以beta-tubulin基因为选择标记的淡紫紫孢菌遗传转化

[目的]建立稳定的食线虫真菌淡紫紫孢菌遗传转化体系,并获得插入突变体。[方法]介导的方法,以淡紫紫孢菌20-7的分生孢子为受体,将新构建的携带beta tubulin基因的质粒转化进入淡紫紫孢菌的细胞中,通过优化诱导乙酰丁香酮(AS)的浓度、诱导培养时间、农杆菌终浓度OD660值、共培养AS的浓度、共培养时间和共培养温度等因子,建立高效遗传转化体系,获得致病力不同的突变体。[结果]共培养过程中使用萌发孢子是成功建立淡紫紫孢菌遗传转化体系的必要条件;淡紫紫孢菌萌发的孢子与农杆菌EHA105在25℃共振荡培养48 h时,且在共培养阶段当乙酰丁香酮浓度为200μg·mL^(−1)(pH5.5)时转化效率最高,转化效率为1200~3200个转化子/106分生孢子,阳性抗性转化子比率为96%;转化子PCR表明,T-DNA已整合到淡紫紫孢菌的基因组中;Southern杂交验证表明,83.3%的转化子为T-DNA单拷贝插入;成功建立了可靠的淡紫紫孢菌的遗传转化体系,并从20个转化子中筛选到16个致病力变异的突变体。[结论]本研究成功构建了农杆菌介导的、以beta-tubulin基因为选择标记的淡紫紫孢菌高效遗传转化体系,并获得致病力变异的插入突变体,为淡紫紫孢菌的基因功能、致病机制研究及优良菌株选育奠定了基础。

根结线虫生物防治研究进展

介绍了目前根结线虫生物防治的现状 ,列举了一些真菌和细菌防治根结线虫的实例 ,指出根结线虫生物防治的途径是通过增强自然发生的拮抗物活性或引入其它的拮抗物来实现的。提出了根结线虫生物防治的一些急需解决的问题 ,如风险性评价、抑制线虫土壤的特性、天敌的流行学 。

华东地区根结线虫的调查

通过对华东地区 6个省 10 4个样本根结线虫区系调查 ,应用会阴花纹技术和酯酶同工酶技术将 65种植物上的根结线虫鉴定为南方根结线虫、花生根结线虫和爪哇根结线虫。南方根结线虫是华东地区的优势种群 ,3种线虫所占比例分别为 88%、4 %和 8%。同时增补了该地区 2 6种根结线虫寄主国内新记录。

利用RAPD研究松材线虫和拟松材线虫亲缘关系

用 RAPD技术对 18个松材线虫株系、8个拟松材线虫株系基因组 DNA多态性进行研究。在事先优化的条件下 ,用 15个随机引物进行 PCR扩增 ,一共扩增出 16 5条谱带 ,多态性为 91.5 %。通过聚类分析 ,结果表明 :松材线虫和拟松材线虫种间和种内都表现出很大的差异性 ,但种间差异大于种内差异 ,因而松材线虫和拟松材线虫应为 2个独立的种。

淡紫拟青霉不同菌株对南方根结线虫卵寄生率三种处理方法的比较

利用来自不同地域的淡紫拟青霉的13个菌株,分别用其孢子液处理南方根结线虫分散卵粒、菌丝处理分散卵粒、孢子液处理卵囊以评价淡紫拟青霉对南方根结线虫的寄生性。在被试所有菌株中,同一菌株三种不同方法对根结线虫卵的寄生率相比,孢子液处理卵囊均明显高于其他两种处理。不同菌株对南方根结线虫卵的寄生率有很大的差异。三种处理方法结果显示618号菌株寄生率均为最高。菌株对卵的寄生率与菌株地理来源无明显相关性。

