一株2011年出现的季节性甲型H1N1流行性感冒病毒血凝素基因特性的研究

本文通过比较2011年分离培养的1株季节性甲型H1N1流行性感冒(简称流感)病毒(A/Shanghai/1167/2011(H1N1))与历年季节性甲型H1N1流感病毒的血凝素(HA)基因,追溯该病毒的基因变异与来源,探讨该毒株的出现对流感防控工作的意义。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增病毒的HA和神经氨酸酶(NA)片段,并进行测序;应用分子生物学软件对获得的序列进行分析,绘制基因进化树;同时,通过血凝抑制试验检测2011年下半年健康人群中该流感病毒的抗体水平。结果显示,A/Shanghai/1167/2011(H1N1)的HA基因序列与世界卫生组织(WHO)2007～2008年季节性甲型H1N1流感病毒疫苗株A/Brisbane/59/2007(H1N1)最接近,同源性达99.2%,与新型甲型H1N1流感病毒A/California/07/2009疫苗株同源性仅为72.4%。其HA基因裂解位点为PSIQSR↓GLF,尚未出现高致病性的分子特征。HA片段共编码557个氨基酸,有9个潜在的糖基化位点,序列与2009年前WHO疫苗株A/NewCaledonia/20/1999(H1N1)、A/SolomonIslands/3/2006(H1N1)和/Brisbane/59/2007(H1N1)相比,分别有15、12和4处不同,这些差异分布在Sa、Sb、Ca1、Ca2、Cb5个抗原决定簇的氨基酸差异分别有5、5和2处。该毒株在健康人群血清的抗体阳性率为34.33%,几何平均效价(GMT)为10.38。A/Shanghai/1167/2011(H1N1)是2011年出现在上海地区的一个季节性甲型H1N1流感病毒毒株,其抗原变异与既往季节性甲型H1N1流感病毒相比不大,但在以A(H1N1)pdm09为主要流行株的年份检测到散在发生的既往季节性甲型H1N1流感病毒毒株应当引起重视,其在人群中的抗体水平较低,易引起流行,需要提高对类流感人群中此种毒株的持续监测。

儿童下呼吸道人类博卡病毒感染的病毒载量和疾病严重程度相关性研究

目的研究下呼吸道感染患儿人类博卡病毒(HBoV)载量与疾病严重程度的相关性。方法对2009年1月至2012年9月间554例因下呼吸道感染住院的5岁以下患儿及195名健康对照组儿童下呼吸道吸出物(NPAs)、鼻咽拭子采用荧光聚合酶链反应(PCR)检测HBoV种类,并同时测定阳性标本感染HBoV的载量,利用商品化试剂盒检测其他种类的呼吸道病毒,结合患儿的临床症状和生化指标进行综合分析。结果实验组与健康对照组HBoV阳性率有明显差异,实验组病毒载量(5.10×106拷贝/mL)明显高于对照组(2.70×103拷贝/mL,P<0.05)。实验组中混合感染组疾病严重程度为一般和中等的患儿HBoV载量(分别为2.70×105、3.85×106拷贝/mL)明显低于严重患儿(8.70×106拷贝/mL,P<0.05)。在1例新生儿重症肺炎患儿NPAs、血液和粪便中均检测到HBoV,并排除了其他常见呼吸道病毒和细菌感染。结论 HBoV是呼吸道疾病致病病原,混合感染中HBoV载量与疾病严重程度呈正相关,HBoV在某些患儿中可以导致重症肺炎。

共有序列简并杂合寡核苷酸引物聚合酶链反应在呼吸道副黏病毒科病毒诊断中的应用

采用共有序列简并杂合寡核苷酸引物聚合酶链反应(CODEHOP PCR)体系和商品化RV12试剂盒对急性呼吸道感染患儿下呼吸道标本中的副黏病毒科病毒进行检测,比较CODEHOP PCR与RV12试剂盒检测结果的符合率和敏感度,观察CODEHOP PCR在临床呼吸道标本中对副黏病毒诊断的应用价值,进一步探讨具备检测已知呼吸道病毒和未知新病毒特点的CODEHOP PCR在呼吸道疾病谱和未知潜在呼吸道病毒诊断中的推广价值。采集2011年上海市儿童医院因急性呼吸道感染住院的患儿下呼吸道标本572份,分别采用2种方法对副黏病毒进行检测。CODEHOP PCR检测出阳性标本113例,阳性率为19.76%;RV12试剂盒检测出阳性标本102例,阳性率17.83%;2种方法检测符合率为85.39%。以10倍倍比稀释呼吸道合胞病毒A(RSVA)感染的细胞收获液,检测结果显示,CODEHOP PCR和RV12试剂盒检测下限分别为10-8和10-6。CODEHOP PCR具备简便、易操作和测序精度高等特点,适合疾病预防系统和临床检验科使用。该方法与一些新兴的高通量快速分子诊断技术结合,可提高检测灵敏度,具有高通量、快速检测和筛查未知新病毒的优势,在呼吸道病原体检测领域值得进一步优化和推广。

2009-2010年上海市儿童呼吸道病毒病原谱的建立和分析

目的应用多重PCR检测方法对上海市儿童呼吸道病毒感染进行检测,获得疾病谱分析其流行规律。方法 2009年1月到2010年3月上海市儿童医院因呼吸道感染住院病人下呼吸道标本519份,利用多重PCR技术进行12种常见呼吸道病毒的检测。结果在591例标本中病毒阳性率是58%(301/519)。其中呼吸道感染患儿中呼吸道合胞病毒B(RSVB)占首位,为37.5%(113/301),其次是鼻病毒(HRVA/B),为17.3%(52/301),比例最低的是副流感病毒2(PIV2),比例仅为0.7%(2/301)。人偏肺病毒(HMPV)的比例为6%(18/113)。结论 RSVB HRVA/B和PIV3以及Adv是上海市儿童呼吸道疾病感染的主要病原,混合感染以HRVA/B联合其他病毒为主。

2007年-2009年上海市闵行区流感监测结果分析

目的:了解上海市闵行区2007年-2009年度人群流感的流行特征,为本地区流感预防控制工作提供科学依据。方法:收集、汇总闵行区流感监测哨点的流感样病例数、就诊人数等数据进行描述性流行病学分析;对采集的流感样病例咽拭子标本用狗肾传代细胞进行流感病毒分离、培养,用红细胞凝集抑制实验鉴定流感病毒型和亚型。结果:2007年-2009年监测到流感样病例总数为7938例,流感样病例平均就诊比例为0.52%。,采集标本1277份,分离到各型流感毒株406株。2007年优势株为季节性H3N2,2008年优势株为季节性H1N1与B型(Yamagate系)共同流行,病毒分离及流行病学监测都显示2007年-2008年闵行区流感流行大致呈冬春季和夏季高发的特点。2009年冬春、夏季流感发病高峰不明显,但在11月-12月出现全年流感流行高峰,病毒分离结果显示冬春季为季节性H3N2、H1N1共同流行,夏秋季开始以季节性H3N2、甲型H1N1在人群中同时流行,之后以甲型H1N1为主。结论:2007、2008年闵行地区流感流行特点为冬春季和夏季高发,病毒优势株呈季节性H3N2、B、H1N1交替流行态势。2009年秋冬季暴发甲型H1N1流感疫情,9月-12月甲型H1N1毒株占全年检出毒株数的50%.