浅谈如何激发中职卫校医学生学习《生物化学》的兴趣

生物化学是医学生一门重要的基础医学必修课,其内容涉及到生命活动的所有环节。该课程具有理论性强、内容复杂、知识要点繁多等特点,是常令学生生畏的一门抽象和难学的课程。本文讨论如何针对中职卫校学生的特点,选用科学的教学方法和手段来激发学生的学习兴趣和动力,使学生由被动学习转变为自主学习,轻松学好生物化学,提高教学效果。

Caveolin-1真核表达载体的构建及其在Hepa1-6细胞中的表达

Caveolin-1在不同肿瘤中发挥作用不同,既发挥抑癌基因样作用又发挥癌基因样作用。旨在分析caveolin-1在小鼠肝癌细胞系中的表达情况及建立稳定表达外源caveolin-1的Hepa1-6细胞。利用RT-PCR和Western-blot方法检测caveolin-1在小鼠肝癌H22、Hca-F和Hepa1-6细胞中的表达;通过分子克隆构建小鼠caveolin-1 cDNA真核表达载体,利用脂质体转染等方法建立稳定表达外源caveolin-1的Hepa1-6细胞株;通过RT-PCR、Western-blot、免疫细胞化学等方法鉴定其稳定表达细胞株。结果显示,caveolin-1在Hepa1-6细胞中表达呈阴性,在H22和Hca-F中高表达;成功获得小鼠caveolin-1 cDNA真核表达载体pEGFP-N2/Cav-1,筛选并鉴定出高表达外源caveolin-1的Hepa1-6稳定细胞株C1和C4,为进一步分析caveolin-1在肝癌中所发挥的作用奠定了一定的研究基础。

下调窖蛋白-1表达抑制小鼠肝癌H22细胞侵袭能力

窖蛋白-1在不同肿瘤中发挥作用不同.本研究以小鼠肝癌细胞H22为研究对象,观察下调窖蛋白-1表达对H22细胞侵袭能力的影响,并探讨其可能的分子机制.利用RT-PCR和Western印迹法检测了窖蛋白-1在H22及小鼠正常肝细胞IAR20中的表达.结果显示,窖蛋白-1在H22中的表达高于其在IAR20中的表达,提示窖蛋白-1高表达可能与H22细胞恶性表型有关.RNA干扰和凝集素印记实验结果显示,窖蛋白-1-siRNA能够有效抑制窖蛋白-1mRNA和蛋白表达,并抑制细胞表面N-聚糖β1,6GlcNAc分支形成.Transwell细胞迁移和侵袭实验结果显示,与未转染组和siRNA对照组比较,转染窖蛋白-1-siRNA的H22细胞迁移和侵袭数目明显减少.本研究证明,下调窖蛋白-1表达可抑制H22细胞表面N-聚糖β1,6GlcNAc分支形成,从而抑制细胞迁移和侵袭能力.

糖基化在肿瘤免疫中的作用

蛋白质的糖基化是糖类在糖基转移酶（Glycosyltransferase,GTs）的催化下以共价键的形式与肽链连接的过程。根据糖肽键的不同,糖基化分为以下四种类型：N-连接糖基化、O-连接糖基化、糖基磷脂酰肌醇（Glycophosphatidylinositol,GPI）锚定糖基化和C-甘露糖化[1]。

超声辐照超声微泡介导siRNA转染膀胱癌T24细胞的实验研究

目的探讨超声辐照超声微泡介导siRNA转染人膀胱癌T24细胞的有效性。方法使用超声辐照超声微泡的方法介导FITC-siRNA转染人膀胱癌T24细胞,通过荧光显微镜及流式细胞学方法观察siRNA的转染效率,使用MTT方法观察细胞活力。结果与各阴性对照组相比,超声辐照超声微泡的方法可以明显增加siRNA向T24细胞中的转染效率。随着超声辐照强度的增加,siRNA的转染效率在一定范围内有所提高,同时也增加了对T24细胞毒性。与脂质体介导的siRNA体外转染相比,超声辐照超声微泡介导的siRNA转染效率仍然较低。结论超声辐照超声微泡能够有效提高siRNA转染膀胱癌细胞的效率,有可能为膀胱癌的基因靶向治疗提供新的转染手段。

