沙棘多糖对脑胶质瘤大鼠的抑瘤作用及对HMGB1、MGMT及TLR4表达的影响

目的:探讨沙棘多糖(HRP)对脑胶质瘤大鼠的抑瘤作用及对高迁移率族蛋白1(HMGB1)、O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)和Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法:选取60只SD大鼠,脑部接种C6脑胶质瘤细胞,建立脑胶质瘤模型。造模成功后随机分为模型组(15只)、HRP低剂量组(14只)、HRP高剂量组(14只)、替莫唑胺组(14只)。接种5 d后,HRP低剂量组、HRP高剂量组分别灌胃沙棘多糖100 mg/kg、200 mg/kg,替莫唑胺组灌胃替莫唑胺20 mg/kg,模型组灌胃等量生理盐水,每日1次,连续10 d。磁共振成像(MRI)检查并记录肿瘤大小,测量肿瘤体积,计算抑瘤率;苏木精-伊红(HE)染色观察脑胶质瘤形态学变化情况;流式细胞仪检测肿瘤组织细胞凋亡和细胞周期;实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测肿瘤组织中HMGB1、MGMT和TLR4 mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测肿瘤组织HMGB1、MGMT和TLR4蛋白表达。结果:与模型组比较,HRP低剂量组、HRP高剂量组、替莫唑胺组肿瘤体积减小,Sub-G1期、G0/G1期细胞增加,S期、G2/M期细胞减少,凋亡率升高,HMGB1、MGMT和TLR4 mRNA及蛋白相对表达量降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与HRP低剂量组比较,HRP高剂量组、替莫唑胺组肿瘤体积减小,抑瘤率升高,Sub-G1期、G0/G1期细胞增加,S期、G2/M期细胞减少,凋亡率升高,HMGB1、MGMT和TLR4 mRNA及蛋白相对表达量降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与HRP高剂量组比较,替莫唑胺组抑瘤率降低,Sub-G1期、G0/G1期细胞减少,S期、G2/M期细胞增加,凋亡率降低,HMGB1、MGMT和TLR4 mRNA及蛋白相对表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。HE染色显示,模型组脑胶质瘤内肿瘤细胞生长活跃,数量丰富,排列密集,核大深染,肿瘤细胞异型性明显,核浆比例高,核分裂现象多见,呈浸润性生长,无明显细胞萎缩坏死现象;HRP低剂量组、HRP高剂量组和替莫唑胺组细胞数量较模型组减少,细胞生长密度降低,细胞体积减小,出现部分坏死。结论:HRP对脑胶质瘤大鼠具有抑瘤作用,可能与抑制HMGB1、MGMT及TLR4的mRNA转录与蛋白表达有关。

神经内镜手术治疗高血压性桥脑出血

目的探讨神经内镜手术治疗重型高血压性桥脑出血的临床效果。方法回顾性分析2017年1月至2021年6月神经内镜手术治疗的20例高血压性桥脑出血的临床资料。结果枕下后正中经膜髓帆入路手术清除血肿9例,枕下经乙状窦后入路手术清除血肿11例。术后复查CT相识血肿完全清除16例(80%),绝大部分清除4例(20%),无再出血。术后随访6个月,GOS评分5分3例,4分6例,3分4例,2分2例,1分5例;预后良好率为45%(9/20),治疗有效率为65%(13/20),病死率为25%(5/20)。术后随访1年,GOS评分5分4例,4分5例,3分3例,2分1例,1分7例;预后良好率为45%(9/20),治疗有效率为60%(12/20),病死率为35%(7/20)。结论神经内镜手术治疗高血压性桥脑出血,视野清晰,清除血肿直观、彻底,止血明确,效果良好。

