缺氧对RAW264.7细胞ABCA1的表达及胆固醇流出的影响

目的探讨缺氧对RAW264.7细胞ABCA1的表达及胆固醇流出的影响。方法将小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞分别在缺氧(37℃,5%CO2,1%O2)及常氧(37℃,5%CO2,20%O2)条件下培养不同时间(0、6、12、24 h和48 h),在相应时间点收集细胞总RNA及蛋白,用实时定量PCR和免疫印迹法分别检测ABCA1mRNA的表达及其蛋白质水平的变化。利用氧化型低密度脂蛋白及3H-胆固醇荷脂RAW264.7细胞结合液闪仪检测缺氧条件下ApoA-I诱导的胆固醇流出,计算胆固醇流出率。结果与常氧培养相比,缺氧48 h的RAW264.7细胞中ABCA1的表达水平显著降低(P<0.05),ApoA-I诱导的胆固醇流出也明显降低(P<0.05)。结论缺氧能抑制RAW264.7细胞ABCA1的表达以及ApoA-I诱导胆固醇流出,此作用可能与动脉粥样硬化的发生发展密切相关。

药学专业学生实践教学模式的探讨

为适应社会发展的需要,培养实用型药学人才,加强药学专业学生的实践教学,开展药学实践教学的改革势在必行。本文结合目前药学专业人才就业现状,分析了实践教学在药学人才培养中的重要性,提出药学实践教学改革的举措:阶段性全面推进实践教学,完善考核监控体系与激励机制,加强实践基地的建设,促进师资队伍建设。

白屈菜红碱对肝纤维化大鼠血清透明质酸和谷丙转氨酶的影响

目的观察白屈菜红碱对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和透明质酸(HA)的影响。方法用四氯化碳皮下注射,同时联合营养控制和饮用10%酒精复合法制备SD大鼠肝纤维化模型,在实验第4周末,肝纤维化模型建立(2期肝纤维化形成),然后用不同剂量白屈菜红碱治疗,同时设立病理模型组、正常对照组和IFN-γ组。给药8周末取血清检查HA、ALT。结果白屈菜红碱各剂量组血清HA水平较模型组显著降低(P<0.05),与IFN-γ组比较无明显差异(P>0.05);血清ALT在白屈菜红碱各剂量组、IFN-γ组与模型组之间变化无明显差异(P>0.05)。结论白屈菜红碱能降低血清HA的含量,具有抗化学性大鼠肝纤维化作用,且疗效与IFN-γ相当;但白屈菜红碱没有降低血清ALT,无保护肝细胞的作用。

二烯丙基二硫对人白血病细胞HL-60增殖、细胞周期及p21表达的影响

目的观察二烯丙基二硫(DADS)作用于人白血病细胞系HL-60后,细胞增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p21表达的变化,探讨DADS抑制HL-60增殖、诱导G2/M阻滞的作用机制。方法不同浓度DADS作用HL-60后,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,Westernblot检测p21蛋白水平。结果在一定浓度范围之内,DADS能抑制HL-60细胞增殖,细胞周期发生G2/M期阻滞,并上调p21蛋白水平。结论DADS能通过上调p21的表达而抑制HL-60增殖,诱导其G2/M期阻滞。

纳米技术在药物及药理研究中的应用

纳米技术是指在 1 0 0nm以下水平对物质和材料进行研究处理的技术。由于其独特的小尺寸效应和表面或界面效应 ,可以表现出许多优异的性能和全新的功能 ,在药物及药理研究领域有着广阔的前景。本文就纳米技术在纳米控释系统、新药理作用的发现、中药的开发及新研究方法的应用做一综述。

白屈菜红碱对肝纤维化大鼠肝脏病理学和肝脏羟脯氨酸含量的影响

目的观察白屈菜红碱对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝脏病理学和肝脏羟脯氨酸(Hpy)含量的变化。方法采用四氯化碳联合营养控制和饮用10%酒精复合法制备SD大鼠肝纤维化模型,在实验第4周末,肝纤维化模型建立(2期)成功,然后应用不同剂量的白屈菜红碱和INF-γ处理。在给药8周后,处死所有大鼠,并取肝脏组织,采用HE、VG及Massion染色观察肝脏组织病理学形态的变化,同时采用改进的氯胺-T测定法检测肝脏Hyp含量。结果各剂量白屈菜红碱组肝纤维化半定量计分和肝脏的Hpy含量明显低于病理模型组(P<0.01);大中剂量白屈菜红碱组与小剂量组比,大鼠肝脏组织纤维化半定量计分及肝组织Hyp含量有明显下降,差异显著(P<0.01)。结论白屈菜红碱可以改善肝纤维化大鼠肝组织纤维化程度,降低肝组织Hyp含量,具有抗化学性肝纤维化作用。

