柔嫩艾美球虫(Eimeria tenella)体外细胞培养

试验比较了玻璃珠层析法、ＤＥＡＥ纤维素层析法、Ｇ３漏斗过滤法３种提纯柔嫩艾美球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ）子孢子的方法。柱高８ｃｍ、直径２００μｍ的玻璃珠柱用ｐＨ８．０的Ｒｉｎｇｅｒ′ｓ缓冲液作洗脱液提纯子孢子，回收率为６４．１％，子孢子洗脱高峰期集中，且易于无菌操作；柱高５ｃｍ的ＤＥＡＥ纤维素柱用ｐＨ８．０的甘氨酸缓冲液作洗脱液，提纯子孢子回收率为６３．２％，但严格无菌操作困难；Ｇ３漏斗法易无菌操作，方法简便，但提纯效果不理想，回收率为２５％，有少量杂质。结果表明，玻璃珠柱层析法可作为细胞培养用提纯子孢子的首选方法。提纯的子孢子接种于体外培养的鸡原代肾细胞，在ＭＥＭ细胞形成培养液（含１０％的犊牛血清）和ＭＥＭ细胞维持培养液（含５％的犊牛血清和５％的水解乳蛋白）体外细胞培养系统中，能够发育到卵囊阶段；Ｅ．ｔｅｎｅｌａ在体外细胞培养中的发育与鸡体内发育的过程和时间基本相似，都经过子孢子→第一代裂殖体→第二代裂殖体→配子体→卵囊等阶段。试验也表明，水解乳蛋白作为营养补充物是Ｅ．ｔｅｎｅｌａ子孢子发育到卵囊的重要因素。

体外培养伊氏锥虫变异抗原型的鉴定

用云南株伊氏锥虫克隆后体外培养，培养后于第１８～６０ｄ之间，每间隔一周通过免疫抑制鼠（ＣＹ鼠）克隆，建立了７个克隆群体（代号为０１８，０２５，０３２，０３９，０４６，０５３，０６０），并将其分别与７种克隆特异性抗血清（ＡＳ０１８～０６０）进行免疫溶解和中和试验。结果如下：①０１８和０２５能被ＡＳ０１８和ＡＳ０２５所溶解或中和；②０３２，０３９，０４６，０５３能被ＡＳ０３２，ＡＳ０３９，ＡＳ０４６，ＡＳ０５３所溶解或中和；③０６０只能被ＡＳ０６０所溶解或中和。根据上述结果，将７个克隆群体鉴定为３种变异抗原型（ＶＡＴ），按国际ＶＡＴ命名法，分别命名为ＹｕＴａｔ１·１，ＹｕＴａｔ１·２和ＹｕＴａｔ１·３。又以针对３个ＶＡＴ的抗血清ＡＳ０２５，ＡＳ０３９和ＡＳ０６０与超低温保存的、培养不同天数的克隆前群体进行免疫溶解试验，结果表明；体外培养的伊氏锥虫由混合的ＶＡＴ所组成，随着培养时间的不同，不同ＶＡＴ的比例发生改变。

药物对柔嫩艾美尔球虫内生阶段超微结构影响的研究

本文对柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)在鸡体内正常发育的超微结构和分别用三种抗球虫药物处理情况下超微结构的变化进行了观察和比较研究,注意到125ppm尼卡巴嗪(Nicarbazin)能引起裂殖生殖阶段的滋养体或初生裂殖体及裂殖子的线粒体、内质网等膜结构系统和核的异常变化;168ppm磺胺喹恶啉(SQ)对滋养体、初生裂殖体及裂殖子、大配子和卵囊壁的形成均有影响,对裂殖生殖阶段的影响主要表现为核膜的增生复制等一系列核的异常变化;对配子生殖阶段的影响表现为Ⅰ型和Ⅱ型卵囊壁形成颗粒(WFB_1和WFB_2)的异常变化;80ppm盐霉素(Salinomycin)对上皮内淋巴细胞(IEL)中的子孢子及粘膜中成熟裂殖子的影响表现为表皮的分离或破裂及胞浆内微线粒(MN)和多糖颗粒(PG)等的轮廓模糊。由药物引起的其他一些超微结构的异常变化也作了观察和描述。