ANXA1在脑胶质母细胞瘤中表达上调并促进胶质母细胞瘤的恶性进展

目的 分析ANXA1 mRNA和蛋白在脑胶质母细胞瘤组织与正常脑组织之间的表达差异以及ANXA1在脑胶质母细胞瘤的表达,及其与脑胶质母细胞瘤患者预后的关系;体外探讨ANXA1对脑胶质母细胞瘤细胞系增殖、迁移、侵袭、凋亡能力的影响。方法 (1)从公共数据库获取脑胶质母细胞瘤组织及正常脑组织的表达数据及相应的临床数据。比较脑胶质母细胞瘤组织与正常脑组织之间ANXA1 mRNA的表达差异及ANXA1 mRNA高低表达组之间胶质母细胞瘤患者的生存时间差异。(2)通过人类蛋白质图谱公共数据库获取ANXA1蛋白在U251细胞内定位;免疫组化检测脑胶质母细胞瘤组织及其对应的癌旁组织中ANXA1蛋白的表达。(3)体外培养脑胶质母细胞瘤细胞系U87和U251,构建敲低ANXA1基因表达的小干扰RNA(ANXA1-siRNA)并转染至U87和U251细胞中。qRT-PCR和Western blot用于检测mRNA和蛋白的表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell和流式细胞术分别用于检测细胞增殖、细胞迁移和侵袭、细胞凋亡。结果 (1)在TCGA、Rembrandt和GSE16011队列中均发现ANXA1 mRNA在胶质母细胞瘤组织中表达明显上调,差异有统计学意义(P <0.05)。另外,在这三个队列中均发现ANXA1 mRNA高表达组患者总体生存时间明显低于低表达组患者(P <0.001)。(2)qRT-PCR和Western blot的分析结果均表明与阴性对照组相比,ANXA1-siRNA组ANXA1的表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P <0.001)。(3)CCK-8检测结果表明敲低ANXA1表达后,U87和U251细胞的增殖能力明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P <0.001)。Transwell细胞迁移检测结果表明:敲低ANXA1表达后U87和U251细胞的迁移能力明显低于对照组[实验组:(25.40±2.70)、(11.20±4.44);阴性对照组:(55.20±8.70)、(32.20±8.11)];细胞侵袭能力明显低于对照组[实验组:(19.60±3.21)、(12.80±4.66);阴性对照组:(43.40±5.13)、(38.6±7.37)]能力均明显低于阴性对照组,差异均有统计学意义(P <0.001)。流式细胞术检测结果显示:U87和U251细胞实验组凋亡细胞(11.84±2.50)%、(29.96±2.57)%均明显高于相应阴性对照组(7.42±2.56)%、(18.39±1.89)%,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 ANXA1在胶质母细胞瘤组织中表达上调并与患者的不良预后相关。下调ANXA1基因表达能够抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力,促进胶质瘤细胞的凋亡。

miRNA-99b负调控mTOR抑制脑胶质瘤细胞的侵袭能力

目的研究miRNA-99b及mTOR在胶质瘤中的表达水平及其对脑胶质瘤侵袭能力的影响及机制。方法用real-time PCR法检测脑胶质瘤组织与对照脑组织中miRNA-99b及mTOR的表达。miRNA-99b模拟物与野生型或突变型mTOR 3'UTR重组载体共转染后,应用荧光素酶基因报告系统检测miRNA-99b是否与mTOR基因3'UTR结合。应用real-time PCR法和Western blot检测miRNA-99b模拟物转染U251细胞后,细胞中miRNA-99b、mTOR mRNA和mTOR蛋白的表达,Transwell法检测细胞的侵袭能力。mTOR质粒转染U251细胞后,检测细胞中miRNA-99b的表达及细胞的侵袭能力的变化。统计学分析miRNA-99b表达水平与胶质瘤及预后的相关性。结果脑胶质瘤组织中miRNA-99b表达明显低于对照脑组织,mTOR mRNA表达明显高于对照脑组织;miRNA-99b模拟物和野生型mTOR 3'UTR重组载体共转染的U251细胞的荧光强度明显降低。miRNA-99b模拟物转染后,U251细胞中miRNA-99b的表达水平上升,而mTOR蛋白及mRNA的表达水平下降,U251细胞及侵袭能力下降。改变mTOR表达后,U251细胞中miRNA-99b的表达水平无明显变化,升高mTOR表达能够恢复因miRNA-99b抑制的细胞侵袭能力。Kaplan-Meier生存分析及Log-rank检验显示,低表达miRNA-99b患者的总生存期明显低于高表达组。结论过表达miRNA-99b可能通过靶向调控mTOR抑制脑胶质瘤细胞的侵袭能力,miRNA-99b可作为脑胶质瘤的治疗靶点。

