两步法细菌内同源重组制备重组单核细胞趋化因子-1腺病毒

目的两步法提高细菌内同源重组效率制备重组人单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)复制缺陷型腺病毒。方法制备含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌B J5183,H indⅢ酶切筛选未发生细菌内重组的菌落,并将其制备成感受态(B J5183pAdEasy-1)。RT-PCR法克隆得到MCP-1 cDNA片段,连接到pMD18-T载体后亚克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack上构建重组穿梭载体pAdTrack-MCP-1。Pm eⅠ酶切线性化并碱性磷酸酶处理pAdTrack-MCP-1,然后电穿孔转化感受态B J5183pAdEasy-1。PacⅠ酶切筛选得到正确重组的腺病毒载体pAd-MCP-1,将pAd-MCP-1转染入HEK293细胞中包装病毒颗粒,以PCR法鉴定。结果成功构建pAd-MCP-1,效率可达50%以上,pAd-MCP-1能有效转染HEK293细胞并在细胞内包装。PCR鉴定病毒携带有MCP-1基因片段。结论两步法细菌内同源重组构建重组腺病毒载体较常规电穿孔共转化效率高。成功制备重组腺病毒颗粒为进一步研究MCP-1的作用提供了重要的方法。

小切口负压封闭引流技术治疗较大急性肛周深部脓肿

目的评价传统切开引流术与应用负压封闭引流技术(VSD)治疗急性肛周深部脓肿的临床价值。方法回顾性分析72例急性肛周脓肿治疗的临床资料,分为传统治疗(A)组和VSD治疗(B)组。结果VSD组的脓肿复发率和肛瘘后遗症率低(P<0.05),治疗时间更短(P<0.01),治愈率更高(P<0.05)。两组无一例发生肛门失禁、肛管直肠狭窄及肛门变形等后遗症。结论VSD治疗急性肛周深部脓肿完好地保护了肛门括约肌功能及肛周正常组织,一次性治愈率高,疗程短,减少了患者每次换药和二次手术的痛苦,并发症少。

急性胆源性胰腺炎腹腔镜手术时机的探讨

目的探讨腹腔镜治疗急性胆源性胰腺炎(ABP)的手术时机。方法回顾性分析用腹腔镜治疗156例胆源性胰腺炎的临床资料。结果早期10例ABP急诊行腹腔镜手术,2例中转开腹;后期90例无胆道梗阻的ABP病例先行保守治疗,病情好转后2～3周行LC;56例有胆道梗阻的ABP,短期保守治疗(24～48h)无效,急诊行内镜取石(ERCP+EST+ENBD),2～3周后再行LC。并发症1例(LC术后胆道结石)。全组病例均治愈。结论腹腔镜治疗ABP安全、微创、疗效好,手术时机应遵循个体化原则:对无胆道梗阻的ABP病例宜先行保守治疗,待病情好转后2～3周行LC;若保守治疗2～3d无效,应急诊行腹腔镜手术。对有胆道梗阻的ABP,如短期保守治疗(24～48h)无效,则急诊先行内镜取石,2～3周后再行LC,以预防ABP复发。

基于生物芯片检测结直肠癌相关基因的甲基化

【目的】应用微矩阵基因芯片技术筛选结直肠癌甲基化基因。【方法】分别提取6对结直肠癌组织和癌旁正常组织DNA,超声破碎及甲基化DNA富集后与甲基化芯片(Nimble Gen human DNA Methylation 3×720K Cp G)进行杂交,杂交信号经扫描等处理后采用生物信息学对检测结果进行分析。并对筛选出来的基因进行验证。【结果】一共发现有2 296个高甲基化基因,其中有293个基因无文献报道。生物信息学分析显示,所有的甲基化基因随机分布在24对染色体上。聚类分析结果显示,某些在细胞分裂和肿瘤发生发展中起重要作用的生理过程中存在大量甲基化差异基因,如DNA修复,细胞周期和侵袭等。初步验证发现,Opmcl基因在结直肠癌组织及癌旁正常组织中存在甲基化差异。【结论】在结直肠癌中运用DNA甲基化芯片进行甲基化基因筛查是一种有效的方法。

介入腔内溶栓综合治疗下肢深静脉血栓形成35例分析

目的探讨下肢深静脉血栓形成(DVT)行介入腔内溶栓、抗凝综合治疗的疗效。方法35例DVT在数字减影血管造影(DSA)下放置下腔静脉滤器,腔内导管直接插入静脉血栓处,冲击、持续注入尿激酶溶栓,术后患肢末端静脉输注尿激酶溶栓,联合静脉抗凝综合治疗。结果35例患者,25例血栓完全消失,7例血栓部分残留,3例无改变;治疗结束时肢体健患侧周径差明显缩小;总治愈率达91.4%;与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。治疗过程中未出现严重并发症。结论采用介入腔内溶栓综合治疗DVT疗效好而且安全。