寄生真菌对根结线虫的致病力评价

用南方根结线虫卵作接种试验，证明从根结线虫成虫及卵上分离７６个菌株中大部分菌株有寄生能力，种间及株间寄生率差异明显，表明这种方法是检验寄生真菌寄生能力的一种良好方法。通过测定，７６个菌株中有１０个菌株对南方根结线虫卵的寄生率超过５０％，种间及菌株间对卵的寄生能力存在很大差异；Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓｌｉｌａｃｉｎｕｓ，Ｖｅｒｔｉｃｉｌｉｕｍｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒｉｕｍ及Ｖ．ｌａｍｅｌｉｃｏｌａ对Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅｉｎｃｏｇｎｉｔａ，Ｍ．ａｒｅｎａｒｉａ和Ｍ．ｊａｖａｎｉｃａ卵的寄生能力进行比较，在３种线虫之间没有明显差异，说明这３种真菌对这３种根结线虫有进行防治的可能性。首次研究了寄生真菌培养滤液对根结线虫的作用，发现大多数寄生真菌的代谢产物对幼虫有毒害作用。２８个菌株中２４个的培养滤液对南方根结线虫幼虫有很高的毒性作用，在４ｈ内５６％～１００％幼虫不活动；Ｐ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ菌株５４培养滤液对幼虫作用的时间不同，效果也有很大差异，作用４ｈ，幼虫不活动率为１００％，作用４８ｈ，幼虫死亡率为１００％。在盆栽试验中，证明某些真菌对无菌土栽培的番茄上南方根结线虫有明显的防治效果。其中Ｐ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ?

淡紫拟青霉和厚壁轮枝霉防治南方根结线虫

从寄生在番茄上的南方根结线虫（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅｉｎｃｏｇｎｉｔａ）卵中分离到的淡紫拟青霉（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓｌｉｌａｃｉｎｕｓ）和厚壁轮枝霉（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｉｕｍｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒｉｕｍ）在室内、小区和大田试验中对南方根结线虫有防治效果，并能促进植物生长。

华东地区根结线虫寄生真菌调查

通过对5种分离根结线虫寄生真菌的方法的比较，发现通过雌成虫平板分离法和卵平板分离法有较高的成功率，其他三种自幼虫上或土壤中分离的方法很少取得成功。从华东地区104个根结线虫样品中分离得到根结线虫寄生真菌638个菌株， 鉴定为14个属22个种，其中Cylindrocarpon destructans, C.heteronema, Fusarium equiseti, F.lateritium, F.proliferatum, Gliocladium virens, Humicola fuscoatra, Idriella lunata, Trichoderma hamatum, T.harzianum, Verticillium catenulatum, Volutella ciliata 为首次报道在根结线虫上寄生。通过种群分析发现Fusarium solani出现频率最高， F. oxysporum， Paceilomyces lilacinus 和 Acremonium strictum为常见种，这些种在根结线虫上广泛分布。同时还发现卵和成虫寄生真菌有所不同，Gliocladium virens 和Trichoderma harzianum仅在卵上分离到，而Volutella ciliata, Trichoderma hamatum 和Idriella lunata仅在雌成虫分离到，从幼虫上仅分离一次Paecilomyces lilacinus。其它真菌在卵和成虫上均可分离得到，真菌种类在三种根结线虫上和在不同地区有所不同。

松材线虫产生的分泌物对松树的致病作用

用多毛孢(Pestalotia sp.)培养松材线虫,经过表面消毒后,在Tris-HCl缓冲液中振荡培养,培养液经硫酸铵沉淀、透析、冷冻真空干燥,制成的干样,用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。松材线虫能向体外分泌多种可溶性蛋白,发现有纤维素酶、过氧化物酶、蛋白酶、淀粉酶。用松材线虫产生的分泌物、纤维素酶、过氧化物酶、蛋白酶、淀粉酶接种3年生黑松(Pinus thunbergii),发现松材线虫产生的分泌物和纤维素酶能够导致松针枯死。这暗示松材线虫的分泌物可能是松材线虫病因之一。

根结线虫三种天敌真菌生物学特性的研究

淡紫拟青霉（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓｌｉｌａｃｉｎｕｓ）寄生南方根结线虫卵９０％，厚壁轮枝霉（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｉｕｍｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒｉｕｍ）寄生卵８５％，节丛孢菌（Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙｓｓｐ．）捕食二龄幼虫达６５％。采用常规方法，研究了这三种真菌的生物学特性。淡紫拟青霉最适培养温度为３０℃；厚壁轮枝霉为２５℃，节丛孢菌亦为２５℃；在麦粒上生长最好；三种真菌的最适ｐＨ值为６～８。