下调CENP-W对人脑胶质瘤U87细胞的影响

目的:研究下调着丝粒蛋白W(centromere protein W,CENP-W)的表达水平对人脑胶质瘤U87细胞的影响。方法:采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制人脑胶质瘤U87细胞CENP-W的表达,采用RT-qPCR和Western blot法评价siRNA的干扰效果,采用MTT法、BrdU实验和平板集落形成实验测定细胞的增殖,Transwell小室检测细胞侵袭力的变化,划痕实验检测细胞迁移能力的变化,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡的改变。结果:MTT实验、平板集落形成实验和BrdU实验显示转染siRNA的实验组U87细胞的增殖能力、集落形成能力较空白对照组及阴性对照组明显降低;Transwell实验和划痕实验显示实验组细胞的迁移、侵袭能力较空白对照组及阴性对照组明显减弱;流式细胞术分析表明实验组细胞的细胞周期被阻滞在G_0/G_1期;实验组细胞凋亡比例较对照组增多(P<0.05)。结论:下调CENP-W的表达可抑制人脑胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进细胞的凋亡,提示CENP-W有望成为人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点。

着丝粒蛋白W调控脑胶质瘤侵袭性的作用

目的:探讨着丝粒蛋白W(CENP-W)在人脑胶质瘤组织中表达的意义及其对人脑胶质瘤侵袭性的影响。方法:免疫组织化学法、实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测不同级别人脑胶质瘤中CENP-W的mRNA与蛋白表达水平变化。运用Transwell实验检测特异性siRNA敲低CENP-W表达后U251细胞侵袭能力的变化,同时检测大鼠肉瘤癌基因(RAS)蛋白及mRNA水平。结果:CENP-W在人脑胶质瘤组织中呈高表达。CENP-W可增强U251细胞侵袭能力,表达受抑制时可下调U251细胞中RAS基因的水平。结论:CENP-W在人脑胶质瘤中起着致癌基因的作用,可能通过调节RAS信号通路提高胶质瘤的侵袭性。

柴胡皂甙d上调CDKN1B抑制脑胶质瘤细胞增殖的机制研究

目的:探讨柴胡皂甙d(Saikosaponins-d,SSd)对脑胶质瘤细胞增殖的作用及调控机制。方法:体外培养脑胶质瘤Μ251细胞株,加入终浓度分别为0、5、10、20μg/m L的SSd,采用CCK-8法检测Μ251细胞的增殖率,通过流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率的改变,RT-PCR法检测细胞CDKN1B mRNA的表达水平。通过CDKN1B siRNA复原转染实验,以10μg/m L的SSd为对照,检测CDKN1B在SSd影响胶质瘤增殖、细胞周期及凋亡中的作用。结果:SSd可抑制脑胶质瘤Μ251细胞的增殖水平,且随SSd浓度越高,抑制作用越明显。同时SSd阻滞细胞周期在G0/G1期,促进胶质瘤细胞凋亡。CDKN1B siRNA能明显促进胶质瘤的增殖,CDKN1B表达下调能明显恢复SSd抑制的胶质瘤细胞增殖能力,同时能恢复SSd阻滞的胶质瘤细胞周期,抑制胶质瘤细胞的凋亡水平。结论:柴胡皂甙d能够通过抑制增殖并促进凋亡对人脑胶质瘤Μ251细胞生长起到抑制作用,其机制可能与上调CDKN1B的表达有关。

