家蚕不同化性品系间DNA甲基转移酶基因转录特性及胚胎早期甲基化水平差异分析

DNA甲基化修饰参与昆虫胚胎发育。家蚕是典型的胚胎滞育昆虫,为探明家蚕DNA甲基化在胚胎发育及滞育调控中的作用,以不同化性家蚕品系为材料,包括一化性品系安康4号(V^(1)AK4)和鲁一(V^(1)Lu1)、二化性品系秋丰(V^(2)QF)和P50(V^(2)P50)、有滞育多化性品系四海(V^(3)SH)、无滞育多化性品系Nistari(V^(3)Nistari),利用qRT-PCR技术分析家蚕甲基化酶基因BmDnmt在家蚕不同化性品系的表达水平,并利用免疫荧光法测定胚胎发育早期DNA甲基化水平。结果显示,在胚胎发育早期BmDnmt1和BmDnmt2在V^(1)AK4、V^(2)P50和V^(3)Nistari品系中表达水平较高,在V^(3)Nistari品系中BmDnmt1的表达水平显著高于V^(3)SH品系;在幼虫期,BmDnmt1和BmDnmt2在多化性家蚕卵巢或精巢组织中表达水平显著高于二化性家蚕,且它们在V^(3)Nistari中的表达水平显著高于V^(3)SH。采用免疫荧光法测定子代蚕卵的DNA甲基化水平,发现不同化性品系中DNA甲基化水平整体呈上升趋势,在产卵后96 h,多化性品系的DNA甲基化水平显著高于二化性品系。以上结果表明,BmDnmt在家蚕不同化性品系胚胎发育早期的表达水平和DNA甲基化水平均存在差异,推测家蚕幼虫期卵巢组织及胚胎发育早期的DNA甲基化水平与家蚕滞育性及化性有关联。研究结果为进一步解析DNA甲基化在家蚕胚胎发育和滞育中的调控机制提供了新的见解。

蓖麻蚕线粒体基因组中nd1及其侧翼tRNA基因的克隆与结构分析

按KoichiroTamura等 (1988)的方法制备出蓖麻蚕线粒体DNA ,用EcoRⅠ和XbaⅠ双酶解后 ,以pSK(+)(Ampr)为载体进行克隆 ,获得 1个 3 3kb的克隆片段。测序结果表明 ,所测序列包括部分 16SrRNA、完整的tRNA Leu ,nd1和tRNA Ser基因。其中 16SrRNA(3’端部分 )、nd1基因与家蚕具有很高的同源性。同时以nd1基因为依据构建了 17种动物的分子进化树 ,显示出蓖麻蚕与家蚕、野蚕有最近的演化关系。根据tRNA Leu和tRNA Ser基因的一级结构 ,推定了可能的二级结构 ,并与家蚕进行了比较。

家蚕蛹线粒体DNA EcoRⅠ 1.9kb片段的克隆及序列分析

克隆了二化性家蚕蛹体的线粒体DNAEcoRⅠ酶解 1 .9kb片段 ,并进行了序列测定。结果表明 :克隆片段中包含完整的线粒体赖氨酸转移RNA(tRNA Lys)基因、天冬氨酸转移RNA(tRNA Asp)基因、ATP合酶亚基Ⅷ基因和细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ、ATP合酶亚基Ⅵ基因的部分序列。并与果蝇线粒体DNA的同源性和参照果蝇线粒体DNA密码子翻译的氨基酸顺序进行了比较 。

家蚕、野桑蚕海藻糖酶基因启动子的特性及其滞育激素的转录调节

以pGEM 3Z为载体 ,分别构建了家蚕 (Bombyxmori)和野桑蚕 (Bombyxmandarina)海藻糖酶基因启动子控制的荧光素酶基因报告质粒 ,利用昆虫细胞瞬时表达系统进行启动子特性分析 ,并就家蚕滞育激素对海藻糖酶基因启动子转录活性的调节作用进行了研究。结果表明 :家蚕和野桑蚕海藻糖酶基因启动子在家蚕Bm5细胞、Sf2 1细胞中都有转录活性 ,但是活性都很低 ;家蚕滞育激素在体外条件下对家蚕海藻糖酶基因启动子活性的调节有明显的剂量效应 ,13～ 33nmol/L时有明显的增强作用 ,由此推测来自家蚕卵巢的Bm5细胞可能存在与滞育激素作用的受体。