中厚层游离植皮联合负压封闭引流治疗地震严重创伤感染创面

目的探讨中厚层游离植皮联合应用负压封闭引流(vacuum sealing drainage,VSD)治疗地震严重创伤感染创面的疗效。方法对本院治疗的地震伤员中8例(7人)严重创伤感染创面,采取手术清创后予VSD引流,而后根据创面情况行中厚层游离植皮联合VSD法闭合创面。结果3例经1次VSD、5例经2～5次VSD后创面感染得到控制,达到植皮的要求。用中厚层游离植皮联合VSD法,4例1次,1例2次,3例3次植皮后,创面愈合。结论中厚层游离植皮联合VSD法对地震创伤伴开放性骨折、软组织缺损合并严重感染的创面的愈合有显著效果。

腹腔镜脾切除术治疗特发性血小板减少性紫癜

目的:探讨腹腔镜脾切除术治疗难治性特发性血小板减少性紫癜(ITP)的手术安全性及临床疗效。方法:回顾性分析42例难治性ITP患者行腹腔镜脾切除的临床资料。结果:42例ITP腹腔镜手术成功率95.2%,2例中转开腹,平均手术时间105min,术中失血平均40mL。全组均于术后12～24h内恢复胃肠蠕动,术后6h下床活动,平均住院时间5d。术后1周内血小板很快上升,治疗有效率95.2%。发生并发症3例,其中1例膈下积液,2例皮下气肿。38例得到随访,4例失访,3例复发,总有效率88.1%。结论:腹腔镜脾切除术治疗ITP安全可行,临床疗效显著。

腹腔内炎性肌纤维母细胞瘤5例分析并文献复习

目的 探讨腹腔内炎症性肌纤维母细胞瘤（IMT）的临床特点、病理学特征、治疗方案及预后因素.方法 对我院2008年6月至2013年5月诊治的5例腹腔炎症性肌纤维母细胞瘤患者的临床特点、病理形态、免疫组化及治疗方案进行分析并随访.结果 男性2例,女性3例,年龄31～74岁,平均年龄53.4岁.主要症状为腹部包块.5例均行手术切除后病理检查确诊.随访时间6月～5年,其中1例局部复发.肿瘤3例来源于大网膜,2例来源于肠系膜.免疫组化Actin、Vimentin、SMA多呈阳性,S-100、CD117、CD34呈阴性.结论 炎症性肌纤维母细胞瘤发病机制尚不明确,症状往往随着病变的切除而消失,手术切除是主要治疗方法.但其又具有一定的恶性倾向,部分患者术后复发,所以需要密切随访.

Tpl-2表达与结直肠癌发生发展的关系及意义

目的:研究Tpl-2在结直肠癌旁正常黏膜、结直肠腺瘤以及结直肠腺癌中的蛋白表达情况,及其与结直肠癌临床病理参数的关系,探讨Tpl-2在结直肠癌发生发展中的意义。方法:使用组织芯片及免疫组化方法检测Tpl-2在结直肠正常黏膜、腺瘤、癌组织中的表达情况,分析Tpl-2表达与结直肠癌的临床病理参数的相关性。结果:24例癌旁正常黏膜中,Tpl-2低表达20例(83.3%)、高表达为4例(16.7%);24例腺瘤组织中Tpl-2低表达17例(70.8%)、高表达7例(29.2%);96例癌组织中Tpl-2低表达31例(32.3%)、高表达65例(67.7%)。与正常和腺瘤比较,癌组织Tpl-2表达均明显增高(P<0.01)。腺瘤和正常黏膜中Tpl-2表达无显著差异(P>0.05)。在96例结直肠癌组织中,Tpl-2表达与N分期、TNM分期相关(P<0.05),与性别、年龄、身高体重指数(BMI)、肿瘤大小、分化程度、T分期、M分期以及K-ras基因突变状况无明显相关(P>0.05)。结论:Tpl-2与结直肠癌发生及疾病进展具有较密切的关系,可能是一个促癌因子。

磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶4在结直肠癌组织中的表达及其意义

目的探讨结直肠癌组织中丝氨酸257／苏氨酸261位点磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶4（pMKK4）表达与结直肠癌临床病理的相关性。方法通过构建组织芯片，用免疫组织化学染色方法检测并比较96例含不同分期的散发结直肠癌、24例结直肠腺瘤及24例正常结直肠黏膜组织中pMKK4的表达，结合临床病理资料进行分析。结果pMKK4在正常结直肠黏膜中高水平表达，在腺瘤和结直肠癌组织中表达水平有不同程度的下降（P〈0．01）。pMKK4表达水平与浸润深度、远处转移及肝转移相关（P〈0．05），与性别、年龄、分化程度、KRAS突变、淋巴结转移及TNM分期无明显相关（P〉0．05）。结论丝氨酸257／苏氨酸261位点pMKK4可能与结直肠癌的发生发展有关。其表达水平在结直肠癌组织中降低，且与远处转移相关。

腹腔镜手术对男性直肠癌患者术后性功能的保护作用

目的探讨经腹腔镜与开腹根治术对男性直肠癌患者术后性功能的影响。方法选取2010年4月至2013年5月收治的直肠癌手术患者116例,均为男性,其中接受腹腔镜直肠癌保留盆腔自主神经(PANP)根治术的患者69例(腹腔镜组),接受开腹PANP直肠癌根治术的患者47例(开腹组)。随访比较两组患者术后6、12个月的性功能情况。结果腹腔镜组患者术后6个月勃起功能障碍、射精功能张障碍者明显低于开腹组,差异具有统计学意义(c2=6.520、6.158,P=0.010、0.013);术后12个月勃起功能障碍、射精功能张障碍者明显低于开腹组,差异具有统计学意义(c2=6.144、3.985,P=0.013、0.045)。结论相较于传统开腹手术而言,保留植物神经的腹腔镜直肠癌根治术能有效降低患者术后勃起及射精功能障碍的发生率,提高患者术后的生活质量。

磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶4在结直肠癌组织中的表达及其与预后的关系

目的观察磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶4（phosphorylatedMKK4，pMKK4）在结直肠癌组织中的表达及其与预后的关系。方法通过构建组织芯片，用免疫组化染色方法检测343例含随访的结直肠癌组织中丝氨酸257／苏氨酸261位点磷酸化MKK4（$257／T261pMKK4）的表达，分析其与临床病理资料的相关性，并用Kaplan-Meier法进行生存分析，Cox比例风险模型进行单因素及多因素分析。结果pMKK4主要在结直肠癌细胞胞质中表达。阴性表达率为49．0％（168／343）、阳性表达率为51．0％（175／343）；其中，弱阳性表达率为26．8％（92／343），中阳性表达率为16．0％（55／343），强阳性表达率为8．2％（28／343）。pMKK4的表达水平与浸润深度（P=0．003）、分化程度（P=0．018）、淋巴结转移（P〈0．001）、远处转移（P〈0．001）、肝转移（P=0．039）及TNM分期（P〈0．001）相关。pMKK4表达呈阴性及阳性的患者平均生存期分别为（89．7±3．6）个月和（96．8±3．6）个月，相应的5年生存率分别为70．0％±3．6％、77．5％±3．3％。pMKK4表达强阳性的患者较中、弱及阴性的患者总体生存差异有统计学意义（Logrank=4．531，P=0．033）。Cox模型单因素分析显示pMKK4表达和总体生存有关（HR=0．785，P=0．035），且与无复发生存有关（HR=0．788，P=0．044）。Cox模型多因素分析pMKK4不是结直肠癌独立的预后因素。结论S257／T261pMKK4在结直肠癌中表达的下降与结直肠癌浸润深度、分化程度、分期以及转移相关，表达强阳性的患者比表达下降的患者有更好的预后，但其不是结直肠癌独立的预后因素。

表达人单核细胞趋化蛋白-1基因重组腺病毒的制备

目的制备表达人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)复制缺陷型重组腺病毒。方法RT-PCR法获得人肝组织中MCP-1cDNA片段,与T载体连接后亚克隆至腺病毒穿梭载体的巨细胞病毒启动子下游,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV-MCP-1,将其线性化后与pAdEasy-1共转化大肠杆菌B J5183,进行同源重组得到重组腺病毒载体。将重组腺病毒载体转染入包装细胞HEK293内制备复制缺陷型重组腺病毒,PCR扩增鉴定病毒颗粒。结果MCP-1重组腺病毒载体能有效转染HEK293细胞并在细胞内成功包装,5 d后可以观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,搜集的病毒经过PCR扩增得到特定MCP-1基因片段。结论MCP-1重组腺病毒载体及相应重组腺病毒颗粒的成功构建和制备,为进一步研究MCP-1的作用及应用MCP-1进行基因治疗奠定了基础。