多胎与单胎山羊发情期卵巢褪黑素受体基因的差异表达研究

为探明褪黑素受体(MTR1A)对山羊产羔数等繁殖性状的调控作用,并比较多胎高产的济宁青山羊与单胎的沂蒙黑山羊发情期卵巢组织中MTR1A的差异表达量。采用荧光定量差异显示PCR(DDRT-qPCR)技术,以持家基因GAPDH为分子内标,对比研究了褪黑素受体1A(MTR1A)基因在多胎的济宁青山羊和单胎的沂蒙黑山羊发情期卵巢组织中的差异表达量。研究发现,MTR1A在两种山羊发情期的卵巢组织中均有表达,但是,在青山羊发情期卵巢组织中的表达量显著低于在沂蒙黑山羊卵巢组织中的表达量(P<0.05)。说明,发情期褪黑素受体基因在卵巢组织中的高表达是限制山羊卵巢排卵和产羔数的重要因素之一。研究结果提示:卵巢组织是褪黑素作用的重要靶器官,褪黑素对于山羊卵巢组织的发育、成熟和排卵具有重要影响。研究结果对于阐明褪黑素受体调控山羊生殖机能的作用机理提供了基础研究数据。

兔球虫PCR检测方法的改进和应用

兔球虫病由艾美耳属球虫寄生于消化道而引起，对养兔业的危害极大。由于兔艾美耳球虫的11个虫种在致病性上有较大差异，因此进行准确的虫种鉴定对兔球虫病的诊断和防治有十分重要的意义。为提高和扩大PCR方法检测粪便样品中艾美耳球虫的灵敏度和应用范围，我们利用全基因组扩增技术对提取自粪便样品的球虫基因组进行预扩增，提高PCR反应初始模板含量，再利用兔艾美耳球虫ITS-1序列种特异性引物对WGA产物进行PCR扩增，以鉴定虫种。结果显示，经全基因组扩增后的样品的PCR检测能够在单个卵囊的水平上进行虫种鉴定。利用该方法，我们对10份卵囊含量较少的田间兔粪样品进行了PCR检测，对其中的虫种进行了的鉴定。检测结果显示，与卵囊形态鉴定相比，该方法不仅与能确定形态的形态学检测结果一致，还能够检测出形态学不易判断的虫种，体现了更高的准确性。该技术的应用可提高田间样品检测的敏感性和准确度，为兔球虫临床感染情况提供实践指导。

荧光定量PCR检测山羊褪黑素受体表达体系的优化研究

本研究通过系统对比试验,优化建立了检测山羊卵巢组织中褪黑素受体基因表达量差异的荧光定量PCR技术体系,在这种体系下检测褪黑素受体1A基因在山羊卵巢组织中的差异表达量,可以得到最优的标准曲线,使起始模板浓度与循环数有良好的线性关系,且扩增效率百分数Eff接近1;荧光动力学曲线符合标准的"S"形荧光增长曲线,曲线拐点清楚,基线平而无明显上扬趋势;熔解曲线成单峰,充分说明扩增的特异性高,产物单一,与SYBR Green I荧光染料结合的为目标DNA片段,荧光曲线能够准确反映目的产物的扩增结果。

多胎与单胎山羊发情期卵巢褪黑素受体基因的克隆测序分析

为揭示褪黑素影响山羊繁殖性状的遗传机制,本研究采用差异显示PCR(DDRT-PCR)和克隆测序技术,研究了褪黑素受体1a(MelR1a)基因在多胎的济宁青山羊和单胎的沂蒙黑山羊发情期卵巢组织中的表达情况,并对MelR1a基因进行了克隆测序分析。检测结果表明,MelR1a在两种山羊卵巢中均有表达,说明,褪黑素可以通过分布于卵巢中的褪黑素受体而对山羊的生殖发挥重要的调控作用。克隆测序分析结果表明,两种山羊发情期卵巢组织中褪黑素受体1a基因的碱基组成没有变异,说明山羊褪黑素受体基因序列具有高度的保守性。