成人医学的生物化学教学浅探

生物化学是医学的重要基础课程之一,与临床密切相联,具有理论性强,内容抽象、机理复杂、教学中不具直观性等特点,对于成人学生来说是医学课程中最难学的一门基础课程。本文针对成人学生在生物化学学习过程中的特点,对成人医学的生物化学的教学方法和体会进行了探讨。

糖基转移酶与膀胱癌关系的研究进展

糖生物学是一门新兴学科,由糖化学和糖生物学相结合而产生,研究糖复合物的糖链结构、生物合成及功能,糖基转移酶是其主要研究内容之一,它参与了肿瘤发生发展的基本分子和细胞生物过程,它的异常表达在调节肿瘤发生发展中扮演着十分重要的角色,并作为生物标记物为肿瘤的干预治疗提供了一系列特异性靶点。膀胱癌是一种常见的恶性肿瘤,在世界范围内发病率和死亡率较高。因此,对糖基转移酶表达的改变与膀胱癌的关系作一综述。

糖链对肿瘤细胞生物学行为的影响及机制研究年度报告

该研究其主要目的是利用糖基转移酶酶学活性检测法,筛选替代糖基转移酶天然糖苷供体底物的糖探针,建立体外糖基化修饰蛋白、标记糖链的方法,高通量筛选发现肿瘤相关糖基转移酶对应的靶蛋白和糖链结构,并发现肿瘤特征性糖基转移酶抑制剂。并且,观察了一系列糖基转移酶及相关特征糖链在肿瘤中的表达及结构特点。得到如下结论:关于糖基转移酶抑制剂发现的相关工作已达该领域领先水平。发现的高通量筛选方法可以推动糖基转移酶抑制剂的发现工作。同时,已发现的pp Gla NAc-T抑制剂可以作为分子探针工具研究此类酶的生物学功能,并为肿瘤等疾病提供基于糖靶标的治疗药物先导物。此外,该研究还揭示了唾液酰基转移酶ST6Gal-I的表达调控规律。发现了α5-integrin的α2,6唾液酸化修饰与肝癌细胞粘附呈正相关。提示,Cav-1上调ST6Gal-I表达及α2,6连接唾液酸水平是促进肝癌细胞转移的早期事件,而Cav-1、ST6Gal-I及ECM黏附的顺序调控有可能为转移性肝癌的早期治疗提供新的靶点和思路。提出了糖蛋白N-糖链作为预测白血病耐药标志物的可能性。即N-糖链、糖基因的差异表达的确与白血病耐药具有相关性,是潜在的白血病耐药相关标志物。

糖基转移酶超家族在肿瘤转移中的作用

蛋白质的糖基化修饰主要包括N-连接糖基化、O-连接糖基化和糖基磷脂酰肌醇锚定连接.与核酸和蛋白质不同,糖链的合成过程并不遵循传统的基因信息传递的中心法则,主要由一系列催化糖苷键形成的糖基转移酶完成.异常糖基化修饰被认为与恶性肿瘤的发生发展和临床预后密切相关.研究表明,糖基转移酶的表达及其糖链结构的异常可通过调节肿瘤细胞与细胞外基质的相互作用,继而影响肿瘤转移的关键步骤,如上皮间质转化(E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白)、细胞的移动性(整合素β1和α5)、侵袭(基质金属蛋白酶MMPs)、浸润(唾液酸化Lewis抗原sLeX和sLeA).本文主要就唾液酰基转移酶、岩藻糖基转移酶和N-乙酰氨基葡萄糖转移酶等三大糖基转移酶家族的结构和生物学功能及其在肿瘤转移中的作用作一综述,以期为肿瘤转移的预测和诊断提供新思路.

