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双分离法记录Wistar大鼠神经元的全细胞电流
被引量:
1
1
作者
沈佩同
毕平
李刚
《中国组织工程研究与临床康复》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期285-288,共4页
背景:细胞培养与通道电流记录是全细胞膜片钳实验的主要难点。目的:介绍一种简单可行的降低全细胞膜片钳实验方法,将细胞急性分离与电流的分离技术结合起来,以提高工作效率,缩短实验的时间,从根本上降低膜片钳实验的难度。方法:SPF级出...
背景:细胞培养与通道电流记录是全细胞膜片钳实验的主要难点。目的:介绍一种简单可行的降低全细胞膜片钳实验方法,将细胞急性分离与电流的分离技术结合起来,以提高工作效率,缩短实验的时间,从根本上降低膜片钳实验的难度。方法:SPF级出生4~7d的wistar大鼠40只,雌雄不限。采用改良的急性分离的方法制备Wistar大鼠脑皮质细胞,将大鼠脑皮质切成400~600μm厚度的薄片,在人工脑脊液中通混合气静止1h,并通以氧气。将脑组织块放入含有16u/mL(typeX)和2u/mL(typeXIV)蛋白水解酶的人工脑脊液中,孵育60min,清除消化酶。在全细胞电压钳制模式下,保持电位-80mV,给予-60mV到60mV的去极化脉冲刺激,步阶为+10mV,刺激波宽160ms。记录到跨膜总电流,在全细胞电极液里面加入70mmol/LCsCl,70mmol/LCsF;在外液中先后加入11μmol/L阻断剂河豚毒素、30mmol/L的氯化四乙胺、1mmol/L的4-AP。分别记录内向钠电流,瞬时外向钾电流和延迟整流钾电流,结果用clampfit分析处理。主要观察:①细胞的形态学观察。②全细胞电流的记录。③内向钠电流的记录。④外向钾电流的记录。结果与结论:细胞空间立体结构强,表面光滑,有完整的树突或者轴突,且细胞的活性可以在25℃室温下维持8~10h。在外液中加入1μmol/L的河豚毒素基本上可以阻断钠电流;30mmol/L的氯化四乙胺和1mmol/L的4-AP可以阻断外向钾电流。结果表明,改良的细胞急性分离方法细胞功能完好。通过电流分离技术,不改变细胞外液和电极液,仅需添加特异阻断剂,可记录到内向钠电流,瞬时外向钾电流以及延迟整流钾电流,较之传统方法可显著提高工作效率。
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关键词
急性分离法
电流分离法
全细胞电流
膜片钳
下载PDF
职称材料
0.5 mT工频磁场对小鼠海马CA3区锥体神经元延迟整流钾离子通道和动作电位的影响
被引量:
1
2
作者
沈佩同
毕平
+1 位作者
李刚
林凌
《国际生物医学工程杂志》
CAS
北大核心
2010年第2期87-90,共4页
目的 研究与日常生活密切相关的0.5 mT工频磁场对小鼠海马CA3区锥体神经元的影响.方法 采用急性分离的方法制备小鼠海马CA3区锥体神经元,用0.5 mT、50 Hz磁场对小鼠海马CA3区锥体神经元刺激30 min后,运用全细胞膜片钳技术研究其延迟整...
目的 研究与日常生活密切相关的0.5 mT工频磁场对小鼠海马CA3区锥体神经元的影响.方法 采用急性分离的方法制备小鼠海马CA3区锥体神经元,用0.5 mT、50 Hz磁场对小鼠海马CA3区锥体神经元刺激30 min后,运用全细胞膜片钳技术研究其延迟整流钾通道电流,Ik和动作电位特性.结果 0.5 mT工频磁场照射小鼠海马CA3区锥体神经元30 min后,其电流密度减小,对照组和曝磁组最大电流密度分别为(171.05+1.32)pA/pF、(139.65±2.37)pA/pF(n=12,P〈0.05);对照组和曝磁组半数激活电压分别为(7.44±0.64)mV、(34.09+6.48)mV(n=12,P〈0.05);斜率因子分别为11.36±0.57、19.97±3.45(n=12,P〈0.05);动作电位复极化时程APD90由(14.63±0.34)ms延长为(21.74±1.47)ms(n=12,P〈0.05).结论 0.5 mT工频磁场可使小鼠海马CA3区锥体神经元延迟整流钾通道电流Ik减小,通道开放延迟,通道激活速度减慢,动作电位复极化时间延长.
