智能化人体排泄护理仪KAP认知调查分析

[目的]了解民众对新研发的高新护理仪器——智能化人体排泄护理仪的认知现状。为其进一步研发和临床推广应用提供可资借鉴的实证依据。[方法]采用随机抽样的方法对浙江省内18岁以上具有行为能力的自愿参加本项目的公民进行问卷调查。[结果]75.8%的民众没听说过人体排泄护理仪,83.1%的民众想了解该护理仪;87.3%的人建议大小便失禁病人使用该机器;95.5%的调查对象对于人体排泄护理仪的推广持支持态度。[结论]虽然民众对护理仪认知不足,但对其生产及推广持积极的肯定态度。因此,建议加快进行该产品的设计与临床应用推广工作,尽早造福二便失禁病人,提高他们的舒适度和生活质量。

妊娠糖尿病大鼠胎盘、子宫和心脏组织中Nrf2蛋白表达和氧化应激水平分析

目的:比较妊娠糖尿病(GDM)大鼠和正常妊娠大鼠的胎盘、子宫和心脏组织中核因子E2相关因子(Nrf2)的表达和氧化应激水平的差异。方法:将20只妊娠SD大鼠随机分成正常妊娠组和GDM组。通过向妊娠大鼠腹腔内注射链脲佐菌素(STZ,45 mg/kg,i.p.)构建GDM大鼠模型,正常妊娠组则是给予等量的柠檬酸缓冲液。建模成功后,将妊娠30 d的大鼠麻醉处死,取胎盘、子宫和心脏组织,提取组织中的蛋白,采用酶联免疫吸附法检测胰岛素、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平,用硫代巴比妥酸(TBA)比色法检测丙二醛(MDA)含量,通过Western blot法分析胎盘、子宫和心脏组织中的Nrf2蛋白表达水平。2组间各指标比较采用两独立样本t检验。结果:GDM组大鼠胎盘和子宫中的胰岛素和MDA水平及Nrf2的蛋白表达量明显高于正常妊娠组,而GSH和SOD水平明显低于正常妊娠组,差异均有统计学意义(P<0.05),但在心脏组织中,这些指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:GDM大鼠的胎盘和子宫组织中产生胰岛素抵抗,且氧化应激与Nrf2蛋白表达均上升,而在心脏组织中无明显差异。GDM诱导的不同组织中Nrf2蛋白的表达和氧化水平上调可能存在组织特异性。

HtrA4在子痫前期孕妇胎盘组织中的表达及与滋养细胞缺氧的相关性

目的观测高温必需因子A4(HtrA4)在子痫前期(PE)孕妇胎盘组织中的表达情况,探讨其与滋养细胞缺氧和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的相关性。方法获取基因表达综合(GEO)数据库中PE孕妇胎盘组织芯片数据,分析差异表达基因(DEGs)及HtrA4表达水平。采用Western blot和qRT-PCR法验证HtrA4在PE孕妇胎盘组织中的表达水平。Bewo滋养细胞经HtrA4小干扰RNA(siRNA)(HtrA4 siRNA干扰组)或阴性对照siRNA(阴性对照组)转染后,分别采用MTT法和Transwell法检测细胞增殖和侵袭活性。按1×10^(6)个/孔接种细胞,在37℃、20%O_(2)、5%CO_(2)条件下常规培养48 h后,分为HIF-1α激活组、低氧组和对照组。HIF-1α激活组:采用含200μM HIF-1α激活剂氯化钴的细胞培养基,37℃、20%O_(2)、5%CO_(2)继续培养24 h;低氧组:37℃、1%O_(2)、5%CO_(2)继续培养24 h;对照组:继续常规培养24 h。另设立缺氧条件下的HIF-1α抑制组,即细胞经HIF-1αsiRNA干扰后,按1×10^(6)个/孔接种细胞,常规培养48 h,再在37℃、1%O_(2)、5%CO_(2)条件下培养24 h。分析HtrA4在缺氧条件下表达量及与HIF-1α表达的相关性。结果共得到13个DEGs。HtrA4在芯片数据和PE孕妇胎盘组织中表达水平均上调(均P<0.05)。与阴性对照组比较,HtrA4 siRNA干扰组侵袭活性下降(P<0.05),但各组间24、48和72h细胞增殖活性比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。与对照组比较,HIF-1α激活组和低氧组HtrA4和HIF-1α蛋白和mRNA表达水平均上调(均P<0.05)。与低氧组比较,HIF-1α抑制组HtrA4和HIF-1α蛋白和mRNA表达水平均下调(均P<0.05)。Pearson相关分析发现各组细胞HtrA4与HIF-1αmRNA表达水平呈正相关(r=0.87,P<0.01)。结论HtrA4在PE孕妇胎盘组织中表达上调,能促进滋养细胞的侵袭能力,其表达水平与细胞缺氧及HIF-1α表达水平相关,可能在PE发展中起重要作用。