下调GnTⅣa表达对肝癌Hca-F细胞增殖及侵袭的影响

目的:探讨慢病毒介导的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅳa(N-acetylglucosaminyltransferaseⅣa,GnTⅣa)表达下调对小鼠肝癌Hca-F细胞体外增殖及侵袭能力的影响。方法:针对GnTⅣa的编码基因Mgat4a,构建含shRNA干扰序列的慢病毒表达载体pll3.7/Mgat4a-shRNA并包装慢病毒颗粒,感染Hca-F细胞。RT-PCR及流式细胞术分别检测Mgat4a-shRNA重组慢病毒感染对Hca-F细胞Mgat4a mRNA及GnTⅣa表达的影响,CCK-8法和Transwell侵袭实验分别检测Mgat4a-shRNA重组慢病毒感染在体外对Hca-F细胞增殖和侵袭能力的影响。结果:慢病毒能够高效感染小鼠肝癌细胞Hca-F,Mgat4a-shRNA组感染效率达72%。与Hca-F细胞和Mock-shRNA组相比,Mgat4a-shRNA组细胞内Mgat4a mRNA[(0.53±0.2)vs(2.97±0.2)、(2.90±0.1);均P<0.05]和GnTⅣa[(47.80±2.25)vs(394.61±5.27)、(378.61±4.38);均P<0.05]表达显著降低;增殖能力[细胞增殖抑制率:(46.9±0.02)%vs(0.82±0.03)%、0,P<0.01]和体外侵袭能力[穿过滤膜的细胞数:(18±3)vs(42±4)、(38±3)个,均P<0.05]显著下降。结论:慢病毒介导shRNA下调GnTⅣa的表达能够抑制小鼠肝癌细胞Hca-F的增殖及体外侵袭。

唾液酰基转移酶ST6Gal-I在肿瘤中的生物学作用

唾液酸修饰是糖基化修饰的一种重要形式,与肿瘤的发生发展密切相关。唾液酸修饰是在唾液酰基转移酶的作用下,通过糖苷键转移到糖蛋白或糖脂分子末端的半乳糖上。细胞表面唾液酸的高表达与肿瘤的发生发展及临床愈后密切相关,并且与唾液酸相关的肿瘤抗原现在已成为许多恶性肿瘤的靶向研究分子。研究表明,在细胞癌变过程中,唾液酸化糖链结构的改变与其对应的唾液酰基转移酶的表达和活性相关,现综述在肿瘤发生发展过程中ST6Gal-I的作用及其表达和活性的改变。

糖基化在肿瘤相关上皮间质转化中的作用

糖基化是生物体内蛋白质的基本修饰方式之一,通过影响蛋白质的折叠、运输和定位,从而参与人体多种生物学功能的调节。研究表明,异常糖基化修饰参与生物体内多种病理生理过程,包括恶性肿瘤和一些炎症性疾病,尤其与肿瘤的转移和侵袭密切相关。而上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)指上皮细胞失去紧密连接转化为间质的复杂过程,是肿瘤转移的重要机制之一。本文主要对蛋白质糖基化在肿瘤相关EMT的过程中所起的作用及其相关分子机制进行阐述。

陷窝蛋白-1在肿瘤发生发展中的双重性

陷窝蛋白-1(caveolin-1)是陷窝(caveolae)的主要结构成分,在细胞内吞、胆固醇运输、信号传导、肿瘤发生中发挥重要作用。陷窝蛋白-1在肿瘤中发挥抑癌作用还是促癌作用一直存在争论:在乳腺癌、肺癌、卵巢癌中发挥抑癌基因样作用,而在前列腺癌中则发挥癌基因样作用。这一现象提示,陷窝蛋白-1在不同肿瘤中发挥作用可能不同,其生物学作用具有双重性。本文将对陷窝蛋白-1的结构、分布、表达及与肿瘤的关系作一综述。

唾液酸生物学与人类健康和疾病

唾液酸(sialic acid)是一类酸性九碳单糖,是所有神经氨酸或酮基-脱氧壬酮糖酸(KDN)的N-或O-衍生物的总称。唾液酸作为复合糖的组成部分镶嵌于所有细胞表面以及大多数脊椎动物糖蛋白和糖脂分子的末端最外侧。唾液酸家族成员已经达到五十多个,其分子结构多样,在生物体内分布广泛。唾液酸介导或调制了发育、炎症、病原感染、肿瘤发生发展等诸多生理和病理过程,与人类健康和疾病密切关联。对唾液酸生物学的研究已成为糖生物学研究的热点之一。对唾液酸与人类健康与疾病研究的新进展做一综述。