Caveolin-1对胃癌细胞系MGC803细胞生长的影响

目的:研究Caveolin-1对胃癌细胞增殖、分化的影响,以探讨Caveolin-1作为基因治疗的候选基因的可能性．方法:运用基因重组技术,将人全长 Caveolin-1基因稳定转染胃癌细胞系MGC803．建立能稳定表达Caveolin-1的胃癌细胞系．同时建立空载体转染的MGC803细胞系作为空白对照,另用PD98059处理48 h作为阳性对照．以重组细胞系作为研究模型,通过免疫细胞化学及Western blot确认Caveolin-1蛋白在被转染细胞中的稳定表达．运用光学显微镜观察转染前后MGC803细胞形态的变化;另运用细胞计数检测了Caveolin-1对MGC803细胞生长的影响,流式细胞术分析了Caveolin-1对MGC803 细胞周期分布的影响．结果:Western blot结果显示,基因转染组及阳性对照组细胞中Vaveolin-1表达比未处理组细胞中明显增强(P<0．001,q值分别为23．067 与13.3376),且基因转染组中Caveolin-1表达比阳性对照组更强(P<0．00l,q=9．7294);基因转染后的MGC803细胞形态发生明显变化,由异形性明显、核大、胞质很少、核分裂明显变得形态较一致、胞质丰富、核／质比明显变小、核分裂相很少见;基因转染后细胞的群体倍增时间明显延长,由46．67 h延长至65．46 h,差异有统计学意义(P<0．05,q =4．8695):基因转染后细胞周期分布发生了明显变化,G0／G1期细胞数明显增多(P<0．01, q=9．1824),S期细胞数明显减少(P<0．01,q= 7．827),G2／M期细胞数无明显变化(P>0．05), Caveolin-1基因转染组与阳性对照组间细胞周期分布的变化也有明显差异性(其中G0／G1期 P<0．01,q=4．9323;S期P<0．05,q=3．3295)．结论:Caveolin-1既能诱导MGC803细胞分化又能将其阻滞于G0/G1期,通过延长细胞群体倍增时间而抑制胃癌细胞的体外增殖．

白屈菜红碱对肝纤维化大鼠肝脏TGF-β1和α-SMA表达的影响

目的:探讨白屈菜红碱对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠肝脏组织转化生长因β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法:用四氯化碳皮下注射,同时联合营养控制和饮用100mL/L乙醇复合法制备SD大鼠肝纤维化模型,在实验第4周末,肝纤维化模型建立(2期肝纤维化形成),然后用低、中、高剂量白屈菜红碱(0.2、0.6、2.0g/L)治疗,同时实验设立病理模型组、空白对照和阳性对照(INF-γ)组.给药8wk后,采用免疫组织化学检测各组大鼠肝脏组织TGF-β1和α-SMA的表达.结果:各剂量白屈菜红碱组肝脏TGF-β1和α-SMA表达明显低于病理模型组(TGF-β1:6.08±2.35,4.31±2.10,4.7±1.70 vs 9.33±3.08;α-SMA:3.75±1.76,3.23±1.42,3.20±1.17 vs 6.67±2.29,均P<0.01),而与INF-γ组比较无明显差异(4.23±2.24,3.38±1.39,均P>0.05).结论:白屈菜红碱能降低四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠模型肝脏组织TGF-β1和α-SMA.

降钙素基因相关肽通过p38MAPK/Nox1通路抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖

前期研究证明,降钙素基因相关肽（CGRP）具有较强的血管扩张作用,能够抑制血管平滑肌细胞（VSMC）增殖。VSMC中,NADPH氧化酶1（Nox1）活性增加被认为是O2.-产生的主要来源。Nox1通过介导VSMC增殖、迁移,在新生内膜的形成中发挥重要作用。实验表明,CGRP能抑制血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）

守宫水蛭组方对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

为观察守宫水蛭组方是否对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用 ,将 4 8只Wester大鼠随机分为偏瘫康大、小剂量组、模型组、假手术组、西比灵及华佗再造丸阳性对照组 ,分别给予一周药物后用尼龙线栓塞大脑中动脉 ,栓塞 1h后再通 ,制做局部脑缺血再灌注损伤模型 ,于手术后分别对大鼠行为障碍进行术后评分 ,断脑取血测血清乳酸脱氢酶和肌酸激酶含量 ,取手术侧脑测定含水量及脑组织Na+ 、K+ 、Ca2 + 和Mg2 + 含量。结果发现 ,脑缺血再灌注损伤 6h后 ,大鼠行为障碍术后评分增高 ,出现脑水肿 ,Na+ 含量增高 ,血清乳酸脱氢酶和肌酸激酶含量也明显升高 ;而预先服用不同剂量的守宫水蛭组方均可明显逆转大鼠脑缺血再灌注损伤的上述变化。

