氧化应激在尿白蛋白超负荷诱导肾小管上皮细胞自噬中的作用

目的观察尿蛋白的主要成分白蛋白超负荷对体外培养的肾小管上皮细胞(HK-2)活性氧(ROS)水平及其对自噬激活的影响,以探讨白蛋白超负荷诱导肾小管上皮细胞自噬激活的可能机制。方法以体外培养的HK-2细胞为研究对象,分为正常对照组(NC)、白蛋白组(ALB)、白蛋白+N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)组、NAC组、白蛋白+氯喹(CQ)组和白蛋白+西罗莫司(RAP)组;采用免疫印迹检测自噬标记蛋白Becline-1与微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达,2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)免疫荧光技术检测ROS水平。结果白蛋白超负荷诱导HK-2细胞自噬,表现为自噬标记蛋白LC3-Ⅱ与Becline-1表达显著增多,与正常对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);白蛋白超负荷引起HK-2细胞氧化应激,与正常对照组ROS水平10.15±0.57比较,白蛋白组ROS水平22.47±0.79,表现为绿色荧光亮度增强,ROS生成增多(P<0.05);抗氧化剂NAC干预可以减少白蛋白超负荷处理诱导的HK-2细胞自噬增多(P<0.05);另外,与白蛋白组ROS水平22.62±0.92比较,CQ预处理组ROS水平为29.49±1.12,表明CQ处理可以进一步增加白蛋白超负荷所致的ROS释放,而RAP预处理组ROS水平为15.34+1.01,表明RAP可以减少白蛋白超负荷所致的ROS释放(P<0.05)。结论白蛋白超负荷诱导了HK-2细胞自噬激活,其机制可能与白蛋白超负荷引起的氧化应激有关。