重组牛白细胞介素-2增强小鼠对伊氏锥虫可溶性抗原免疫应答的研究

使用伊氏锥虫可溶性抗原免疫小鼠，研究了同时注射重组牛白细胞介素－２（ｒＢＩＬ－２）对ＮＫ细胞杀伤活性及特异性抗体水平的影响。试验鼠随机分为４组：Ａｇ组，ｒＢＩＬ－２组，Ａｇ＋ｒＢＩＬ－２组和ＰＢＳ对照组。以ＬＤＨ释放法和间接ＥＬＩＳＡ法分别检测脾ＮＫ细胞杀伤活性及抗体水平。结果表明，首次免疫后２４ｄ，Ａｇ组ＮＫ细胞杀伤活性为３１．６％，ｒＢＩＬ－２组为９９．６６％，Ａｇ＋ｒＢＩＬ－２组为９８．９８％，对照组为１９．７３％；抗体效价Ａｇ组为２４，Ａｇ＋ｒＢＩＬ－２组为２６。说明ｒＢＩＬ－２可显著提高ＮＫ细胞杀伤活性及促进抗体生成，提高宿主免疫力。

重组鸡白细胞介素-2对球虫感染雏鸡细胞免疫的影响

本实验旨在研究重组鸡白细胞介素－２对球虫感染雏鸡细胞免疫的影响。实验采用１４日龄伊莎蛋鸡２１０只，分为７组，其中一组为不感染对照组，三组为柔嫩艾美耳球虫感染组，卵囊感染剂量分别为１万／只、２万／只、５万／只，另外三组在感染卵囊１万／只、２万／只、５万／只的同时，肌注真核细胞表达的重组鸡白细胞介素－２ ０．４ｍｌ／只。感染后第０、４、６、９、１４、１８、２３、２８天剖杀取牌和盲肠扁桃体，分离淋巴细胞，分别用ＣｏｎＡ和ＰＨＡ刺激，采用ＮＩＴ比色法进行淋巴细胞转化试验，结果表明：在球虫感染后第４天（裂殖生殖阶段）和第６天（卵囊形成阶段），感染组脾和盲肠扁桃体淋巴细胞转化率均低于对照组，加重组鸡白细胞介素－２组脾和盲肠扁桃体淋巴细胞转化率高于感染组，相当或高于对照组水平。在感染后第９天和第１４天（恢复期）加重组鸡白细胞介素－２组脾淋巴细胞转化率高于对照组，加重组鸡白细胞介素－２组盲肠扁桃体淋巴细胞转化率相当于对照组。本实验结果说明：１．球虫感染可以抑制细胞免疫；２．加重组鸡白细胞介素－２可以克服球虫感染引起的免疫抑制。

斯氏艾美耳球虫细胞化学的研究

本文用组织化学技术对斯氏艾美耳球虫内生阶段和子孢子的细胞化学进行了研究。结果发现,多糖存在于第二代裂殖体、大配子体、大配子、合子、未孢子化卵囊和子孢子内。脂肪存在于第二代A型裂殖体、大配子、合子、未孢子化卵囊及子孢子内。整个内生发育阶段的虫体和子孢子均含有蛋白质。两型裂殖体、大、小配子体、合子和子孢子内均有Feugan反应阳性的DNA存在,而RNA存在于整个内生阶段和子孢子中。内生阶段虫体和子孢子均有ACP和SDH,然而ALP只存在于内生阶段,子孢子缺乏。

优素精~和盐霉素之笼饲药效试验

优素精￣（日本科研制药株式会社制品）和盐霉素（山东济宁抗生素厂制品）之抗球虫效力的比较试验。１４日龄艾维因肉鸡分４组；Ⅰ、盐霉素组；Ⅱ、优素精组；Ⅲ、感染不给药对照组；Ⅳ、不感染不给药对照组。每组６笼，每笼１０只（公母各５只）。优素精和盐霉素均以６０ｐｐｍ之浓度混合于饲料中，自由摄食。１６日龄时，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别经口感染Ｅ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ，Ｅ．ｍａｘｉｍａ和Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ混合卵囊，每鸡１０．１２×１０￣４。２３日龄（感染后７天）解剖全部鸡。依增重，饲料利用效率，血粪，卵囊排出量，球虫病变值和球虫病死亡率判断抗球虫效力。试验结果：优素精组的平均增重（２７０．０８克）和饲料利用率（２．０３）是试验各组中最优良的。比不感染不给药对照组优越，生物统计差异显著（Ｐ＜０．０１）。盐霉素组的平均增重（２６２．４２克）和饲料利用率（２．０８）虽高于不感染不给药对照组，但其差异不显著（Ｐ＞０．０５）。优素精组的球虫病变值比感染不给药对照组低４６．４０％，比盐霉素组低３６．２９％，卵囊排出量比感染不给药对照组低９７．２５％，比盐霉素组低２０．０４％。本试验证明，优素精有强烈的抗球虫药效，同时也证明有促进生长，加速增重?