科研思维在药理学教学中的应用与思考

与传统的灌输式教学法相比,科研思维融于教学的创新性教学法,能促进学生融会贯通医学内容,了解医学前沿知识,促发学生创新欲望,对培养创新型人才大有益处。

转录辅抑制因子RIP140在代谢组织中的作用及机制

核受体超家族在调节能量平衡过程中扮演重要角色。转录辅助调节因子通过募集一系列DNA或组蛋白结构修饰酶,调节核受体介导的靶基因转录。受体相互作用蛋白140(receptor-interacting protein140,RIP140)是一种转录辅抑制因子,其与核受体结合后能够负向调节多种代谢组织中靶基因的转录,包括脂肪组织、肌肉组织以及肝脏等。基因沉默RIP140后,多种代谢途径相关基因表达上调,主要涉及糖酵解、甘油三酯合成、三羧酸循环、脂肪酸β氧化、线粒体电子传递以及氧化磷酸化等能量代谢过程。RIP140有望成为治疗代谢综合征的候选靶点。

依托医学教育资源创建药学专业课程新体系

依据现代药学教育模式,充分利用本校医学教育资源,创建"化学-生物医学-药学"专业课程新体系。在教学实践中更新教学理念,提出药学专业课程改革原则与目标,优化药学专业课程模块,增设生物医学课程模块,改进开放式实验教学,实施本科生全程导师制,逐步培养具有医学知识背景的创新型、应用型、能力型药学专业人才。

染料木素拮抗对氧磷诱导的大鼠胸主动脉组织p22phox表达上调

目的探讨染料木素是否通过下调p22phox、Nox4的表达,抑制活性氧的生成而拮抗对氧磷损伤的血管内皮功能。方法取♂SD大鼠胸主动脉。1溶媒对照组:用0.1%的二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)处理大鼠胸主动脉30 min;2染料木素(genistein,GST)处理组:GST(100μmol·L-1)处理大鼠胸主动脉30 min;3对氧磷(paraoxon,PO)处理组:PO(40.5μmol·L-1)处理大鼠胸主动脉30 min;4 PO+GST处理组:PO(40.5μmol·L-1)+GST(100μmol·L-1)处理大鼠胸主动脉30 min。RT-PCR法检测各组p22phox、Nox4 mRNA表达的变化;Western blot观察p22phox和Nox4蛋白表达的变化。结果较之溶媒对照组,PO处理可使p22phox、Nox4 mRNA及蛋白表达明显增加;GST处理则使p22phox、Nox4 mRNA及蛋白表达明显减少;PO+GST共同处理组,Nox4 mRNA及蛋白表达增加。与PO单独处理组比较,PO+GST共同处理组p22phox mRNA及蛋白表达明显减少。结论对氧磷可通过上调血管组织p22phox、Nox4 mRNA和蛋白的表达,导致血管内皮氧化损伤;染料木素可下调二者的表达,保护血管内皮。

肝癌细胞增殖受M-CSF胞内和胞外自分泌的双重调控

目的:研究胞内M-CSF及其受体在肝癌SMMC 7721细胞的表达与性质,探讨胞内M-CSF对SMMC 7721细胞增殖的影响及其机制。方法:以高表达M-CSF的人肝癌细胞系(SMMC 7721细胞)为模型,以免疫组化、流式细胞计数、反义技术与蛋白印迹等方法观测胞内M-CSF对SMMC 7721细胞增殖的影响及其机制。结果:M-CSF 及其受体主要在SMMC 7721细胞的胞质、胞核中表达,胞内的M-CSF 的相对分子量为20 000,M-CSFR的相对分子量为120 000;免疫共沉淀分析证明M-CSF在细胞内与M-CSFR以复合物的形式存在;M-CSF的单克隆抗体及其反义寡聚核苷酸能抑制SMMC 7721细胞的增殖、下调CYCLIND1/E的表达和上调P16的表达,且M-CSF的单克隆抗体及其反义寡聚核苷酸的联合使用能进一步加强对SMMC 7721细胞抑制作用和增加下调CYCLIND1／E和上调P16的表达幅度。结论:SMMC 7721细胞受M-CSF胞外自分泌和胞内自分泌的双重调控。

P38MAPK/NOX4通路介导CGRP对氧化损伤HUVEC保护作用

氧化应激过程调控细胞增殖和凋亡。研究发现，某些血管活性肽的保护血管作用与抑制氧化应激有关。降钙素基因相关肽（CGRP）是一种由辣椒素敏感的感觉神经末梢释放的神经递质，在体内有广泛的分布和表达，有多种生理功能，如舒张血管和收缩心肌、抑制血管平滑肌细胞增殖、保护内皮细胞、调节神经系统和消化系统等。最新研究表明，

