周围脂肪湿重差异,运用ELISA法检测各组小鼠体内血清瘦素及脂联素含量变化,并通过HE染色观察附睾周围脂肪细胞形态的改变。结果模型组体重、Lee's指数及附睾周围脂肪湿重均明显高于正常组(P<0.01),针刺组显著低于模型组(P<0.01);模型组血清瘦素及脂联素含量显著低于正常组(P<0.01),针刺组血清瘦素及脂联素含量显著高于模型组(P<0.01);模型组附睾周围脂肪的体积显著大于正常组(P<0.01),针刺组脂肪细胞体积明显小于模型组(P<0.01);针刺21天组血清瘦素及脂联素含量明显高于针刺14天组(P<0.05)。结论健脾益气针法治疗肥胖,疗效确切,显著提高血清瘦素和脂联素水平,进而达到促进脂肪代谢、减肥消脂的效果。

营养性肥胖之免疫机制研究进展

肥胖已成为全球性重大社会健康问题之一。单纯性肥胖较公认的成因是能量吸收大于消耗,导致脂肪大量堆积,形成肥胖。单纯性肥胖的形成机制十分复杂,主要包括肠道菌群失调、能量代谢紊乱、长期低水平炎症反应、免疫功能相对低下等。笔者重点从免疫角度,综述国内外营养性肥胖患者免疫功能异常的研究进展,及其与内分泌、代谢等系统的复杂交互作用机制。发现肥胖在一定程度上与机体的免疫状态密切相关。后续将继续验证该理论,并且基于肠黏膜免疫寻找治疗肥胖新的靶点和方法,为肥胖等相关代谢性疾病的治疗提供新思路。

从上皮细胞-间充质细胞转分化视角探索化纤方系列验方与艾灸防治肺纤维化的生物学机制

上皮细胞-间充质细胞转分化是恶性肿瘤、器官纤维化及伤口愈合发生的基础,也是从生物学机制上认识中药验方与艾灸阻抑肺纤维化疗效机理的较佳视角;肺纤维化是国际医学界关注度极高的一重大病种,中药验方与艾灸在肺纤维化的防治上具有独特优势。世界著名科学杂志《自然》和国家自然科学基金委均引导医学科学界重视对上皮细胞-间质细胞转分化加强探索,国内西医界去年已启动该方面研究,而中医中药、针灸界至今却未行动。本文整合前期研究优势及工作基础,提出从上皮细胞-间质细胞转分化视角探索"化纤方"系列验方与艾灸防治肺纤维化效应机制的假说,以冀对未来中医进入这一研究焦点和热点奠定铺路石。