黄芩茎叶总黄酮调节EAE大鼠Th17/Treg平衡的研究

目的观察黄芩茎叶总黄酮(Scutellaria baicalensisstem-leaf total flavonoids,SSTF)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠疾病严重程度和Th17、Treg细胞的影响,初步探讨黄芩茎叶总黄酮对多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)的治疗作用。方法将50只大鼠随机分为正常组、模型组、黄芩茎叶总黄酮高剂量组(200 mg/kg)、黄芩茎叶总黄酮低剂量组(100 mg/kg)和醋酸泼尼松组(6 mg/kg),建模后分别行神经功能评分。灌胃给药16 d后,大鼠脊髓组织行HE染色,ELISA法测定大鼠血清中IL-17、TGF-β水平,流式细胞术检测大鼠外周血Th17、Treg细胞数量。结果与模型组大鼠比较,治疗组大鼠平均神经功能评分降低(P<0.05),炎性细胞浸润减少(P<0.05);血清中IL-17水平显著降低(P<0.05),而TGF-β水平显著升高(P<0.05);外周血中Th17细胞比例明显降低(P<0.05),而Treg细胞比例显著升高(P<0.05)。结论黄芩茎叶总黄酮灌胃给药可以调节CD4+T淋巴细胞亚群Th17/Treg细胞平衡,对EAE大鼠有一定的保护作用。

Notch信号对大鼠肝纤维化Th17/Treg平衡的影响

目的建立大鼠肝纤维化模型,探讨Notch信号在肝纤维化模型中的作用及对Th17/Treg细胞平衡的影响。方法40只Wistar雄性大鼠随机分为对照组(10只)、模型组(30只)。用刀豆蛋白A(Con A)建模,8周建模成功后模型组随机分成3组(PAPT组、TGFβ组、DMSO对照组),10只/组,并对其体外心尖取血3 ml,分离外周单个核细胞(PBMC),用Notch抑制剂DAPT及TGF-β抑制剂干预培养24 h,RT-PCR测Notch信号及TGF-β相关基因表达,流式细胞术测Th17和Treg细胞频率,ELISA法测PBMC培养上清中细胞因子IL-17、IL-23、TGF-β及IL-10的表达。结果与对照组相比,干预组Notch和TGF-β信号相关基因表达显著降低(P<0.05)。Th17细胞频率及其相关因子(IL-17、IL-23)水平降低(P<0.05),Treg细胞频率及其相关因子(TGF-β、IL-10)水平明显降低(P<0.05),Th17/Treg比值较对照组上升(P<0.05)。结论 Notch信号参与肝纤维化的发生发展,阻断Notch信号能抑制Treg细胞功能,降低TGF-β1水平,为肝纤维化的治疗研究提供实验基础。

槐耳颗粒免疫调控CXCL1在乳腺癌中的作用研究

目的研究CXCL1与乳腺癌增殖转移的相关性,为乳腺癌发病机制提供线索,探究中药槐耳颗粒对乳腺癌发生发展的影响及其发挥效应的机制,为乳腺癌的治疗提供理论依据。方法分别设置1 nmol/ml CXCL1组、0.1 nmol/ml CXCL1组、anti-CXCR2中和抗体处理组、5 mg/ml槐耳颗粒组、10 mg/ml槐耳颗粒组及空白对照组6组。CCK8检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,ELISA检测槐耳颗粒组与空白对照组CXCL1表达量,ELISA检测各组细胞Survivin、VEGF、MMP13的表达量。结果 CCK8检测细胞增殖活性:与空白对照组相比,CXCL1处理组细胞增殖活性明显增高且存在剂量依赖关系,有统计学意义(P<0.05);与空白对照组相比,anti-CXCR2中和抗体处理组细胞增殖活性明显降低(P<0.05);与空白对照组相比,槐耳颗粒组细胞增殖活性明显降低(P<0.05)且存在剂量依赖关系;流式测细胞凋亡结果:与空白对照组相比,CXCL1处理组细胞凋亡率明显降低(P<0.05)且存在剂量依赖关系,与空白对照组相比,anti-CXCR2中和抗体处理组细胞凋亡率明显增高(P<0.05),与空白对照组相比,槐耳颗粒组细胞凋亡率明显增高且随浓度增加作用增强(P<0.05);CXCL1表达量:与空白对照组相比,槐耳颗粒组CXCL1表达量明显降低(P<0.05),且存在剂量依赖关系;survivin、VEGF、MMP13表达量:与空白对照组相比,CXCL1处理组蛋白表达量明显增高(P<0.05)且存在剂量依赖关系,anti-CXCR2中和抗体处理组蛋白表达量明显降低(P<0.05),槐耳颗粒组蛋白表达量明显降低(P<0.05)且存在剂量依赖关系。结论乳腺癌中CXCL1通过与其受体CXCR2结合促进survivin的表达从而促进乳腺癌细胞的增殖抑制其凋亡,促进乳腺癌的发生;同时通过促进VEGF与MMP13的表达促进肿瘤血管的生成及细胞外基质的降解,提示CXCL1可能促进肿瘤转移。中药槐耳颗粒可通过抑制CXCL1表达而有效抑制乳腺癌细胞的增殖以及侵袭转移从而达到治疗效果。

TOLL样受体4拮抗剂干预周围神经损伤后的瓦勒变性

背景:外周神经损伤后发生瓦勒变性,其机制复杂,从免疫学角度对其进行调控可以影响神经早期修复效果。目的:分析特异性拮抗Toll样受体4(TLR4)对于大鼠坐骨神经损伤早期瓦勒变性及轴突再生的影响。方法:将50只Wistar大鼠随机分成3组:处理组及模型组横断大鼠右侧坐骨神经后,行神经外膜端端吻合;假手术组仅游离出坐骨神经,然后关闭切口。术前1 h及术后7 d处理组大鼠每天尾静脉注射0.15 mg/kg Toll样受体4拮抗剂TAK-242,模型组及假手术组大鼠尾静脉注射同等体积生理盐水。于术后24 h、3 d、4 d和7d取术侧坐骨神经。结果与结论:(1)实时定量PCR显示,与假手术组相比,术后24 h模型组白细胞介素1βmR NA和单核细胞趋化蛋白模型组相比,术后1 mR NA的表达均明显升高(P<0.001,P<0.001),与24 h处理组白细胞介素1βmR NA和单核细胞趋化蛋白1 mR NA的表达明显降低(P<0.001,P<0.001);(2)免疫荧光可见,与模型组相比,术后3 d处理组中CD68+细胞和iba1+细胞表达均显著下调(P<0.01,P<0.05);(3)固兰染色可见,在术后7 d,模型组和处理组坐骨神经断端均出现脱髓鞘反应,但与模型组相比,处理组神经断端髓鞘碎片清除率明显降低(P<0.05);(4)苏木精-伊红染色可见,在术后7 d,模型组坐骨神经断端较多炎性细胞浸润,许旺细胞增殖活跃,神经纤维大量再生通过吻合口,断端修复正常,处理组神经断端炎性细胞较少,纤维组织增生较少,吻合口有缝隙,断端修复能力减弱;(5)免疫组织化学可见,与模型组相比,术后4 d处理组中生长相关蛋白43蛋白表达均显著下调(P<0.05);(6)坐骨神经功能指数显示,与模型组相比,处理组大鼠在术后20,30和40 d同期比较明显降低,差异有显著性意义(P<0.05)。(7)结果证实,Toll样受体4拮抗剂导致大鼠坐骨周围神经损伤早期再生延迟,其机制可能是抑制了瓦勒变性过程中的的Toll样受体4信号通路。