着丝粒蛋白W在脑胶质瘤中的表达及其对侵袭的作用

目的探讨着丝粒蛋白W(centromere protein W,CENP-W)在人脑胶质瘤中的表达水平及与预后的相关性,并探讨其对脑胶质瘤细胞侵袭作用的影响。方法在高级别胶质瘤组织、低级别胶质瘤及瘤旁正常脑组织中,采用蛋白质印迹法、实时荧光定量PCR法检测CENP-W的表达水平,并统计分析表达水平与胶质瘤临床病理特征及预后的相关性,应用特异性siRNA干扰U251细胞中CENP-W表达使其下调后,通过Transwell侵袭实验观察转染CENPW siRNA对U251细胞侵袭能力的影响。结果胶质瘤组织CENP-W表达水平明显高于正常脑组织,并且与胶质瘤的病理级别呈正相关性;转染成功后,与空白对照组及阴性对照组比较,转染CENP-W-siRNA组的细胞侵袭及迁移能力均下降,Kaplan-Meier生存分析及Log-rank检验显示低表达CENP-W患者的PFS明显长于高表达组。结论CENP-W表达与胶质瘤的病理级别呈正相关,CENP-W可以促进脑胶质瘤的侵袭,预示CENP-W可作为胶质瘤治疗新靶点。

神经内镜血肿清除术治疗重型脑室出血并铸型的临床研究

目的 探讨神经内镜引导下血肿清除术治疗重型脑室出血铸型的临床效果。方法 回顾性分析2018年12月~2021年6月新乡医学院第一附属医院神经外科收治的重型脑室出血并铸型病人40例,按手术方法分为两组,每例20例,分别采用侧脑室外引流(对照组)和神经内镜血肿清除术(内镜组)治疗。根据术前和术后mGS评分对比评估各组血肿清除情况。对比评估术后尿激酶用量、引流管留置时间,再出血、脑积水和颅内感染等并发症的发生率。术后3月评估预后,ADL分级Ⅰ~Ⅲ级为恢复有效。结果 内镜组术前mGS评分24.55±3.00,术后mGS评分14.45±4.72。对照组术前mGS评分24.70±3.71,术后mGS评分20.40±3.70。组术前术后相比较差异有统计学意义(P<0.05)。两组术前mGS评分相比较差异无统计学意义(P>0.05),内镜组术后与对照组术后mGS评分相比较差异有统计学意义(P<0.05)。内镜组术后残余血肿量更少。术后尿激酶用量内镜组为(3.65±3.24)万u,对照组为(10.15±3.26)万u,内镜组应用更少。脑室外引流留置时间内镜组(8.3±1.7)天,对照组(11.6±1.7)天,内镜组留置时间更短。术后并发症发生率内镜组10.0%,对照组35.0%,内镜组发生率更低。术后3个月ADL评分内镜组有效率70.0%(14/20),对照组有效率30.0%(6/20),内镜组预后更好。结论 神经内镜血肿清除术治疗重型脑室出血铸型可早期快速减少血肿的体积,缓解急性梗阻性脑积水,降低并发症发生率及改善预后,安全有效。

基于STAT3通路探讨芍药苷对垂体瘤细胞增殖凋亡的影响

目的观察芍药苷对垂体瘤细胞增殖凋亡的影响及作用机制。方法取新鲜垂体瘤组织消化分离培养垂体瘤细胞,分别采用不同浓度芍药苷处理48 h后,采用四唑盐(MTT)法检测细胞存活率,选择半数细胞存活率对应的芍药苷浓度进行实验。分别采用芍药苷、信号传导及转录激活因子3(STAT3)信号通路激动剂与芍药苷+激动剂处理垂体瘤细胞,MTT法检测细胞存活率,流式细胞技术检测细胞凋亡率,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测Janus激酶2(JAK2)、STAT3、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA水平,免疫印迹法(Western Blot)检测磷酸化JAK2(p-JAK2)、磷酸化STAT3(p-STAT3)、JAK2、STAT3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果芍药苷对垂体瘤细胞生长有明显的抑制作用并促进凋亡,这种作用呈剂量依赖性。RT-qPCR和Western Blot结果显示:芍药苷对STAT3信号通路有抑制作用,可抑制Bcl-2转录及表达,促进Bax转录及表达。结论芍药苷可能通过抑制STAT3信号通路,调控细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达,从而抑制垂体瘤细胞增殖,诱导其凋亡。

