ELISPOT检测技术在结核病诊断中的应用

结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌复合群所引起的一种人兽共患传染病,关于结核病的防治,难题之一依然是诊断问题。酶联免疫斑点试验是在酶联免疫吸附试验的基础上发展的一种检测技术,能够在单细胞水平上定量检测低频细胞亚群,具有高灵敏度、高特异性和高通量等特点,在肿瘤疫苗评价试验、免疫监测及免疫学研究中发挥重要作用。目前,该检测技术在结核病诊断中已实现临床检验,并且已有商品化的T-SPOT.TB试剂盒应用于人结核病诊断。本文对ELISPOT检测技术在结核病诊断中的应用作一综述。

牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测试剂盒的研制与评价

目的研制一种牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测试剂盒,并在奶牛结核病检疫中进行初步应用和评价。方法建立牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测方法,基于此法试制3批试剂盒,并对试剂盒的灵敏度、可重复性和保存期进行评价,其后进行初步应用,对961头奶牛采用单纯颈部皮试变态反应、商品化BOVIGAMTM试剂盒与试制的牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测试剂盒进行同步检测。结果该试剂盒对质控样品的最低检出量达到8.21ng/mL,而且检测重复性良好,试剂盒保存期达12个月以上。在进行临床试验时,试制的试剂盒与单纯颈部皮试变态反应相比,阳性一致率为70.59%,阴性一致率为99.20%,总一致率为98.44%;与BOVIGAMTM试剂盒相比,阳性一致率为91.30%,阴性一致率为99.78%,总一致率为99.58%。其灵敏度为85.00%,特异性为100.00%。结论成功建立牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测方法,并研制出相应试剂盒,具有良好应用前景。

结核分枝杆菌在动物中的流行与传播

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)是一种重要的人兽共患病病原菌,人类是其主要宿主。千百年来,由于动物与人类关系密切,动物也成为结核分枝杆菌的重要宿主,且感染结核分枝杆菌的动物还能成为传染源,将其传播至人类和其他动物。关于动物感染结核分枝杆菌已有大量报道,包括大象、非人灵长类动物、貘、海狮、犬、猫、牛、鸟等。本文就结核分枝杆菌在野生动物、家畜中的流行与传播进行介绍,总结其在动物间传播的主要途径。

结核分枝杆菌转座突变库的建立及应用

为利用转座突变技术构建结核分枝杆菌H37Ra转座突变库,优化转座突变构建流程,并应用其筛选与生物被膜形成和抗胁迫有关的基因。利用耻垢分枝杆菌大量富集温敏型ΦMycoMarT7噬菌体,转导H37Ra,建立结核分枝杆菌转座突变库,突变库容量约3.58×10^(4)^(-6)CFU·mL,转导效率为7.96×10^(-6)。使用Sauton培养基对突变体进行筛选,观察突变体的生物被膜形成能力,获得8株生物被膜形成缺陷的突变株,经全基因组测序定位,其中1个突变基因为Rv3099c。构建表达该基因的重组质粒,将重组质粒导入耻垢分枝杆菌中。与导入空质粒的对照组相比,导入重组质粒的耻垢分枝杆菌生物被膜形成能力明显增强,但抗温度胁迫及SDS胁迫能力并无增强,明确Rv3099c与结核分枝杆菌生物被膜形成能力相关。