背景:在非接触共培养条件下,软骨细胞可诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞。骨膜细胞作为软骨修复的种子细胞,其与软骨细胞共培养的作用及影响鲜有研究。目的:通过软骨细胞与骨膜细胞非接触共培养,利用软骨细胞诱导骨膜细胞向软骨细...背景:在非接触共培养条件下,软骨细胞可诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞。骨膜细胞作为软骨修复的种子细胞,其与软骨细胞共培养的作用及影响鲜有研究。目的:通过软骨细胞与骨膜细胞非接触共培养,利用软骨细胞诱导骨膜细胞向软骨细胞分化。方法:采用胰酶、Ⅱ型胶原酶消化法分离兔关节软骨细胞;组织块培养法分离兔骨膜细胞。分别取第2代软骨细胞和骨膜细胞,按1∶1比例通过transwell培养板进行非接触共培养作为实验组,单纯骨膜细胞培养作为对照组。培养2周后,倒置显微镜观察2组细胞形态;Ⅱ型胶原免疫组化染色和甲苯胺蓝染色检测2组细胞的Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的合成;RT-PCR检测2组细胞的蛋白聚糖、Ⅱ型胶原α1和性别决定区Y框蛋白9 m RNA表达水平。结果与结论:(1)培养2周后,实验组共培养骨膜细胞逐渐变为类圆形软骨细胞形态,对照组骨膜细胞仍为长梭形;(2)实验组共培养骨膜细胞的Ⅱ型胶原免疫组化、甲苯胺蓝染色均为阳性,对照组为阴性;(3)RT-PCR结果显示,实验组共培养骨膜细胞的蛋白聚糖、Ⅱ型胶原α1、性别决定区Y框蛋白9 mR NA相对表达量明显高于对照组;(4)结果提示,非接触共培养条件下,软骨细胞可以诱导骨膜细胞向软骨细胞分化。展开更多
文摘背景:在非接触共培养条件下,软骨细胞可诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞。骨膜细胞作为软骨修复的种子细胞,其与软骨细胞共培养的作用及影响鲜有研究。目的:通过软骨细胞与骨膜细胞非接触共培养,利用软骨细胞诱导骨膜细胞向软骨细胞分化。方法:采用胰酶、Ⅱ型胶原酶消化法分离兔关节软骨细胞;组织块培养法分离兔骨膜细胞。分别取第2代软骨细胞和骨膜细胞,按1∶1比例通过transwell培养板进行非接触共培养作为实验组,单纯骨膜细胞培养作为对照组。培养2周后,倒置显微镜观察2组细胞形态;Ⅱ型胶原免疫组化染色和甲苯胺蓝染色检测2组细胞的Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的合成;RT-PCR检测2组细胞的蛋白聚糖、Ⅱ型胶原α1和性别决定区Y框蛋白9 m RNA表达水平。结果与结论:(1)培养2周后,实验组共培养骨膜细胞逐渐变为类圆形软骨细胞形态,对照组骨膜细胞仍为长梭形;(2)实验组共培养骨膜细胞的Ⅱ型胶原免疫组化、甲苯胺蓝染色均为阳性,对照组为阴性;(3)RT-PCR结果显示,实验组共培养骨膜细胞的蛋白聚糖、Ⅱ型胶原α1、性别决定区Y框蛋白9 mR NA相对表达量明显高于对照组;(4)结果提示,非接触共培养条件下,软骨细胞可以诱导骨膜细胞向软骨细胞分化。