人脑胶质瘤中RSUME的SUMO化与HIF-1α/VEGF通路的相关性

目的探讨人不同病理级别脑胶质瘤组织中RWD结构修饰增强子(RWD containing sumoylation enhancer,RSUME)、泛素样小分子修饰因子(small ubiquitin-like modifier,SUMO)-1、缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其相关性。方法应用RT-PCR法检测63例不同级别人脑胶质瘤组织及9例正常脑组织中RSUME mRNA、HIF-1αmRNA、VEGF mRNA的表达,免疫组化检测组织中SUMO-1、HIF-1α、VEGF表达情况,分析与胶质瘤分级的关系以及表达的相关性。结果脑胶质瘤组织中RSUME、HIF-1α、VEGF mRNA较正常脑组织中表达明显增高(P<0.01),并随胶质瘤恶性程度的增高而表达增高(P<0.01),RSUME与HIF-1α、VEGF的mRNA表达水平呈正相关;脑胶质瘤组织中SUMO-1、HIF-1α、VEGF的蛋白表达较正常脑组织明显增高(P<0.01),并随胶质瘤恶性程度的增高而表达增高(P<0.01),SUMO-1与HIF-1α蛋白表达呈正相关(r=0.857,P<0.01);Kaplan-Meier生存分析及Log-rank检验显示低表达RSUME患者的PFS明显长于高表达组(χ2=36.032,P<0.01)。结论 RSUME可能通过SUMO化增强HIF-1α/VEGF通路表达,预示RSUME可能与脑胶质瘤血管新生及肿瘤的侵袭、进展有关,预示RSUME可作为胶质瘤治疗的新靶点。

人脑胶质瘤中CENP-W/B23调控Ras信号通路的相关性

【目的】探讨人不同病理级别脑胶质瘤组织中着丝粒蛋白W(CENP-W)、核仁磷酸蛋白(B23)、大鼠肉瘤癌基因(RAS)的表达及其相关性。【方法】在高级别胶质瘤组织、低级别胶质瘤及瘤旁正常脑组织中,采用免疫组织化学法分别检测CENP-W的表达水平,并统计学分析蛋白表达水平与胶质瘤临床病理特征的关系,采用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测CENP-W、B23、RAS的表达水平,分析与胶质瘤分级的关系以及表达的相关性。应用特异性si RNA干扰U251细胞中CENP-W表达使其下调后,采用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测RAS蛋白及m RNA表达的变化。【结果】胶质瘤组织CENP-W、B23、RAS的表达水平明显高于正常脑组织,并且与胶质瘤的病理级别呈正相关性;CENP-W、B23、RAS的m RNA表达水平之间成正相关性。CENP-W可以上调RAS的表达。【结论】CENP-W、B23、RAS表达均与胶质瘤的病理级别呈正相关。CENP-W可以调节RAS的表达,预示CENP-W可作为胶质瘤治疗新靶点。

靶向RWDD3基因shRNA慢病毒载体的构建及功能鉴定

目的构建RWD结构小泛素化增强子(RWDD3)shRNA慢病毒表达载体,为探讨RNA干扰技术抑制人脑胶质瘤细胞RWDD3基因的相关研究奠定基础。方法设计RWDD3的3条siRNA的靶点序列,合成含干扰序列的双链DNA发卡结构shRNA,分别与双酶切后的载体连接,构建3种重组质粒pGC-LV-shRNA1、pGC-LV-shRNA2和pGC-LV-shRNA3,并转化于DH5α感受态细胞,提取阳性克隆质粒测序,转染293T细胞,生产慢病毒颗粒,并检测病毒滴度。将3种重组慢病毒及阴性对照病毒分别感染人脑胶质瘤细胞U251,实时定量PCR和Western blot分别检测RWDD3mRNA和蛋白的沉默效果。结果测序结果证实3种慢病毒载体均包装成功,滴度分别为5×10^(11) TU/L、4×10^(11) TU/L、5×10^(11) TU/L。感染U251后,RWDD3mRNA及蛋白的表达量均较阴性对照组和未感染组明显降低(P<0.05);其中以LV-RWDD3-shRNA-1作用显著,mRNA表达下调79.2%,蛋白表达下调68.2%(P<0.05);而阴性感染对照组和未感染组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建3种RWDD3shRNA慢病毒表达,可有效下调U251细胞RWDD3mRNA和蛋白的表达,其为进一步研究以RWDD3为靶点的脑胶质瘤基因治疗提供稳定转染细胞的载体奠定基础。