夏秋用限性蚕品种秋·西×夏D的育成

以具有限性斑纹但经济性状较差的C3 1、J3 1和现行体质强、茧丝优的芙蓉、湘晖为亲本 ,采用杂交和回交的方法 ,经多代选择 ,育成了具有斑纹限性的夏秋用蚕品种西蓉和夏D ;通过配合力测定 ,组配成三元杂交种秋·西×夏D。鉴定结果表明 ,该品种体质强健 ,产量与苏 3·秋 3×苏 4相仿 ,茧丝质性状优良 ,茧丝长 1 0 61m ,解舒丝长 72 7m ,净度 95 4 5分 ,综合经济性状优。

家蚕线粒体基因组EcoRⅠ2.0kb片段的克隆及序列分析

对家蚕线粒体基因组EcoRⅠ 2 .0kb片段进行了克隆和序列分析 ,结果表明该片段包含完整的丝氨酸转移RNA基因、NADH氧化还原酶亚基Ⅰ基因、细胞色素氧化酶b亚基基因的部分序列。与果蝇 (Drosophilamelanogaster)的mtDNA进行了同源性比较 ,并根据无脊椎动物线粒体基因组密码子表 ,推定氨基酸序列。

大蚕蛾科绢丝昆虫线粒体基因组A+T丰富区序列及其系统发育研究

为了研究大蚕蛾科绢丝昆虫的进化关系,分别从蓖麻蚕、樗蚕和柳蚕的蛹中提取线粒体DNA,用PCR方法扩增线粒体A+T丰富区及侧翼序列,克隆到pMD18-T载体,进行序列测定.序列分析表明,克隆片段的基因依次为12SrRNA基因3′端、A+T丰富区、tRNAMet、tRNAIle、tRNAGln和ND2基因5′端,与家蚕和野桑蚕mtDNA排列顺序相同;在tR-NAGln和ND2基因之间有一段非编码区.根据柳蚕3个tRNA基因的核苷酸序列推定了其二级结构.基于5种大蚕蛾科绢丝昆虫和家蚕mtDNA A+T丰富区序列的系统发育树显示,柳蚕与蓖麻蚕、樗蚕的亲缘关系较近,与柞蚕的亲缘关系较远,而与家蚕的亲缘关系更远.本研究结果有助于阐明大蚕蛾科绢丝昆虫以及家蚕的起源和进化.

家蚕滞育激素受体体外上调下游海藻糖酶基因的表达

家蚕滞育激素(Bombyx mori diapause hormone,BmDH)与滞育激素受体(BmDH receptor,BmDHR)结合,调控其信号通路中的下游基因的表达.在二化性家蚕中,受滞育信号的影响,蛹体卵巢膜上海藻糖酶的活性增强.为了证实BmDHR对家蚕海藻糖酶基因(Bmtre)表达的调控作用,以pcDNA3.1为载体,构建了4种由ie-1启动子驱动的不同Bmdhr的表达质粒pcDNA-ie1-Bmdhr1、pcDNA-ie1-Bmdhr3、pcDNA-ie1-Bmdhr4、pcDNA-ie1-Bmdhr5和(Bmtre启动子驱动的萤火虫荧光素酶基因(luciferase,luc)报告质粒p3Z-Bmtre-luc;用脂质体(Lipofectin)包埋1种Bmdhr表达质粒或不同摩尔比的pcDNA-ie1-Bmdhr1/pcDNA-ie1-Bmdhr5以及报告质粒后,分别共转染源于卵巢的家蚕细胞BmN,在DH作用下体外检测BmDHRs对海藻糖酶基因启动子活性的影响.结果表明,4种滞育激素受体BmDHR-1、BmDHR-3、BmDHR-4和BmDHR-5分别表达时,均能上调海藻糖酶基因启动子的活性;不同摩尔比(1∶3,1∶1,3∶1)的BmDHR-1/BmDHR-5也均能上调海藻糖酶基因启动子的活性,由此证明BmDHR能上调其信号通路中下游基因Bmtre的表达.

