氧化苦参碱抑制SMMC—7721细胞增殖的研究

目的 研究不同浓度氧化苦参碱对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用。方法SMMC-7721细胞经不同浓度氧化苦参碱处理后,用MTT法检测细胞生长和增殖,用流式细胞仪技术检测细胞DNA分布。结果氧化苦参碱浓度>2.5mg/ml,细胞毒作用较大;浓度在0.1～2.5mg/ml时,对肿瘤细胞的生长有抑制作用,且呈时间剂量依赖性;浓度<0.1mg/ml,对肿瘤细胞生长几乎无抑制作用。氧化苦参碱作用后可增加G0/G1期细胞所占的百分比,阻止细胞进入S期。2.5mg/ml氧化苦参碱作用于SMMC-7721细胞3d,可观察到凋亡峰。结论 一定浓度的氧化苦参碱有抑制SMMC-7721细胞增殖的作用。

慢性肝病患者的免疫功能指标与病理学改变关系的初步研究

目的：研究免疫功能指标与肝组织炎症和纤维化程度的关系。方法：对２００例慢性乙型肝炎患者行肝组织活检，并分析其免疫功能指标与肝组织炎症和肝纤维化程度、肝功能指标与血清纤维化指标的关系。结果：外周血Ｔ淋巴细胞亚群、白细胞介素（ＩＬ）２和ＩｇＭ水平在不同肝组织学炎症和纤维化程度患者间无显著差异（Ｐ＞００５），血清干扰素（ＩＦＮ）γ水平与肝组织炎症无明显相关（Ｐ＞０．０５），Ｓ０期显著低于其他各期（Ｐ＜０．０５），但Ｓ１～Ｓ４期间无显著差异（Ｐ＞０．０５）。外周血ＮＫ细胞活性随肝组织炎症程度的加重逐渐降低（Ｐ＜０．０５），随肝纤维化程度的加重有逐渐降低的趋势，但无显著差异（Ｐ＞０．０５）。ＩｇＡ水平随肝组织炎症程度的加重逐渐升高，在肝纤维化程度各分期间尽管有差异，但无显著性（Ｐ＞０．０５）。ＩｇＧ水平随肝组织炎症程度和纤维化程度加重有升高趋势，分别在Ｇ４（Ｐ＜０．０１）和Ｓ４（＜０．０５）期最高。相关分析表明ＮＫ细胞、ＩｇＡ和ＩｇＧ与肝功能指标和血清纤维化指标有一定相关性（Ｐ＜０．０５），其他免疫功能指标与肝功能和血清纤维化指标无显著相关（Ｐ＞０．０５）。结论：外周血ＮＫ细胞活性、ＩｇＡ和ＩｇＧ水平对辅助诊断肝纤维?

非甾体消炎药诱导胃癌细胞凋亡及其机制的研究

目的 :明确非甾体消炎药 (NSAIDs)能否诱导胃癌细胞凋亡 ;明确不同的p5 3基因表型对NSAIDs诱导的细胞凋亡是否有影响 ;明确NSAIDs对细胞凋亡相关基因Bcl 2及Bax表达的调控。方法 :通过MTT比色法检测NSAIDs对细胞生长活力的影响 ;应用丫啶橙 (AO)染色、Annexin V/PI双染色、共聚焦显微镜、流式细胞术检测细胞凋亡 ;应用RT PCR、Western blot方法检测bcl 2、bax基因及蛋白水平的改变。结果 :NSAIDs药物吲哚美辛 (Indo)和阿司匹林 (Asp)对胃癌细胞株AGS(p5 3+/ +)、MKN2 8(p5 3 / )均有显著的生长抑制作用 ,且呈时间 /浓度依赖性增强 ;在相同作用条件下 ,AGS细胞的凋亡率明显高于MKN2 8细胞 ,处理组MKN2 8细胞凋亡数量虽有所增多 ,但与正常对照组相比不具有统计学意义 ;随着药物作用时间的延长 ,Bcl 2基因mRNA表达逐渐减弱 ,Bax基因及蛋白表达逐渐增强 ,在药物作用 6～ 2 4小时改变最为明显。结论 :一定浓度的NSAIDs作用一定时间后 ,可诱导胃癌细胞凋亡 ,这为NSAIDs的抗肿瘤应用增加了理论依据 ;NSAIDs不能诱导p5 3基因突变的MKN2 8胃癌细胞株发生显著的凋亡 ,p5 3基因突变可能阻断了NSAIDs的凋亡诱导效应 ;NSAIDs可能通过调控Bcl 2。