兔肝球虫病的病理学研究

用纯种斯氏艾美耳球虫以6万/只孢子化卵囊的剂量人工感染30～40日龄青紫兰乳兔26只。感染第7d 开始出现死亡,第18～21d 达到高峰。感染第4d,剖检可见肝脏表面病灶,第9d 以后,组织学检查见肝细胞出现灶状坏死。感染的前2周,肝脏以变性和血细胞浸润为主要病变,之后,则以纤维组织和胆管系统和弥漫性增生为特征。自然感染病例也以纤维组织和胆管系统的弥漫性增生为主要病变,同时伴有肝细胞灶性坏死,说明斯氏艾美耳球虫慢性感染的最终结局可能是肝脏纤维化。

斯氏艾美耳球虫体外脱囊过程中孢子囊余体的形态学和组织化学研究

本研究观察了斯氏艾美耳球虫Eimeria stiedai子孢子体外脱囊过程中孢子囊余体的变化,并用组织化学技术研究了其化学特性。发现在子孢子脱囊的初期,即斯氏体离去和子孢子脱出之前,孢子囊余体已分散到整个孢子囊内,呈颗粒状,运动性强。第1个子孢子脱出后,余体颗粒密集于第2个子孢子周围,活动剧烈。脱囊完成后,余体颗粒向一起集中,在孢子囊钝端形成圆球状体,周围似乎有膜包围,此时巳失去运动性。组织化学研究证明,斯氏艾美耳球虫孢子囊余体含有多量的多糖、脂肪及蛋白质。同时还发现,孢子囊余体内有较强的酸性磷酸酶活性。

兔脑原虫病

兔脑原虫病顾有方沈永林汪志楷（南京农业大学动物医学院２１００９５）兔脑原虫病（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎｏｓｉｓ）是由兔脑原虫（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎｃｕｎｉｃｕｌｉ）寄生于兔脑和肾脏所引起的一种疾病。一般呈慢性、隐性或亚临床经过［１、２...

应用IHA检测实验感染伊氏锥虫山羊血清抗体的消长动态

早在1941年,印度的Kuppaswamy就通过研究认为山羊与牛都可以看作是伊氏锥虫的保虫宿主。本研究的目的是,应用间接血凝试验(IHA)来检测人工感染伊氏锥虫的山羊血液中抗体变化的规律,从而为山羊感染伊氏锥虫的血清学诊断提供必要的理论依据。

伊氏锥虫体外培养的研究

用鼠体继代的水牛伊氏锥虫进行体外培养。经试验证实,以RPMI_(1640)加入20mmolHEPES、2mmol L-谷氨酰胺、2mmol L-苏氨酸、1.5mg/mlD-葡萄糖、0.5％水解乳蛋白(LH)及10％灭活犊牛血清组成的CM_3培养基,并以牛睾丸原代细胞为饲养层细胞效果最好,在37℃下可较好地支持伊氏锥虫的生长,接种虫体起始浓度为10~5/ml左右,可于第2天增至10~6/ml,并可维持该浓度达5天之久,从第6天开始,虫体逐渐减少,虫体可在该系统中存活14天,将培养12天的培养物接种小鼠,对小鼠致病性不变,同时还测定了HEPES、D-葡萄糖、培养不同时间的细胞单层、虫体不同接种浓度等对锥虫体外培养的影响。

重组牛白细胞介素-2增强小鼠对伊氏锥虫可溶性抗原免疫反应的研究

实验使用伊氏锥虫可溶性抗原免疫小鼠,研究了重组牛白细胞介素-2(rBIL-2)对小鼠 NK 细胞杀伤活性及特异性抗体水平的影响.试验鼠随机分为4个组:Ag 组、Ag+rBIL-2组、rBIL-2组和 PBS 对照组.以LDH 释放法和间接 ELISA 法分别检测各组小鼠 NK 细胞杀伤活性和抗体水平.结果表明,首次免疫后24d·Ag 组 NK 细胞杀伤活性为31.6%,rBIL-2组为99.66%,Ag+rBIL-2组为98.98%,对照组为19.73%,抗体效价 Ag 组为2~4,Ag+rBIL-2组为2~6.说明 rEIL-2可显著提高 NK 细胞杀伤活性及促进抗体生成,提高宿主免疫力.