糖皮质激素治疗早期重型肝炎最佳方案初探

目的观察糖皮质激素不同给药方式治疗早期重型肝炎的临床疗效和副作用,初步探讨糖皮质激素治疗早期重型肝炎的最佳方案。方法将68例早期重型肝炎患者随机分为3组即5 mg地塞米松组27例、10mg地塞米松组21例及对照组20例。5 mg地塞米松组:27例患者在综合治疗的基础上,使用小剂量地塞米松5mg,间断给药,待血清总胆红素下降到100μmol/L停用激素;10 mg地塞米松组:21例早期重型肝炎患者,采用地塞米松10 mg/天静脉滴注,使用一周后,开始逐渐减量至停药;对照组20例仅采用综合治疗。观察3组治疗前后临床表现、血清总胆红素(TBil)及凝血酶原时间(PT)的变化以及每组药物的副作用和并发症的情况。结果治疗6周后与对照组比较,治疗组患者血清总胆红素明显降低及凝血酶原时间缩短(P<0.01),临床症状明显好转,两个治疗组的有效率明显优于对照组(P<0.01)。5 mg地塞米松组的继发感染、消化道出血、肝性脑病、肝肾综合征等并发症比10 mg地塞米松组和对照组明显减少(P<0.05),住院时间也明显缩短(P<0.01)。结论小剂量激素,间隔用药治疗早期重型肝炎,疗效明显,病程缩短,副作用小。

Caveolin-1基因转染对人胃腺癌细胞生长的影响

目的探讨外源性Caveolin-1基因在人胃腺癌细胞中的表达作用。方法将pcl-neo-caveolin-1人全长质粒转染入MGC803细胞中,用G418筛选得到细胞克隆并扩大培养,获得稳定表达caveolin-1的细胞系,通过Western-blot、细胞计数及流式细胞术等方法检测基因表达、细胞增殖分化等情况。结果与对照组和pcl-neo空质粒转染组相比,转染caveolin-1基因后的MGC803细胞的caveolin-1的表达明显增高,而P-ERK1/2的表达却明显下降;细胞的群体倍增时间明显延长:由46.67或47.32小时延长至65.46小时,差异有显著性(P<0.01);细胞周期分布发生明显变化:G0/G1期细胞比例由35.02%增加到51.98%,S期比例由56.97%下降至39.80%,G2、M期无明显变化。结论Caveolin-1通过抑制MGC803细胞的增殖而导致其发生G0/G1期阻滞,可为肿瘤基因治疗提供实验依据。

M-CSF上调cyclinD1/D3和CDK2/6的表达促进HeLa细胞增殖

非分泌型巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的表达在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用,为探讨胞质M-CSF对细胞增殖的影响,采用基因重组技术构建胞内稳定表达M-CSF的HeLa细胞系,以空载体(pCMV/myc/cyto)转染HeLa细胞和未转染HeLa细胞作为对照,MTT法及反义寡核苷酸抑制实验分析M-CSF对细胞增殖的影响,并计算细胞倍增时间,RT-PCR观察胞内M-CSF对G1期细胞周期相关蛋白的影响.结果显示,与对照组比较,转染M-CSF的HeLa细胞倍增时间明显缩短、增殖能力显著增强,M-CSF的特异性反义寡核苷酸能抑制转染M-CSF的HeLa细胞的增殖,且抑制率随着反义寡核苷酸浓度的增高而增强,转染M-CSF的HeLa细胞的cyclinD1/D3和CDK2/6 mRNA表达显著升高(P<0.05).提示:M-CSF可上调cyclinD1/D3和CDK2/6的mRNA表达,促进HeLa细胞的增殖.

DADS活化HL-60细胞G_2/M检查点与cyclinB1亚细胞分布的关系

目的研究二烯丙基二硫(DADS)诱导人急性髓性白血病细胞系HL-60细胞G2/M期生长阻滞的分子机制。方法采用MTT法检测DADS对细胞增殖活性的影响、流式细胞术检定细胞增殖周期、蛋白印迹法检测细胞内cyclinB1表达水平。结果DADS呈浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖活性,且DADS(20μmol/L)与ATRA(10-6mol/L)对HL-60细胞增殖活性影响相近(P<0.01),DADS(20μmol/L)作用12 h后能引起G2/M期细胞百分数增高并达到最大值,上调cyclinB1的表达水平并诱导cy-clinB1细胞质定位。结论DADS能启动HL-60细胞G2/M检查点,它的激活与cyclinB1细胞质定位有关。