乙型肝炎病毒B和C基因型S蛋白特异性CTL表位保守性分析

目的:分析国内流行乙型肝炎病毒(HBV)基因型S区基因编码蛋白的特异性CTL表位保守性,发现稳定且特异性的CTL表位。方法:设计HBV S基因特异性引物,克隆S基因并构建到pIRES载体;利用3种表位分析方法对HBV B和C基因型S区基因编码蛋白特异性CTL表位进行分析筛选,对候选CTL表位用BLAST搜索HBV蛋白库,分析候选CTL表位在HBV B和C基因型中的保守性。结果:成功克隆HBV S基因并构建真核表达载体;根据设定条件,利用生物信息学分析方法对S区基因编码蛋白进行分析共筛选到17个CTL表位,其中已经鉴定6个,未鉴定表位11个;保守性分析发现,在B和C基因型中具有较高保守性的有6个(>80%),均是未鉴定的表位,其余表位(包括6个已鉴定)的保守性较低。结论:国内流行HBV基因型间S区基因编码蛋白的特异性CTL表位存在较大差异性,共筛选到6个保守性较高的特异性CTL表位可用于进一步的免疫学研究。

人颗粒酶B融合蛋白的原核表达及其免疫血清的制备

目的在原核体系中表达人颗粒酶B(granzyme B,Gzm B)融合蛋白,并制备Gzm B免疫血清多克隆抗体。方法构建Gzm B原核表达重组质粒p ET32a-Gzm B,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达重组Gzm B(r Gzm B)蛋白,镍离子螯合亲和层析柱纯化表达产物。以纯化的r Gzm B蛋白为免疫原,皮下多点注射BALB/c小鼠,共免疫3次,分别于免疫后2、4、6周经小鼠尾静脉采血,分离血清,间接ELISA法检测免疫血清中Gzm B特异性Ig G抗体水平,并确定其抗体最大稀释度,免疫斑点试验检测免疫血清多克隆抗体对Gzm B的特异免疫结合特性。结果质粒p ET32aGzm B经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的r Gzm B蛋白相对分子质量为48 000;纯化的r Gzm B蛋白免疫小鼠血清中Gzm B特异性Ig G抗体水平随免疫时间延长至第4周达到高峰,随后维持一定水平;抗体最大稀释度为1∶1 600;r Gzm B免疫血清能够特异地结合Gzm B,显示了其免疫结合特性。结论制备了r Gzm B蛋白和Gzm B小鼠免疫血清多克隆抗体,为后续开展Gzm B的靶向杀伤、靶向检测等应用研究奠定了基础。

妊娠期高血压疾病患者中孕期血清中核心蛋白聚糖的表达及意义

目的讨论核心蛋白聚糖(Decorin,DCN)在中孕期孕妇血清中的表达与妊娠期高血压疾病发生的关系。方法采集本院门诊孕妇中孕期血清85例,其中妊娠期高血压疾病患者42例、正常孕妇43例。采用ELISA(酶联免疫吸附实验)法,检测血清中DCN的含量,将所得数据经SPSS 23.0软件分析处理后,采用二元Logistic回归模型对DCN浓度与妊娠期高血压疾病发生的相关性进行分析,并绘制ROC曲线检验DCN预测妊娠期高血压疾病的检验效应;根据孕妇患妊娠期高血压病情的程度分组,用Prism5软件绘制箱式图,独立样本t检验比较各组之间DCN浓度的差异。结果妊娠期高血压疾病组的DCN浓度为(0.60±0.19) ng/ml,高于对照组的(0.46±0.13) ng/ml,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析显示,DCN与孕妇患妊娠期高血压疾病的危险性呈正相关(OR=388.629,95%CI:12.281~12 297.82);ROC曲线结果显示,DCN对于诊断妊娠期高血压疾病具有较强的预测效果(AUC=0.746,95%CI:0.639~0.852,P<0.001),联合体质指数BMI诊断可以提高预测能力(AUC=0.806,95%CI:0.704~0.908,P<0.001)。结论孕妇血清中核心蛋白聚糖的表达水平对预测妊娠期高血压病的发生具有一定的临床参考价值。

人类白细胞表面抗原DR在呼吸机相关性肺炎患者中的表达及意义

目的探讨人类白细胞抗原DR(HLA-DR)的表达与呼吸机相关性肺炎(VAP)的发生与预后的关系。方法随机抽取本院重症监护病房患者57例,上呼吸机后采集静脉血检测单核细胞HLA-DR、白细胞计数(WBC)、C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT);采集VAP患者24 h内的最差参数进行APACHEⅡ评分,观察追踪至第28 d,根据其预后分为存活组和死亡组,分析2组各参数差异,两样本均数的比较采用t检验;采用Logistic回归模型对单核细胞HLA-DR与VAP发生的相关性进行分析。结果 VAP患者组的HLA-DR/CD14+水平为(48.21±4.278)%,明显低于对照组(64.49±6.019)%(P<0.05);Logistic回归分析显示,单核细胞HLA-DR与患者患VAP的危险性呈负相关(OR=0.976,95%CI:0.953~0.999),即HLA-DR每增加一个单位,患者患VAP的风险下降2.4%。结论人类白细胞抗原HLA-DR表达水平对判定呼吸机相关性肺炎的发生具有一定的临床参考价值。