抗锥虫感染非特异性免疫研究

从人血清天然杀伤伊氏锥虫活性作用着手,深入研究在自然选择下人血清和锥虫的相互作用关系,为揭示人体抗锥虫感染非特异性免疫奠定基础。首先,用体内和体外试验检测表明,正常人血清对 T.b.evansi 的体外杀锥虫活性明显受血清浓度,孵育时间和温度影响.被人血清溶解前 T.b.evansi 有一系列形态变化,虫体肿胀、变圆、游离鞭毛明显化、表膜毛边化等.还发现不同个体人血清溶虫活性有显著差异,但与血型无关;

抗人血清的伊氏锥虫选育

初步研究了伊氏锥虫（Ｔ．ｂ．ｅｖａｎｓｉ）对人血清敏感性的变异。以不断递增的人血清处理在免疫抑制鼠体内连续传代的伊氏锥虫，经２０代的压力选择，获得了能耐受０．５ｍＬ正常人血清的抗性变异克隆。该变异克隆在无人血清压力的正常鼠体内经１０次连续传代，又恢复了对人血清的敏感性。结果表明，伊氏锥虫对人血清的敏感性或抗性均不稳定。

体外培养伊氏锥虫的可变表面糖蛋白的分离与鉴定

体外培养后分离出的3个伊氏锥虫变异群体,经环磷酰胺处理大鼠(CY 大鼠)扩增收虫。虫体纯化后超声波裂解,超速离心制成可溶性抗原,经 Sephadex G-50脱盐和 DE-52离子交换层析提纯可变表面糖蛋白(VSG)。经 SDS-PAGE 鉴定,所提纯的3个 VSG 分子量均为40500。用日立835-50型高速氨基酸组成分析仪分析,3个 VSG 均由 Asp,Pro,Thr,Ser,Glu,Gly,Ala,Cys,Val,Met,Ile,Leu,Tyr,Phe,Lys,His,Arg共17种氨基酸组成,但在组成比例上差异明显,尤其表现在 Pro,Met,Leu,Ile.Tyr 和 Clu。经 Western blot-ting 鉴定,提纯的3种 VSG 是3种不同的特异性抗原。

人血清中伊氏锥虫溶虫活性因子的鉴定

将伊氏锥虫在体外与人血清一起培养，虫体出现渐进性水肿，由蝌蚪形变成环形，最后崩解。将人血清注入感染鼠体内，可以清除体内虫体，使感染鼠得到保护。人血清对接种１０３个锥虫感染鼠的最小保护剂量为０．２ｍＬ，感染后５ｄ注入人血清，血中虫体数量逐日下降，至第１０天全部消失。对体外伊氏锥虫不同变异株，人血清均有同样的溶虫效果。经ＤＥＡＥ层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００过滤后，人血清中只有富ＩｇＭ的Ｆ－１有溶虫活性，而富ＩｇＧ的Ｆ－２和富ＨＤＬ的Ｆ－３均无溶虫活性，表明人血清对伊氏锥虫的溶虫活性与ＩｇＭ类天然抗体有关。另外，去补体的人血清体外溶虫活性明显减弱，而体内保护仍然有效。

理化因素对体外培养伊氏锥虫致弱的影响

本试验观察了理化因素（γ－射线、紫外线、低浓度杀虫药）对体外培养伊氏锥虫致弱的影响，结果如下：受γ－射线辐照的伊氏锥虫开始时存活数随辐照剂量的增加而减少，随后表现出无规律性，辐照剂量５万ｒａｄ以下对锥虫的存活影响较小，５～１０万ｒａｄ辐照后２ｄ锥虫的存活数明显减少，对小白鼠的感染性消失。伊氏锥虫受紫外线照射的存活曲线为“Ｃ”型，群体抗辐射不均一，平均致死剂量（Ｄ＿（３７））为波长２６５０Ａ的２０Ｗ紫外灯离样品４０ｃｍ处照射约２ｈ。虫体照射后根据体外跟踪观察，其存活数随照射剂量的增大而减少，照射了３ｈ和４ｈ第３天的活虫数近似１００条或不足１００条，对小白鼠的感染性均消失。用０．１μｇ／ｍｌ的苏拉灭和０．８μｇ／ｍｌ的贝尼尔两种低浓度杀虫药在体外对伊氏锥虫诱导４０ｄ仅造成药敏性的改变，未造成毒力减弱。

伊氏锥虫细胞工程苗的研究

试验采用体外培养技术,通过接受γ-射线和紫外线辐照的影响,定向选育突变虫株。首次对伊氏锥虫的细胞工程苗进行了研究。试验结果表明受γ-射线或紫外线辐照的虫体接种小白鼠后,潜伏期和病程与对照组相比差异极显著(P<0.01)。辐照虫体体外培养后接种小白鼠,潜隐期和病程均与对照组相似。经紫外线处理后辐照的伊氏锥虫转入用小鼠腹腔巨噬细胞作支持细胞的培养基内培养,培养7～10d使突变表型表达。然后加入嘌呤类似物继续培养2周,筛选出基因突变株,建立细胞系。小白鼠试验测得该细胞系LD_(50)为10^(-3.5)·mL^(-1),比强毒株毒力减少60倍,其免疫保护率达90%。