春秋兼用耐氟蚕品种华峰_(GW)×雪·A的选配

采用系统分离法建立了华峰灰、白蛾系 ;以华峰、雪松为基础 ,选择耐氟性强、茧丝质优良的现行品种组配若干多元杂交组合 ,通过实验室常规鉴定和耐氟性能测试 ,筛选出耐氟性能好、茧丝质优的家蚕三元杂交组合华峰GW×雪·A。 4省区联合鉴定和种场试繁表明 ,该组合各项经济性状都达到了菁松×皓月的水平 ,繁育性能比华峰×雪松有较大的改善 ,在氟化物污染较严重的蚕区饲养能正常生长发育 。

我国蚕桑产业标准化的现状及其发展思考

分析了我国蚕桑产业标准化的现状,认为蚕桑产业标准化存在人才短缺、检测手段落后和标准数量少的问题。建议加大标准化人才培养力度,确定标准化目标,制订总体规划,分步实施;加强检测新技术研究,提高检测技术水平;提高标准编制水平,强化标准宣传普及。

2014年新版《蚕品种审定标准》解读——桑蚕品种审定标准

阐述了蚕品种审定的法律依据,介绍了2014年新版《蚕品种审定标准》的结构、桑蚕品种鉴定指标,以及审定的内容、依据和程序等,分析了新标准中桑蚕品种鉴定指标的特点。

昆虫杆状病毒egt基因研究进展

昆虫杆状病毒基因组中存在一个编码蜕皮甾醇尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶(ecdysteroid UDP-glucosyltransferase,EGT)的基因egt.

蚕品种国家审定40年的回顾与展望

为了更好地开展国家蚕品种试验和审定工作,在介绍日本蚕品种指定制度、印度蚕品种管理制度和我国现代蚕业初创期蚕品种指定制度的基础上,回顾了1980年以来我国蚕品种国家审定制度的建立和发展、国家审定标准的演变、鉴定试验方法的改进和蚕品种国家审定取得的成就,展望了未来蚕丝业发展的趋势及其对蚕品种的要求,提出了加快特殊性蚕品种鉴定技术和审定标准研究的建议。

桑蚕品种生产鉴定方法标准的研究

生产鉴定是桑蚕品种鉴定的重要环节,它以实验室鉴定为基础,并与之相互补充。在前期调研的基础上编制了农业行业标准《桑蚕品种生产鉴定方法》,这里简要介绍其主要内容及其确定依据。

创新蚕桑产业 弘扬蚕丝文化——谈江浙蚕桑产业振兴与蚕丝文化传承

蚕桑丝绸产业是蚕丝文化的载体,稳定蚕丝产业,筑牢产业根基,是传承创新蚕丝文化的前提。在当前科技、经济和社会快速发展的新时代,如何创新思路、稳定蚕桑产业,更好地继承发扬璀璨的中华蚕丝文化,是我们面临的重要课题。这里例举江浙的一些做法,并提出几点粗浅认识,以供同行商榷。一是通过强化产业顶层设计、稳定桑园面积和饲养数量、实施轻简化机械化工厂化养蚕、加强蚕业科技创新,稳定蚕桑丝绸产业发展;二是建设蚕桑丝绸特色小镇发展蚕丝文化旅游;三是从中小学生养蚕教育实践、大学生蚕丝文化研究与技术创新、蚕丝文化研究社团与蚕丝文化宣传等多角度,加强蚕丝文化教育与研究。

广西蚕丝业现状分析和可持续发展对策建议

概述了广西蚕丝业发展的现状,并从产业的自然基础、效益基础、政策基础、人才基础、科技基础、外部环境和外部动力等方面分析了广西蚕丝业快速发展的原因。认为广西蚕丝业面临的困难和存在的问题主要表现在产业链条短、经济效益低,蚕种生产设施陈旧、蚕种市场竞争无序,蚕桑病虫害多发、防控形势严峻,蚕茧收购质价分离而影响茧丝品质,蚕丝业技术人员匮乏等方面。提出了实现广西蚕丝业可持续发展的对策建议,广西蚕丝业应转变增长方式,把工作重点从注重桑园面积和蚕茧产量,转移到提高单产和茧丝品质、强化蚕桑资源循环利用,进一步提高产业经济效益。

蚕品种实验室鉴定方法探讨

蚕品种实验室鉴定是一项复杂细致的工作,是选育工作的继续,对新品种育成推广具有重要的意义.下面就如何做好这项工作谈一点经验和看法.1 试验设计试验设计应根据不同的目的要求进行,例如品种选育过程中进行初交鉴定时,正反交各设2区,每区200～400头即可;而对于省级和国家级鉴定,则要求有更高的可靠性,重复数和饲育头数也更多,正反交各设4～5区,每区400～500头.