弓形虫复合抗原ROP2-SAG1优势表位与人乳头瘤病毒16型晚期结构蛋白L1融合体的构建及其在真核细胞中的表达

目的构建弓形虫复合抗原ROP2-SAG1免疫优势表位(RSepitope)与人乳头瘤病毒16型晚期结构蛋白L1(HPV16L1)的融合体(RSepitope-HPV16L1),验证其在真核细胞中的表达。方法优化RSepitope基因序列,构建pc DNA3.1/RSepitope重组真核表达质粒。从T-HPV16L1质粒中扩增HPV16L1基因片段,构建pc DNA3.1/RSepitope-HPV16L1重组质粒。双酶切、PCR、测序鉴定正确后,将2个重组质粒分别转染至非洲绿猴肾细胞COS-7细胞,培养48 h后收集细胞,提取RNA,RT-PCR扩增相应的目的基因。Western blotting和间接免疫荧光实验检测重组蛋白RSepitope和RSepitope-HPV16L1在细胞中的表达。结果构建的重组质粒pc DNA3.1/RSepitope和pc DNA3.1/RSepitope-HPV16L1经PCR扩增和双酶切分别获得282 bp和1 500 bp片段,与预期结果一致,测序结果正确。RT-PCR结果显示,以2个重组质粒转染细胞的c DNA为模板,分别扩增到282 bp和1 500 bp的目的条带。Western blotting分析结果显示,以RSepitope免疫血清为一抗,重组蛋白RSepitope和RSepitope-HPV16L1分别在相对分子质量(Mr)约为10 000和65 000处出现特异性条带;以HPV16L1单克隆抗体为一抗,重组蛋白RSepitope-HPV16L1在Mr65 000处出现特异性条带。间接免疫荧光实验结果显示,以RSepitope免疫血清为一抗,重组质粒pc DNA3.1/RSepitope和pc DNA3.1/RSepitope-HPV16L1转染细胞内均观察到绿色荧光;以HPV16L1单克隆抗体为一抗,重组质粒pc DNA3.1/RSepitope-HPV16L1转染细胞内观察到特异性绿色荧光。结论弓形虫优势表位RSepitope与HPV16L1融合体构建成功,且可在真核细胞中表达。

弓形虫棒状体蛋白2和膜表面蛋白1复合抗原优势表位免疫原性研究

目的分析弓形虫棒状体蛋白2（ROP2）和膜表面蛋白1（SAGl）复合抗原免疫优势表位的免疫原性。方法利用生物信息学技术预测和筛选出弓形虫复合抗原ROP2-SAG1免疫优势T、B淋巴细胞表位组合，将优势表位相应基因片段克隆至pET32a（＋）载体并转化至表达感受态（大肠埃希菌Rosetta菌株）中诱导表达，通过离子螯合亲和层析柱（Ni—NTA）纯化表达产物，经SDS—PAGE鉴定表达产物纯化效果。以纯化的优势表位蛋白作为免疫原，皮下多点注射日本大耳兔，设pET32a（＋）载体蛋白和PBS为对照，以纯化的优势表位蛋白作包被抗原，ELISA法检测第0、2和4周免疫兔血清中表位特异性抗体IgG的产生时间及效价，免疫斑点实验验证免疫兔血清多克隆抗体的特异性。以纯化的优势表位免疫BALB／c小鼠，酶联免疫斑点分析技术检测免疫鼠脾细胞7干扰素产生能力。结果在原核表达体系中获得了相对分子质量为30000的优势表位融合表达产物。纯化的表位蛋白免疫大耳白兔血清中可检测到相应的表位特异性抗体IgG，其抗体水平随着免疫次数的增加而呈现逐渐升高的趋势，优势表位免疫组第2、4周兔血清抗体显著高于载体pET32a（＋）蛋白对照组（1．454±0．098比0．616±0．084，F=0．000，P〈0．05；2．299±0．224比1．580±0．192，F=0．112，P〈O．05），第4周的免疫血清多克隆抗体效价可达1：40960。免疫斑点实验证实多克隆抗体针对优势表位具有良好的特异性。原核体系制备的优势表位蛋白免疫鼠脾细胞受3种不同的CTL表位肽刺激产生的7干扰素水平，分别为表位肽1[（19．333±1．528）／10万细胞]、表位肽2[（40．333±1．528）／10万细胞]、表位肽3E（70．667±1．890）／10万细胞]，与PBS免疫对照组[表位肽1（1．033±0．150）／10万细胞、表位肽2（1．045±0．110）／10万细胞、表位肽3（1．041±0．120）／10万细胞]比较差异均有统计学意义（F值分别为0．284、0．000、0．284，均P〈0．05）。免疫鼠脾细胞受到优势表位中特异性CTL表位肽刺激后，γ干扰素产生水平显著升高，而且CTL表位联合Th表位的组合肽刺激（表位肽3），7干扰素产生水平分别显著高于单独的CTL表位肽刺激组（表位肽1和2，F值分别为5．796、0．000，均P〈0．05）。结论筛选的弓形虫复合抗原ROP2一SAGl免疫优势表位通过原核表达体系制备的重组表位蛋白，具有显著的免疫原性。