子宫平滑肌瘤细胞增殖与表皮生长因子受体关系研究

目的 探讨子宫肌瘤细胞增殖及与表皮生长因子受体 (EGF R)水平的关系。方法 用流式细胞仪测定 5 0例子宫肌瘤组织的细胞周期DNA指数 (DI)、S期细胞百分比 (SPF)、细胞增殖指数 (PI) ,其中 2 8例测定肌瘤内EGF R水平 ,以子宫肌瘤邻近的正常子宫平滑肌为对照。结果 子宫肌瘤SPF、PI、EGF R水平显著高于正常子宫平滑肌 ;DI差异无显著性 ;肌瘤EGF R水平与PI、SPF呈正相关。结论 肌瘤细胞内高水平的EGF R与肌瘤细胞过度增殖有关。

益生菌对肝硬化患者免疫功能的影响

背景:肝硬化患者易发生多种感染,与免疫功能下降、肠道菌群紊乱有关。目的:观察口服微生态制剂对肝硬化患者细胞免疫功能、外周血单核细胞内毒素受体表达以及血清细胞因子和血浆内毒素水平的影响。方法:选取连续入院的肝硬化患者,予常规保肝治疗和口服微生态制剂4周,应用流式细胞术检测患者治疗前后外周血T细胞及其亚群和自然杀伤细胞、外周血单核细胞内毒素受体Toll样受体(TLR)4和CD14的表达,分别以酶联免疫吸附测定法和偶氮基质显色法检测细胞因子白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-10水平和血浆内毒素水平。结果:治疗前肝硬化患者外周血总T细胞(CD3)和CD4细胞数明显低于正常对照组(P<0.05),微生态制剂治疗后CD3和CD4亚群显著升高(P<0.05)。治疗前肝硬化患者外周血单核细胞内毒素受体TLR4和CD14的表达显著高于正常对照组(P<0.01),微生态制剂治疗后CD14表达显著降低(P<0.01),TLR4表达也呈下降的趋势,但差异无统计学意义。治疗前肝硬化患者血清IL-1β、TNF-α、IL-10水平显著高于正常对照组(P<0.05),微生态制剂治疗后血清细胞因子和血浆内毒素水平均无明显改变。结论:肝硬化患者存在细胞免疫功能下降和慢性炎症状态,微生态制剂可改善患者免疫功能的紊乱,因此可将其作为一种慢性肝病的辅助治疗。

甲基化修饰对人胃癌细胞系中多种基因的调控

甲基化紊乱与胃癌的发生有关,近年来甲基化已成为肿瘤研究的热点。目的:探讨在DNA甲基转移酶抑制剂5-氮脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-dC)的化学干预下,不同分化胃癌细胞系的抑癌基因、癌基因和与凋亡相关的基因与甲基化调控的关系,并辅以流式细胞仪检测细胞周期的变化。方法:培养高分化、中分化和未分化胃癌细胞系MKN-45、MKN-28和:HGC-27,分别以不同浓度的5-aza-dC干预细胞。提取细胞的RNA,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测p16INK4A、p21WAF1、p73、c-myc、c-Ha-ras、survivin和死亡相关蛋白激酶(DAP-ki-nase)等多种基因的表达情况;同时以流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果:抑癌基因中,MKN-45和HGC-27细胞中有p16INK4A表达,用5-aza-dC干预后其表达增强,MKN-45细胞的p16INK4A在5-aza-dC 10μmcl/L 24 h、2 μmol/L72 h和5μmol/L 72 h组表达增强,HGC-27细胞的p16INK4A在5 μmol/L 24 h和10 μmol/L 24 h组表达也有明显增强;p21WAF1、p73无明显变化。癌基因中c-myc、c-Ha-ras变化不明显。与凋亡相关的基因中,MKN-45细胞的survivin在5-aza-dC处理后表达增强,但HGC-27细胞的DAP-kinase无明显变化。结论:在不同分化的人胃癌细胞系中,甲基化修饰对抑癌基因。

肝硬化患者外周血单核细胞内毒素受体表达与慢性炎症反应关系的临床意义

背景:内毒素受体在内毒素、细胞因子等介导的炎性信号转导过程中具有重要作用。目的:了解肝硬化患者外周血单核细胞(PBMC)内毒素受体的表达变化与慢性炎症反应关系的临床意义。方法:应用荧光素标记的抗人Toll样受体(TLR)4/抗人CD14单抗,以流式细胞术检测40例肝硬化患者和15名健康志愿者PBMC内毒素受体TLR4和CD14蛋白的表达;以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内毒素受体TLR4 mRNA、CD14 mRNA和信号转导分子MyD88 mRNA的表达;以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-10和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;以偶氮基质显色法测定血浆内毒素水平。结果:肝硬化患者PBMC内毒素受体TLR4和CD14蛋白的表达水平显著高于对照组(P<0.05),但不同Child-Pugh分级组间差异无统计学意义;与对照组相比,PBMC内毒素受体TLR4 mRNA、CD14 mRNA和信号转导分子MyD88 mRNA的表达水平也有增高的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);肝硬化患者血清细胞因子IL-1β、IL-10和TNF-α水平,以及血浆内毒素水平均较对照组显著升高(P<0.05),且高内毒素水平患者内毒素受体的表达显著高于低内毒素水平患者(P<0.05),细胞因子水平也较低内毒素水平者增高。结论:肝硬化患者PBMC内毒素受体的表达明显上调,与患者的慢性炎症反应状态一致。