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关键词
延迟整流钾离子通道
膜片钳技术
电磁场
动作电位
神经元
原文传递
题名
双分离法记录Wistar大鼠神经元的全细胞电流
被引量:
1
1
作者
沈佩同
毕平
李刚
机构
天津医科大学生物医学工程系
天津大学精密仪器与光电子学院
出处
《中国组织工程研究与临床康复》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期285-288,共4页
文摘
背景:细胞培养与通道电流记录是全细胞膜片钳实验的主要难点。目的:介绍一种简单可行的降低全细胞膜片钳实验方法,将细胞急性分离与电流的分离技术结合起来,以提高工作效率,缩短实验的时间,从根本上降低膜片钳实验的难度。方法:SPF级出生4~7d的wistar大鼠40只,雌雄不限。采用改良的急性分离的方法制备Wistar大鼠脑皮质细胞,将大鼠脑皮质切成400~600μm厚度的薄片,在人工脑脊液中通混合气静止1h,并通以氧气。将脑组织块放入含有16u/mL(typeX)和2u/mL(typeXIV)蛋白水解酶的人工脑脊液中,孵育60min,清除消化酶。在全细胞电压钳制模式下,保持电位-80mV,给予-60mV到60mV的去极化脉冲刺激,步阶为+10mV,刺激波宽160ms。记录到跨膜总电流,在全细胞电极液里面加入70mmol/LCsCl,70mmol/LCsF;在外液中先后加入11μmol/L阻断剂河豚毒素、30mmol/L的氯化四乙胺、1mmol/L的4-AP。分别记录内向钠电流,瞬时外向钾电流和延迟整流钾电流,结果用clampfit分析处理。主要观察:①细胞的形态学观察。②全细胞电流的记录。③内向钠电流的记录。④外向钾电流的记录。结果与结论:细胞空间立体结构强,表面光滑,有完整的树突或者轴突,且细胞的活性可以在25℃室温下维持8~10h。在外液中加入1μmol/L的河豚毒素基本上可以阻断钠电流;30mmol/L的氯化四乙胺和1mmol/L的4-AP可以阻断外向钾电流。结果表明,改良的细胞急性分离方法细胞功能完好。通过电流分离技术,不改变细胞外液和电极液,仅需添加特异阻断剂,可记录到内向钠电流,瞬时外向钾电流以及延迟整流钾电流,较之传统方法可显著提高工作效率。
关键词
急性分离法
电流分离法
全细胞电流
膜片钳
分类号
R-332 [医药卫生]
下载PDF
职称材料
题名
0.5 mT工频磁场对小鼠海马CA3区锥体神经元延迟整流钾离子通道和动作电位的影响
被引量:
1
2
作者
沈佩同
毕平
李刚
林凌
机构
天津医科大学生物医学工程系
天津大学精密仪器与光电子学院
出处
《国际生物医学工程杂志》
CAS
北大核心
2010年第2期87-90,共4页
文摘
目的 研究与日常生活密切相关的0.5 mT工频磁场对小鼠海马CA3区锥体神经元的影响.方法 采用急性分离的方法制备小鼠海马CA3区锥体神经元,用0.5 mT、50 Hz磁场对小鼠海马CA3区锥体神经元刺激30 min后,运用全细胞膜片钳技术研究其延迟整流钾通道电流,Ik和动作电位特性.结果 0.5 mT工频磁场照射小鼠海马CA3区锥体神经元30 min后,其电流密度减小,对照组和曝磁组最大电流密度分别为(171.05+1.32)pA/pF、(139.65±2.37)pA/pF(n=12,P〈0.05);对照组和曝磁组半数激活电压分别为(7.44±0.64)mV、(34.09+6.48)mV(n=12,P〈0.05);斜率因子分别为11.36±0.57、19.97±3.45(n=12,P〈0.05);动作电位复极化时程APD90由(14.63±0.34)ms延长为(21.74±1.47)ms(n=12,P〈0.05).结论 0.5 mT工频磁场可使小鼠海马CA3区锥体神经元延迟整流钾通道电流Ik减小,通道开放延迟,通道激活速度减慢,动作电位复极化时间延长.
关键词
延迟整流钾离子通道
膜片钳技术
电磁场
动作电位
神经元
Keywords
Delayed rectifier potassium channel
Patch-clamp technique
Electromagnetic fields
Action potential
Neurons
分类号
R [医药卫生]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
双分离法记录Wistar大鼠神经元的全细胞电流
沈佩同
毕平
李刚
《中国组织工程研究与临床康复》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
下载PDF
职称材料
2
0.5 mT工频磁场对小鼠海马CA3区锥体神经元延迟整流钾离子通道和动作电位的影响
沈佩同
毕平
李刚
林凌
《国际生物医学工程杂志》
CAS
北大核心
2010
1
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