类鼻疽杆菌毒素分子BLF1的重组表达及生物学活性

目的重组、表达类鼻疽杆菌毒素BLF1并研究其生物学活性。方法运用DNA重组技术,以p GEX为表达系统在大肠杆菌中表达BLF1蛋白;以纯化重组蛋白r BLF1免疫新西兰大白兔,获得抗r BLF1血清,Western blot及ELISA鉴定抗血清;不同浓度r BLF1蛋白腹腔注射BALB/c小鼠,观察小鼠生存率;A549细胞模型中,通过CCK-8实验研究目的蛋白的细胞毒性效应及抗体阻断作用。结果从类鼻疽杆菌基因组DNA中PCR得到了BLF1目的基因,连接到p GEX-6p-2质粒,经双酶切及测序表明重组质粒构建成功。GST-BLF1蛋白经诱导表达、酶切纯化得到了相对分子质量为23×103的高纯度r BLF1,免疫家兔抗血清ELISA效价达1∶1 280 000,Western blot鉴定在目的蛋白位置处出现特异印记条带。重组r BLF1蛋白腹腔注射BALB/c小鼠,小鼠死亡率与蛋白剂量呈正相关。r BLF1蛋白能明显杀伤A549细胞,抗体可有效阻断其杀伤作用。结论成功重组表达了具有生物活性的r BLF1,该蛋白具有明显杀伤A549肿瘤细胞的作用,同时能够导致小鼠死亡但表现出一定耐受性。

非小细胞肺癌中九基因联合检测突变分析

目的通过ARMS-PCR法联合检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancers,NSCLC)中9个驱动基因(ALK、ROS1、RET、EGFR、KRAS、HER-2、PIK3CA、NRAS和BRAF)的突变情况,分析其突变状态及临床意义。方法采用ARMS-PCR技术检测2018年2月~2019年2月陆军军医大学第一附属医院病理科存档的522例NSCLC肿瘤组织中的9个驱动基因的突变情况。结果522例NSCLC中ALK、ROS1和RET的融合突变率分别为5.17%、1.34%、1.34%,EGFR、KRAS、HER-2、PIK3CA、NRAS和BRAF的突变率分别为47.32%、7.28%、1.72%、1.72%、0.95%和0.57%。女性患者中EGFR突变和ALK融合突变率明显高于男性患者(P<0.001),而KRAS突变率低于男性患者(P<0.001)。EFGR和KRAS突变在肺腺癌中显著高于肺鳞癌(P<0.001)。无吸烟史患者中EGFR突变和ALK融合发生率均高于吸烟患者(P<0.001),KRAS突变在吸烟患者的发生率显著高于无吸烟史患者。利用ARMS法联合检测9个基因在单点检测EGFR基础上增加了10.15%的患者可使用靶向药物(P<0.01)。结论在9个驱动基因突变中,EGFR突变、ALK融合、KRAS突变与患者性别、吸烟以及组织学类型密切相关,其它较为罕见驱动基因突变并未发现与组织学类型、患者性别及吸烟与否相关。九基因联合检测可作为NSCLC更简便适用的药物靶向检测方法。

内皮素-1促进反应性星形胶质细胞增殖

目的利用成年SD大鼠脊髓损伤原代培养的反应性星形胶质细胞模型,探讨内皮素-1(ET1)与反应性星形胶质细胞增殖之间的关系。方法建立成年SD大鼠脊髓损伤原代培养的反应性星形胶质细胞模型,用100 n M ET1和5μM BQ788(内皮素受体B的拮抗剂)处理反应性星形胶质细胞48 h,通过免疫荧光的方法对各实验组中星形胶质细胞的标记分子Vimentin及Brdu进行检测,以确定ET1对反应性星形胶质细胞增殖的影响。结果 ET1组中星形胶质细胞的数量明显增加,Brdu阳性细胞占星形胶质细胞的平均百分比(19.41%)高于正常对照组(3.28%,P<0.01);而ET1+BQ788组中Brdu阳性细胞数占星形胶质细胞的平均百分比为10.38%,明显低于ET1组(19.41%,P<0.01)。结论在成年SD大鼠脊髓损伤原代培养的反应性星形胶质细胞模型中,ET1可刺激反应性星形胶质细胞的增殖,ET1受体endothelin B的拮抗剂BQ788可有效抑制ET1对反应性星形胶质细胞的促增殖效应。

骨形态发生蛋白4对反应性星形胶质细胞增殖的影响

目的利用成年SD大鼠脊髓损伤原代培养的反应性星形胶质细胞模型,探讨骨形态发生蛋白4(BMP4)与反应性星形胶质细胞增殖之间的关系。方法建立成年SD大鼠脊髓损伤原代培养的反应性星形胶质细胞模型,用BMP4(10 ng/m L)和BMP4的拮抗剂——Noggin(100 ng/m L)处置反应性星形胶质细胞48 h,通过免疫荧光的方法检测各实验组(正常对照组、BMP4组、Noggin组及BMP4+Noggin组)中星形胶质细胞的标记分子vimentin Brdu,观察BMP4对反应性星形胶质细胞增殖的影响。结果 BMP4组中Brdu阳性细胞占星形胶质细胞的平均百分比为14.03%,明显高于正常对照组(3.10%),P<0.01;而BMP4+Noggin组中Brdu阳性细胞数占星形胶质细胞的平均百分比为3.81%,明显低于BMP4组(P<0.01)。结论在成年SD大鼠脊髓损伤原代培养的反应性星形胶质细胞模型中,BMP4可刺激反应性星形胶质细胞的增殖。