双重实时荧光PCR法检测食品和饲料中的鸡源性成分

根据鸡线粒体DNA细胞色素b基因序列和内参照基因PUC18质粒基因序列设计特异性引物和以不同荧光素标记的TaqMan探针。通过对反应条件的优化筛选,建立能同时扩增鸡源性成分和内参照基因成分的双重实时荧光PCR检测方法。设置内参照反应是为了监控反应体系中是否含有PCR反应的抑制物,避免出现假阴性结果。分别以鸡、鸭、鹅、火鸡、牛、羊、猪、鱼、兔、驴、鹿、狗、马、鸽子、大豆、玉米、小麦、大米、马铃薯及番茄的线粒体DNA作为模板进行特异性试验,结果表明该方法仅能特异性扩增鸡源性成分,而对其它物种未见有效扩增。通过灵敏度测试,该方法检出限达0.01%。所制定的方法特异性高,灵敏度好,可以作为食品和饲料中鸡源性成分的高效检测方法。

pcD-awte候选疟疾DNA疫苗发酵条件的探索

探索pcD—awte候选疟疾DNA疫苗发酵条件，为该疫苗制备工艺的建立做准备。通过摇瓶和5L发酵罐水平，考察不同培养基组成及来源、补料变化和温度转换对工程菌生长及质粒产量的影响。结果表明在TB培养基组分中添加Mg^2＋、微量元素复合物、核苷等成分，补料培养基由葡萄糖代替甘油，对数中期温度由37％升至42℃等条件，能提高工程菌株pcD—awte质粒的产量。在优化的培养条件下pcD—awte质粒产量可达125—130mg／L培养液。

pCD-Awte候选疟疾DNA疫苗制备及其质量相关性分析

构建的疟疾DNA疫苗经动物试验表明具有很好的免疫原性,为申请临床试验,进行了制备工艺的研究。将含pCD-Awte质粒的大肠杆菌DH5α在发酵罐中发酵培养,碱裂解法粗提质粒,再依次通过Sepharose 6FF分子筛层析、Plasmidselect亲硫吸附层析和Source 30Q离子交换层析精制获得质粒纯品,并对纯品进行质量分析。结果每升培养液可获得质粒纯品43.9mg,质量符合Ferreira等推荐的药用标准。

实时荧光定量PCR法测定禽蛋中沙门氏菌

为建立禽蛋中沙门氏菌的荧光PCR法检测方法,根据invA基因序列设计实时荧光定量PCR引物和探针,常规方法提取菌体DNA,以55℃为退火温度进行荧光PCR扩增,并进行方法学考察。结果表明:阳性对照品和沙门氏菌为模板的样品有明显扩增曲线,其他菌株为模板的样品无扩增曲线,特异性、灵敏度和重现性考察提示实时荧光定量PCR方法符合检测方法学要求。实时荧光定量PCR法的应用,提高了禽蛋制品中沙门氏菌检测的灵敏度、缩短了检测时间、简化了检测流程。

实时荧光PCR法同时检测食物中大豆和芹菜致敏原成分

大豆、芹菜等食品原料是一些特殊人群的致敏原。根据大豆atp A基因和芹菜mtd基因设计特异性引物,利用不同荧光素标记的Taq Man探针,建立了一种实时荧光PCR检测方法,可同时检测食物中大豆和芹菜致敏原成分。分别以大豆、芹菜、大米、小麦、大麦、花生、芝麻、玉米、马铃薯、蕃茄、核桃、开心果、腰果、葵花籽、杏仁、苹果、梨、草莓、猪肉、牛肉、羊肉及鱼肉等材料的基因组DNA作为模板,进行PCR扩增实验,结果发现该方法仅能特异性扩增大豆和芹菜致敏原成分。灵敏度测试结果表明大豆和芹菜成分的检出限均达0.01%。因此,本方法可以作为同时检测食品中大豆和芹菜致敏原成分的特异性方法。

高效液相色谱法同时测定塑料和纸质包装材料中6种荧光增白剂

建立了同时测定塑料和纸质食品包装材料中6种脂溶性荧光增白剂(FWA 135、FWA 184、FWA 185、FWA199、FWA 378和FWA 393)的高效液相色谱方法。用三氯甲烷-乙腈(3∶7,v/v)混合溶液提取,经HLB小柱净化后用高效液相色谱-荧光检测法进行定性定量分析。采用Phenomenex C18色谱柱分离,以5 mmol/L的乙酸铵水溶液和乙腈为流动相,进行梯度洗脱。结果显示:FWA 393在15~1500μg/L范围内的线性关系良好,其余5种荧光增白剂在5~500μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999;加标回收率为80.4%~125.0%;相对标准偏差(RSD,n=6)为1%~13%。应用该方法分析了市场销售的12个样品以验证方法的实用性。该方法前处理简单,回收率高,精密度好,适用于食品包装材料中6种荧光增白剂的检测。

HPLC测定花椒粉中罗丹明B含量的不确定度评定

根据《食品中罗丹明B的测定》(BJS 201905)方法规定的前处理方式,采用外标法,HPLC进样,对花椒粉中罗丹明B的含量进行不确定度评定。参照JJF 1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》,建立测量模型,对整个测量过程中不确定度的来源进行了分析。结果表明,不确定度主要来源于样品称量、体积的量取、重复性和回收率、标准曲线及标准曲线拟合过程等因素。

应用LAMP检测方法检测乳制品中的单核细胞增生李斯特氏菌（英文）

[目的]考察LAMP方法检测乳制品中单核细胞增生李斯特氏菌的可靠性。[方法]使用恒温环介导技术,以单核细胞增生李斯特氏菌编码的李氏溶血素O的hly A基因为研究对象设计引物,建立单核细胞增生李斯特氏菌的LAMP快速检测方法。[结果]LAMP法特异性强,灵敏度与荧光定量PCR相当。使用LAMP方法检测各种乳制品中的单核细胞增生李斯特氏菌结果与细菌分离方法检测结果完全一致。[结论]LAMP检测结果可以通过肉眼直接加以鉴别,适合乳制品突发事件情况中的检测。

食品安全监督抽检视角下的食品分类体系研究

食品分类体系是食品安全监督抽检工作的基础。本文通过对国内、国际主要食品分类体系的分析研究,指出我国现行的食品分类体系中存在的主要问题,并提出建议。

乳制品中致病菌监测分析

为了解乳制品中主要常见致病菌的污染水平及其季节变化趋势,确定生物危害因素的分布和可能来源,掌握乳制品中致病菌状况,及时发现乳制品中存在的安全隐患,按照《国家食源性致病菌监测工作手册》方法要求对2013—2015年从超市、餐饮店、食品小摊点、生产企业获取的950份乳制品中的致病菌进行了检测分析。结果表明,950份乳制品中检出含致病菌样品20份,占样品总量的2.1%;其中定型包装、非定型包装食品检出率分别为1.3%和13.3%;致病菌检出率最高的样品为第三季度采集的样品;在所监测的各类乳制品中,金黄色葡萄球菌检出率最高,达60%,其中灭菌乳中致病菌检验结果为未检出。