630例面肌痉挛微血管减压术治疗体会

目的分析微血管减压术治疗面肌痉挛的临床疗效。方法回顾性分析自2008年1月至2014年3月南昌大学第二附属医院神经外科行微血管减压手术治疗的630例面肌痉挛患者的临床资料，其中包括16例二次手术患者；记录术后效果及并发症，并分析其疗效。结果630例患者中579例抽搐完全消失（91．9％），小血管压迫类型患者463例中428例抽搐消失（92．4％），椎．基底动脉复合体压迫患者167例中151例抽搐完全消失（90．4％1。在15例术后无效和21例复发患者中，有16例行二次手术治疗，术后抽搐均完全消失。结论微血管减压术治疗面肌痉挛的疗效确切，术后复发及无效患者二次手术效果明显。

下调miRNA-99b表达对脑胶质瘤细胞侵袭及mTOR／4E-BP1信号通路调控的影响

目的探讨下调微小RNA（miRNA）-99b表达对脑胶质瘤细胞侵袭的影响及其作用机制。方法体外常规培养脑胶质瘤U251细胞。（1）将U251细胞分为空白对照组、无义序列对照组和miRNA．99b抑制物组，后2组分别转染无义序列和miRNA-99b抑制物，空白对照组不做任何处理。采用RT-PCR检测U251细胞中miRNA-99b、哺乳动物雷帕霉素靶分子（mTOR）mRNA的表达，采用Westernblotting检测U251细胞中mTOR、真核翻译起始因子4E结合蛋白1（4E-BP1）及磷酸化（p）-4E-BP1蛋白的表达，采用Transwell侵袭实验检测U251细胞的侵袭能力。（2）将U251细胞分为无义序列对照组、mTORsiRNA组，分别转染无义序列和mTORsiRNA。采用RT—PCR检测U251细胞中miRNA-99b、mTORmRNA的表达，采用Westernblotting检测U251细胞中mTOR、p-4E-BPl蛋白的表达。f3）将U251细胞分为miRNA-99b抑制物＋无义序列对照组、miRNA-99b抑制物＋mTORsiRNA组，分别转染miRNA-99b抑制物＋无义序列、miRNA-99b抑制物＋mTORsiRNA。采用Westcrnblotting检测U251细胞中P-4E-BP1蛋白的表达，采用Transwell侵袭实验检测U251细胞的侵袭能力。结果（1）与空白对照组、无义序列对照组比较，miRNA-99b抑制物组U251细胞中miRNA-99bmRNA表达明显降低，mTORmRNA及蛋白表达明显升高．P-4E．BPl蛋白表达明显升高，穿膜细胞数明显增多，差异均有统计学意义（P〈0．05），而4E-BP1蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）与无义序列对照组比较，mTORsiRNA组U251细胞中mTORmRNA及蛋白表达明显降低，P-4E-BP1蛋白表达明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．05），而miRNA-99bmRNA表达差异无统计学意义（P〉O．05）。（3）与miRNA-99b抑制物＋无义序列对照组比较，miRNA-99b抑制物＋roTORsiRNA组U251细胞中P-4E．BP1蛋白表达明显降低．穿膜细胞数明显减少，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论下调miRNA．99b表达可促进脑胶质瘤细胞侵袭，其作用机制与mYOR／4E-BP1信号通路调控有关。