带有突变穿膜肽重组凋亡素可溶性表达的研究

目的构建apoptin(凋亡素)-HBDCK-pET28a突变体重组表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现高效可溶性表达,并观察突变后穿膜肽(CPP)在HeLa细胞中的转导活性。方法采用PCR介导突变方法将重组蛋白apoptin-HBD及EGFP-HBD的HBD结构域中的Cys(C)突变为Lys(K)。突变的重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化目的蛋白,进一步观察HeLa细胞突变后HBD的转导活性。结果经双酶切鉴定和序列分析,突变后的重组质粒apoptin-HBDCK-pET28a及EGFP-HBDCK-pET28a构建正确。转化E.coli BL21(DE3)后,融合蛋白均获得可溶性表达。EGFP-HBDCK作用于HeLa细胞13 h后,可观察到细胞内强绿色荧光。结论 HBD结构域中C突变为K,可达到融合蛋白可溶性表达的目的,且仍能保持很强的转导活性,可携带EGFP蛋白进入HeLa细胞。

在弱标记的传感器时间序列上基于突变的事件分类

随着传感器广泛应用于各个领域,在传感器生成的时间序列上识别事件越来越受到广泛的关注。针对震荡的传感器时间序列,提出事件分类算法BEC。对于原始长时间序列和标记时间点作为类标签,BEC主要解决了两个问题。首先是将标记时间点扩展为包含充分信息的子序列以分类,再者是提取基于突变的特征以训练分类模型。实验结果证明,无需大部分时间序列分类问题中不现实的假设和太多人力干预,BEC提取的基于突变的特征能够充分描述事件,极大保留事件中关键信息,在现实数据集上的表现优于现有的时间序列分类算法。

低收入者保险分析

低收入者存在收入水平低和保险需求大两方面特点,在基础的社会保险无法对低收入者风险进行完全的风险覆盖时,商业保险就应当成为有益补充,然而商业保险在低收入者保险这方面存在空缺,如何开拓低收入者保险保障成为文章研究的重点。

凋亡素融合蛋白质高表达菌株的筛选及其产物活性测定

目的筛选凋亡素-HBD融合蛋白质高表达的工程菌株,验证其目标产物具有抑制肿瘤细胞增值的活性。方法在不同大肠杆菌宿主中凋亡素融合蛋白质表达,筛选出高表达工程菌,随后诱导表达和纯化凋亡素融合蛋白质,并通过噻唑蓝法(MTT法)检测目标产物对肿瘤细胞的抑制活性。结果凋亡素-HBD融合蛋白质在SG工程菌的表达量较好。MTT法检测表明,凋亡素融合蛋白质有抑制HeLa细胞增值的活性。结论获得一种凋亡素-HBD融合蛋白质的高表达工程菌株,并证实其产物能够进入HeLa细胞并诱导细胞凋亡。

凋亡素融合蛋白在HeLa细胞中的转导及体外活性分析

研究胞外超氧化物歧化酶(EC-SOD)的肝素结合域(HBD)在HeLa细胞中的转导活性,并证实HBD具有运载药物蛋白(凋亡素)进入细胞并诱导肿瘤细胞凋亡的能力。通过克隆表达的HBD-EGFP融合蛋白经Ni2+-NTA纯化后,观察其转导活性;并利用HBD-凋亡素融合蛋白表达纯化后,用噻唑蓝(MTT法)检测肿瘤细胞的凋亡。结果表明:用荧光显微镜可观察到HeLa细胞内有绿色荧光;MTT法检测表明凋亡素融合蛋白能诱导HeLa细胞的凋亡;HBD具有转导活性,能携带药物蛋白(凋亡素)进入细胞并能诱导HeLa细胞的凋亡。