Psedomonas sp．A03处理种子防治杉木和云杉幼苗立枯病（Phizoctonia solani）

从健康杉苗根围分离抗ＲｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉＡＧ－４的有荧光的假单胞杆菌的分离物Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．Ａ０３，在室内灭菌上和自然土条件下，用其菌悬液浸种对杉木和云杉幼苗立枯病（Ｒ．ｓｏｌａｎｉ）有明显防病效果，并能促进植物生长，并随幼根和幼茎的伸长而移动。在５℃、１５℃、２５℃条件下，Ａ０３种群在６０天内均能存活。

南方根结线虫寄生真菌的分离和鉴定

1992年和 1993年 ,在广东和广西采集南方根结线虫样品 44个 ,分离 12 9个菌株 ,它们分属 9属

抗立枯丝核菌的假单胞杆菌属分离物筛选

从杉木根际的６０个假单胞杆菌属Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ分离物中选出１０个抗立枯丝核菌Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ的分离物，经试管法测定它们在杉木和云杉根上定殖情况，以及对杉木和云杉生长的影响。

流胶法在长岛县防治松材线虫病中的应用

长岛县是我国北方松材线虫病的唯一疫区。 1999年用流胶法对长岛疫区内约 4 0 0多hm2 的松林内的感染松材线虫黑松病树进行早期诊断 ,结果表明低温对流胶法影响很大。在约 6 0 0 0 0 0株松树中 ,发现 935株松树流胶异常 ,从这些松树中取样经分离镜检发现 182株松树带有松材线虫 ,伐除这 182株松材线虫病树后 ,当年松材线虫病树死亡率减少 97%。对流胶法在生产上的应用进行了讨论。

Psedudomonas sp．A03对Rhiaoctonia solani的抗生现象

在ＰＤＡ、ＫＢ和含Ｆｅ（＋＋＋）的ＫＢ琼脂平板上，Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．Ａ０３和Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｌｎｉ之间出现抑菌带。ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐＡ０３培养物的无菌滤液及其粗提物以及在ＫＢ平板上产生的挥发性抗生物质都能抑制Ｒｈｉｚｏｃｈｔｏｎｉａｓｌｏａｎｉ菌丝生长。电镜扫描发现Ａ０３在杉木和云杉幼苗根面定殖。

植物寄生线虫的分子诊断

植物寄生线虫的分子诊断中国林业科学研究院森保所汪来发杨宝君许多种植物寄生线虫，特别是一些异皮科线虫，对农业生产危害极大，据估计线虫造成的农作物损失达１０％～１５％。精确而有效地诊断病原物是进行有害生物综合治理的基础。对线虫的鉴定，传统的方法是依赖显微...

生物技术在植物病理学中的应用

生物技术是利用生物体或者生物的细胞组织成分的特性和功能,并结合工程技术原理进行加工生产,为社会提供商品和服务的一门技术。生物技术是以生命科学基础而发展起来的,是涉及到多种学科和多种技术的综合性科学技术体系,也有人管它叫生物工程。在现阶段,生物技术的主要内容有四个方面,就是基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程。现代生物技术的兴起,到现在不过短短的十几年时间,但它在植物病理学中已有初步应用,现将有关情况作个介绍。

松材线虫病的潜伏侵染及松墨天牛传播新途径

在南京用松材线虫接种 7种松树 ,于第 2a在无任何症状的松树的接种点上方 10cm处取样 ,分离线虫。结果表明松材线虫病的潜伏侵染现象比较普遍。在不同的松树品种上潜伏侵染现象有所差异。感病黑松和赤松很快死亡 ,只有在接种量小的情况下才有潜伏侵染现象发生。抗病性强的火炬松和湿地松感病后潜伏侵染现象比较普遍 ,并且样品中的线虫量也较高。而抗病性中等的马尾松和刚松感病后潜伏侵染现象的普遍性及样品中的线虫量均处于中等。短针松接种松材线虫后既不枯死 ,也无潜伏侵染现象。松墨天牛传播松材线虫的试验结果表明 ,未携带松材线虫的松墨天牛成虫在松材线虫病松枝上取食后 ,再到健康松枝上取食 ,有传播松材线虫的可能。这些结果表明在松材线虫病新病区清理病死木时 ,应采取早期诊断技术 ,把未表现症状的松树一起清除 ,以达到防治目的。