沙利度胺对人胰腺癌细胞细胞动力学和VEGF表达的影响

背景:研究显示沙利度胺及其类似物具有免疫调节、抗血管生成、抗炎等多方面的作用,其对多发性骨髓瘤和一些实体瘤的抗肿瘤作用与其免疫调节活性以及抗血管生成、抗增殖和促凋亡特性有关。目的:观察沙利度胺对人胰腺癌细胞细胞动力学和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其用于胰腺癌临床辅助治疗的可能性。方法:以沙利度胺干预人胰腺癌细胞株Patu-8988 48 h,MTT实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,RT-PCR检测VEGFmRNA表达。结果:经不同浓度沙利度胺干预的Patu-8988细胞,生长抑制率、G0/G1期细胞比例和细胞凋亡率均显著高于溶剂对照组(P<0.05),VEGF异构体VEGF121、VEGF165 mRNA表达显著低于溶剂对照组(P<0.05)。结论:沙利度胺能从多方面对胰腺癌生长产生抑制作用,包括直接抑制癌细胞增殖、诱导细胞周期G0/G1期阻滞和早期凋亡,以及通过抑制VEGF转录而抑制肿瘤血管发生。

口服酪酸菌对肝硬化患者免疫紊乱的影响

初步探讨了口服酪酸菌对肝硬化患者免疫状态的影响。16例肝硬化患者服酪酸菌活菌制剂1g每日3次．3个月后血清免疫球蛋白G和A较服药前有明显下降(P<0.05)，提示通过口服酪酸菌制剂，调整肝硬化患者肠道菌群，可能减少有害抗原进入体循环，从而改善患者免疫紊乱状态。

慢性胃炎胃黏膜细胞DNA含量和增殖活性的流式细胞仪检测

背景慢性萎缩性胃炎是一种胃癌癌前状态,研究表明正常胃黏膜、癌前病变和胃癌细胞的DNA含量随病变的进展而逐渐增高。目的应用流式细胞仪检测慢性胃炎胃黏膜细胞的DNA含量和增殖活性,探讨两者在慢性胃炎发生、发展过程中的临床意义。方法选取90例经胃镜检查诊断为慢性胃炎者的胃黏膜活检标本,制备单细胞悬液,应用流式细胞仪进行细胞DNA含量和增殖活性检测。结果所有慢性胃炎胃黏膜细胞的DNA倍体类型均为二倍体,但慢性萎缩性胃炎和慢性萎缩性胃炎伴肠化生胃黏膜细胞的增殖指数(PI)较慢性非萎缩性胃炎显著增高(P<0.05)。除慢性非萎缩性胃炎外,其余慢性胃炎组幽门螺杆菌(H.pylori)阳性患者胃黏膜细胞的PI值均较阴性患者显著增高(P<0.05)。结论慢性萎缩性胃炎和H.pylori阳性慢性胃炎胃黏膜细胞的增殖活性显著增高。应用流式细胞仪检测胃黏膜细胞的DNA含量和增殖活性,也许能成为胃癌癌前状态和癌前病变病理诊断的参考指标。

口服酪酸菌对肝硬化患者免疫紊乱的影响

目的:研究口服酪酸菌对肝硬化患者细胞和体液免疫紊乱的调节作用.方法:给肝硬化患者口服酪酸菌制剂,每次一克,每日三次,共三个月.治疗期间禁用任何抗菌药物及影响免疫的药物,检测治疗前后周围静脉血之CD3,CD4,CD8,NK及免疫球蛋白A,G,M.结果:治疗三个月后血浆免疫球蛋白G和A的水平明显降低(P<0.05).结论:口服酪酸菌可通过抑制肠道有害菌群过度生长,减少有害抗原进入人体循环,从而改善肝硬化患者体液免疫紊乱状态.