EGFP-Arg7融合蛋白表达及在HeLa细胞中的转导活性

目的构建pET-28a-EGFP-Arg7重组子,观察表达的融合蛋白EGFP-Arg7在细胞内的转导活性。方法构建EGFP-Arg7(阴性对照为EGFP)序列,与pET-28a连接后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并经Ni2+-NTA纯化。纯化产物作用于HeLa细胞后用荧光显微镜观察其转导活性。结果重组pET-28a-EGFP-Arg7经酶切鉴定和序列分析,证明构建正确。转化E.coli BL21(DE3)后,重组蛋白获得可溶性表达。纯化后的融合蛋白纯度达90%以上。重组蛋白EGFP-Arg7作用于HeLa细胞后用荧光显微镜可观察到强绿色荧光。结论 Arg7具有很好的转导活性,能携带与其连接的蛋白质穿过HeLa细胞膜。

家畜血液储存条件及预处理方式对种属鉴定的影响

目的:考察血液储存时间、储存温度和预处理方式对种属鉴定的影响。方法:以猪、牛、羊血液为样本,考察储存时间、储存温度和预处理方式对种属鉴定的影响。储存时间考察1周和3周,储存温度考察4℃和−20℃,预处理方式考察是否去除红细胞。样本经DNA提取,PCR-RFLP检测后进行结果判定。结果与结论:储存1周时,两种储存温度及预处理方式均能正常进行种属鉴定。储存3周时,两种储存温度,预处理时不去除红细胞会产生假阴性判定,假阴性是由于提取的DNA中存在PCR抑制物;预处理时去除红细胞可正常检测。该结论对于猪、牛、羊血液具有普适性。

胰蛋白酶的纯化及质量研究

目的 :建立一种胰蛋白酶的纯化方法,并进行质量研究。方法 :胰蛋白酶原(粗品)经溶解、低pH孵放法灭活病毒、超滤除盐、酶原活化、亲和层析纯化、洗脱液超滤除盐、膜过滤法去除病毒和真空冷冻干燥等工序,即得胰蛋白酶。结果:所获的胰蛋白酶符合药典规定的限度要求。结论:该方法可缩短生产工时、提高成品效价和工艺稳定性,降低糜蛋白酶含量,提升了胰蛋白酶的质量和安全性。

猪寄生虫病的危害性与防治措施

猪寄生虫病具有减缓猪生长速度、降低饲料利用率,引起和传播其他疾病等危害性,笔者认为,防治猪寄生虫病的重点工作是要做到定期驱虫,保持饲养场清洁卫生,及时隔离病猪等.

浅析事业单位会计制度改革对会计工作的实际影响

由财务部在2012年末校改成功的新《事业单位会计制度》在2013年初公告替代旧会计制度投入实行。这是一个随着社会经济不断前进发展的必然过程,是我国前进的必然经历。本文主要分析了事业单位会计制度的改革以及实施改革后意义和对会计工作的实际影响。

促皮质素制备工艺中病毒灭活能力的验证

目的:对促皮质素进行病毒灭活工艺验证。方法:选择非脂包膜病毒EMCV、PPV和ReoV-3用于验证加热处理步骤的病毒灭活能力,选择脂包膜病毒PRV、VSV和BVDV用于验证丙酮沉淀处理步骤的病毒灭活能力。结果:加热处理步骤可有效灭活非脂包膜病毒,丙酮沉淀处理步骤可有效灭活脂包膜病毒。结论:本次验证为促皮质素的病毒安全性评价提供了依据。

“瘦肉精”的危害与食品安全

食品安全关系到人类生命的延续,是公共卫生健康所面临的最主要问题之一,必须受到重视,并且刻不容缓。近几年各国的食品安全问题源源不断,不管是食品加工的过程还是食品的原材料问题都备受关注,其中要数食品添加剂问题尤为突出。猪肉十分受中国人民的喜爱,所以对猪肉以及肉产品的监控与把关是非常重要的,不仅要保证猪源的健康、要有合格证明更要对猪是否使用了"瘦肉精"进行严格把控。