家兔抗球虫免疫及兔球虫病疫苗研究进展

兔球虫是一类专性寄生于兔消化系统的顶复门原虫，能够引起家兔严重的寄生虫病，对养兔业造成极大的危害。疫苗免疫一直被认为是防控球虫病最为安全有效的方法，遗憾的是由于对兔球虫免疫学特性的研究不够深入，当前尚无疫苗问世，因此开展兔球虫病疫苗研究对于家兔养殖业有着十分重要的意义。以减毒早熟株作为疫苗进行免疫是球虫病疫苗的理想形式，目前已成功选育多个兔球虫早熟株，并在试验中证实了其能够为家兔提供良好的免疫保护。本文综述了近年来家兔抗球虫免疫和疫苗研发领域的相关研究成果，以期为今后兔球虫的免疫学研究和疫苗研发提供参考。

不同日龄家兔对2种兔球虫易感性的对比研究

兔球虫专性寄生于兔消化系统（肝脏及肠道），所引起的兔球虫病对养兔业危害极大。兔球虫病对断奶后至3月龄的幼兔危害最大，本文用5000个中型艾美耳球虫和无残艾美耳球虫卵囊分别接种30、50和70日龄的新西兰白兔，通过统计兔排出的球虫卵囊量来分析不同日龄幼兔的易感性。结果显示，中型艾美耳球虫感染时，70日龄兔卵囊排出总量仅为3．7×10^7，明显低于30日龄（1．03×10^7）、50日龄（6．5×10^8）兔，且差异显著；而无残艾美耳球虫感染也得到相似的结果。同时，30日龄兔在感染后临床症状明显，精神萎靡，便秘、腹泻现象交替出现。该结果表明断奶前后（30日龄左右）幼兔对两种球虫的易感性最强。

肠艾美耳球虫张家口分离株致病性和免疫原性的初步研究

肠艾美耳球虫是兔球虫中的主要致病虫种之一，充分研究其生物学特性对兔球虫病的防治有十分重要的意义。本文对肠艾美耳球虫张家口分离株的致病性和免疫原性进行了初步研究。利用3个剂量（1×10^4、1×10^5、1×10^6）的肠艾美耳球虫张家口分离株孢子化卵囊感染35—45日龄无球虫兔，观察临床症状和体重变化，以研究其致病性；21d后，再用1×10。个肠艾美耳球虫孢子化卯囊进行攻毒，监测体重变化和卵囊排出量，评价其免疫原性。结果发现，接种1×10^4个卵囊，即可导致家兔出现临床症状，与空白对照组相比，日增重显著下降，更高感染剂量则会加重症状。攻毒后，免疫组增重未受影响，与空白对照组相比无差异，而不免疫攻毒组体重显著下降；同时免疫组的卵囊排出量显著低于不免疫攻毒组。结果表明肠艾美耳球虫张家口分离株对仔兔具有中等致病性；同时其免疫原性良好。因此可以把该株球虫作为原始株进行早熟虫株选育，并以此为基础，进行兔球虫病疫苗的开发。

鲁西黄牛群体遗传多样性的微卫星标记研究

本研究采用微卫星标记技术,检测了鲁西黄牛群体的遗传多样性现状。从联合国粮农组织(FAO)和国际动物遗传学会(ISAG)推荐的30对微卫星引物中,筛选出6对多态性丰富的微卫星位点,对112个个体的DNA多样性进行了检测,结果共检测到101个基因座,每个座位的等位基因数范围为4-6个。所有座位的平均等位基因数为4.67±0.82,平均有效等位基因数为2.54±0.64,平均杂合度(H)为0.59±0.09,平均期望杂合度为0.41±0.09,平均多态性信息含量(PIC)为0.53±0.09,符合评价遗传多样性的要求。检测结果发现,鲁西黄牛群体的遗传多样性较高。研究结果为鲁西黄牛的保种和合理开发利用提供了科学依据。