MicroRNA-338-3p真核表达载体的构建及其对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的构建microR-338-3p(miR-338-3p)过表达载体并探究其对人胃癌SGC-7901细胞系体外增殖的影响。方法以pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体为基础,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切和纯化后与人工合成miR-338-3p的寡聚核苷酸进行连接,转化至E.Coli Top10后,经过DNA测序、BLAST检测及验证;将构建成功的载体瞬时转染入SGC-7901细胞系中,应用Real-time PCR检测miR-338-3p的表达水平,利用MTT法检测细胞增殖的改变。结果测序验证成功构建了miR-338-3p的真核表达载体;瞬时转染SGC-7901细胞后miR-338-3p表达水平有显著增加,能够抑制SGC-7901细胞的体外增殖。结论成功构建了miR-338-3p的真核表达载体,获得了瞬时表达miR-338-3p的人胃癌SGC-7901细胞系,初步证实miR-338-3p过表达可抑制肿瘤细胞的增殖。

SCN5A基因L812Q突变体细胞模型的建立与细胞定位

目的建立SCN5A基因L812Q突变体细胞模型,并细胞定位。方法应用重叠PCR的方法构建SCN5A基因L812Q突变;以p MD19-T载体克隆SCN5A基因L812Q突变体;SCN5A-L812Q通过EcoRⅠ和ACCⅠ限制性内切酶位点插入表达载体质粒p EGFP-C1-h H1中,测序鉴定;将构建好的p EGFP-C1-h H1-L812Q突变型质粒、p EGFP-C1-h H1野生型质粒瞬时转染进入HEK293细胞,通过免疫荧光检测L812Q突变的细胞定位;将p EGFP-C1-h H1、p EGFP-C1-h H1-L812Q和p EGFP-C1-h H1+p EGFP-C1-h H1-L812Q分别转染进入HEK293细胞,用Western blot方法分析L812Q突变体的表达。结果测序结果显示p EGFP-C1-h H1-L812Q表达载体构建成功。荧光检测验证,野生型SCN5A主要定位在细胞膜上,而突变型定位在细胞质中。通过Western blot分析发现,突变型通道蛋白在细胞质中的表达量高于野生型。结论本研究成功构建了SCN5A基因突变载体p EGFP-C1-h H1-L812Q,证明SCN5A基因L812Q突变型主要定位在细胞质中。

MiR-214表达载体的构建及其对肝癌细胞Hep3B增殖的影响

目的构建pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-214表达载体,并检测其对肝癌Hep3B细胞增殖的影响。方法以人的基因组DNA为模板,利用PCR扩增miR-214前体序列,构建pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-214表达载体,序列比对及实时定量PCR验证miR-214表达载体是否构建成功,MTT实验检测miR-214对肝癌Hep3B细胞增殖的影响。结果序列比对及实时定量PCR验证miR-214表达载体构建成功。将成功构建的miR-214表达载体导入肝癌细胞Hep3B,发现其对细胞增殖具有抑制作用。结论本研究成功构建miR-214表达载体并证明miR-214可能参与肝癌发展的过程。

基于翻转课堂的TBL结合PBL模式的实验教学尝试

在器官-系统整合课程生长发育区段实验教学中,增设遗传性长QT综合征的分子诊断及相关研究设计的实验内容,开展基于翻转课堂的TBL结合PBL教学模式的尝试。各讨论小组学生汇报精彩、讨论热烈。95%以上的学生表示满意,认为这种实验教学模式非常有必要;90%以上的学生认为其有助于提高自主学习能力和对理论知识的理解以及综合素质的提升。基于翻转课堂的TBL结合PBL的教学模式,结合合适教学主体和课程内容的选择,可以增强学生学习的内驱力,教学互益,为深入实验教学改革提供了可靠数据和有益借鉴。