N-乙酰氨基葡萄糖转移酶干扰慢病毒载体系统的建立及应用

目的构建针对N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(GnT)Ⅲ、Ⅳa和Ⅴ的RNA干扰(RNAi)慢病毒系统,并检测干扰慢病毒在体外小鼠肝癌细胞中对不同GnT表达的抑制作用。方法针对三种基因序列设计合成特异的shRNA序列,并构建干扰慢病毒表达载体,利用病毒包装细胞293T包装生产病毒,感染靶细胞Hca-F后,应用RT-PCR和免疫印迹检测干扰慢病毒对三种N-乙酰氨基葡萄糖转移酶表达的抑制。结果经测序证实三种干扰慢病毒表达载体构建成功,并获得高滴度的感染慢病毒。干扰慢病毒感染靶细胞后能够有效下调三种N-乙酰氨基葡萄糖转移酶的表达。结论干扰慢病毒可有效地抑制三种N-乙酰氨基葡萄糖转移酶GnT-Ⅲ、GnT-Ⅳa和GnT-Ⅴ的表达。

两种不同相对分子质量的壳寡糖对小鼠免疫功能的影响

目的研究两种不同相对分子质量的壳寡糖(chitosan oligosaccharide,COS)对小鼠免疫功能的影响。方法小鼠腹腔注射壳寡糖S-COS(平均相对分子质量800),壳寡糖B-COS(平均相对分子质量1700),硫酸岩藻糖(Fucoidan)120mg.kg-1,每日1次,连续14d,第10天注射5%牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)200μL/只进行免疫。于第15天检测脾指数,血清中细胞因子(IL-10、TNF-α、IFN-γ)含量,脾中淋巴细胞增殖,以及脾中CD4+T细胞增殖。结果 S-COS和B-COS都能够促进CD4+T细胞增殖,另外,B-COS还能增加脾指数,促进细胞因子IL-10和TNF-α分泌,以及脾中淋巴细胞增殖,而S-COS和硫酸岩藻糖则不能。结论 B-COS对小鼠免疫功能的调节作用优于S-COS。

肝癌免疫逃逸机制的研究进展

肿瘤免疫逃逸在肝癌发生发展中起着重要作用。树突状细胞和免疫细胞的不成熟或功能低下将导致机体免疫功能被抑制而促进肝癌的发生发展。多种细胞因子如IL-10、TGF-β、VEGF等会抑制机体免疫功能使肝癌生长增殖或直接促进肿瘤的发生发展。肝癌细胞分泌Fas L及其表面Fas的表达减少会诱导免疫细胞凋亡或避免T细胞等免疫细胞的杀伤作用从而逃避机体免疫作用。因此,本文将从免疫细胞、肿瘤细胞本身以及两者间的相互作用三个方面阐述肝癌免疫逃逸的分子机制。

唾液酸化和岩藻糖基化在肺癌中的研究进展

糖基化是真核生物蛋白质翻译后修饰的主要方式之一,它涉及到一个有组织、高调控的过程,在生物体内有超过50%的蛋白质需要进行糖基化修饰,才能发挥其相应的功能。肿瘤细胞表面糖基化异常是肿瘤恶性转变的一个关键因素,它与肿瘤细胞的生长、增殖、迁移和侵袭等生物学行为密切相关。目前,我们已经能够利用糖基化的改变来对肿瘤患者进行早期诊断和预后分析。本综述主要阐述的是唾液酸化与岩藻糖基化在肺癌发生发展中的作用。

唾液酸在疾病中作用的研究进展

唾液酸是一类含九个碳原子的单糖衍生物的总称,人体内的唾液酸主要为N-乙酰神经氨酸和N-羟乙酰神经氨酸,大多由葡萄糖代谢生成。唾液酸广泛分布于真核细胞表面糖蛋白或糖脂寡糖链的最末端,是细胞膜上糖蛋白、糖脂的重要成分。本综述主要阐述了唾液酸在肿瘤、炎症、免疫、病原微生物以及感染性疾病中的最新研究进展。

褐藻多糖及其衍生物的抗肿瘤作用

海洋植物作为一类有益健康的天然产品受到诸多关注。其中,褐藻科植物和褐藻的粗提取物在抗肿瘤活性方面显示出极大优势。鉴于此,褐藻粗提取物的活性成分褐藻多糖的抗肿瘤作用引起制药领域的极大兴趣。褐藻多糖包括褐藻胶、岩藻聚糖和褐藻淀粉等,主要来自海带、巨藻、泡叶藻、墨角藻等海藻植物。研究发现,褐藻糖胶的衍生物及海藻酸钠的衍生物具有降血压、调节免疫、抗炎抗病毒、抗氧化以及抗肿瘤的作用。本文介绍了褐藻多糖及其衍生物在抗肿瘤活性方面的研究现状。