香榧花粉TgPUX10基因克隆与表达

以香榧(Torreya grandis‘Merrillii’)花粉RNA反转录的cDNA为模板,利用RT-PCR技术分离出一条类似拟南芥PUX10-like cDNA序列,命名为TgPUX10,并对该基因进行鉴定、克隆、表达分析。结果表明:TgPUX10基因的完整开放阅读框(ORF)为1437 bp,编码477个氨基酸残基。TgPUX10蛋白的氨基酸序列包含UBA、HP、UAS、UBX功能结构域。通过构建瞬时表达载体,并利用拟南芥悬浮细胞转化体系,发现TgPUX10蛋白定位于油体细胞器。在花粉萌发的0、2、4 d时,油体相关基因TgOLE及TgCLO的表达量呈下降趋势,TgPUX10的表达量显著上升,证明TgPUX10影响香榧花粉萌发,且参与油体的降解过程。TgPUX10在各品种香榧中表达较为保守。与其他品种相比,细榧(Torreya grandis‘xifei’)的花粉活性较高,萌发率达到35.5%。

基于16S rRNA基因分析虫草寄主蝠蛾的系统进化关系

为了解虫草寄主昆虫的系统进化关系,基于线粒体DNA(mtDNA)16S rRNA基因对7种虫草寄主蝠蛾、2种其他蝠蛾及其他科蛾类的系统进化关系进行研究.用ClustalX 2.1软件对11种蝠蛾16S rRNA基因进行序列对位排列,DAMBE软件分析基因序列的碱基组成及AT或GC偏斜性.用MEGA 7.0统计不同基因序列间的位点数目以及蝠蛾科蝠蛾种间遗传间距,并以果蝇(Drosophila yakuba)做外群,构建分子系统进化树.结果表明:11种蝠蛾的16S rRNA基因序列进行比对排列后,共1411 bp,其A+T的平均含量为85.3%,保守位点1054个,简约位点143个,可变位点310个.11种蝠蛾种间遗传距离为0.005~0.117,其中人支蝠蛾与阿尔泰蝠蛾和贡嘎蝠蛾的种间遗传距离均为0.005,Triodia sylvina与蒲氏钩蝠蛾遗传距离最大(0.117).分别以16S rRNA和16S rRNA联合COⅠ基因构建分子系统树,分析表明蝠蛾科虫草寄主蝠蛾间的关系较近,而与其他蛾类关系较远,其亲缘关系远近与其地理分布有一定关系,与形态学分类观点相吻合.以上结果说明,16S rRNA基因是适用于虫草寄主蝠蛾分类研究的一种有效标记基因.