人结肠癌细胞系中癌相关基因的表达及表型遗传修饰的影响

目的 观察DNA甲基化和组蛋白乙酰化对人结肠癌细胞系癌相关基因的表达和细胞周期的影响。方法 培养 2种结肠癌细胞系SW 1 1 1 6和Colo 32 0 ,分别以去甲基化制剂 5 氮脱氧胞苷 (5 aza 2′ deoxycytidine ,5 aza dC)和 (或 )组蛋白脱乙酰化酶 (histonedeacetylase ,HDAC)抑制剂trichostatinA(TSA)及丁酸盐干预细胞。提取细胞总RNA ,以RT PCR和定量RT PCR法研究抑癌基因p1 6 INK4A、APC、p2 1 WAF1 、p5 3和 p73以及癌基因c myc和c Ki ras、凋亡抑制基因survivinmRNA表达水平 ;并运用流式细胞术检测细胞周期变化。结果 正常情况下 ,SW 1 1 1 6和Colo 32 0细胞系中均有较弱的 p1 6 INK4A和APC表达 ;两种结肠癌细胞系 p2 1 WAF1 表达缺如 ,而 p5 3、p73和c myc、c Ki ras以及survivin均表达。以 5 aza dC干预后 ,p1 6 INK4A和APC表达增强 ,且不同的结肠癌细胞系表达增强最明显时 5 aza dC干预的时间与浓度不同。相反 p2 1 WAF1 仍无明显表达。值得注意的是这两个细胞系经TSA或丁酸盐处理后 ,p2 1 WAF1 转录水平显著上调。p5 3、p73、c myc、c Ki ras和survivin基因在干预前后表达无明显变化。另外 ,5 aza dC并不能改变细胞周期 ,而TSA或丁酸盐使细胞阻滞于G1 期。结论 两种人结肠癌细胞系中 ,p1

非甾体消炎药诱导胃癌细胞凋亡的体外研究

目的明确非甾体消炎药(NSAIDs)诱导胃癌细胞凋亡情况和不同p53基因表型对NSAIDs诱导细胞凋亡的影响。方法通过MTT比色法检测NSAIDs对细胞生长活力的影响;应用丫啶橙染色、Annexin-V/PI双染色、共聚焦显微镜、TUNEL法检测细胞凋亡;应用流式细胞术进行凋亡细胞计数。结果NSAIDs药物吲哚美辛(Indo)和阿斯匹林(Asp)对胃癌细胞株AGS(p53+/+)、MKN28(p53-/-)均有显著的生长抑制作用,且呈时间依赖性增强。一定浓度的NSAIDs作用一定时间后,AGS、MKN28细胞均发生凋亡的形态学和生化学改变。在相同作用条件下,AGS细胞凋亡率明显高于MKN28细胞。处理组MKN28细胞凋亡数量虽有所增多,但不具有统计学意义 结论NSAIDs可诱导胃癌细胞凋亡,AGS细胞对NSAIDs更为敏感,Indo的凋亡诱导作用更为强烈。p53基因突变可能阻断了NSAIDs绣导的细胞凋亡。

胃癌细胞MKN28(p53-/-)对NSAIDs诱导凋亡敏感性的研究

目的 1.明确非甾体消炎药 (NSAIDs)能否诱导p5 3基因突变的胃癌细胞MKN2 8凋亡。 2 .明确NSAIDs对MKN2 8细胞凋亡相关基因bcl 2、bax表达的调控。方法 1.通过MTT比色法检测NSAIDs对细胞生长活力的影响。 2 .应用丫啶橙染色、Annexin V/PI双染色、共聚焦显微镜、流式细胞术检测细胞凋亡。 3.应用RT PCR(逆转录 聚合酶链反应 )方法检测bcl 2、bax基因水平的改变。结果 1.NSAIDs药物吲哚美辛 (Indo)和阿斯匹林 (Asp)对胃癌细胞株MKN2 8均有生长抑制作用 ,且呈时间 /浓度依赖性增强。 2 .在Indo 80 0 μmol/L、Asp8mmol/L作用 4 8～ 96h后 ,MKN2 8细胞凋亡数量稍有增多 ,但不具有统计学意义。 3.随着药物作用时间的延长 ,MKN2 8细胞的bcl 2基因mRNA表达逐渐减弱 ,bax基因表达逐渐增强。结论 1.NSAIDs可抑制MKN2 8胃癌细胞株增殖。 2 .NSAIDs不能诱导p5 3基因突变的MKN2 8胃癌细胞株发生显著的凋亡 ,提示p5 3基因突变可能阻断了NSAIDs诱导的细胞凋亡。 3.NSAIDs可使MKN2 8细胞凋亡相关基因bcl

雷公藤多甙水溶性及醇溶性成分对淋巴细胞的作用

应用单克隆抗体,流式细胞仪等方法,观察雷公藤多甙片水溶性及醇溶性成分对外周血淋巴细胞的作用。结果表明,雷公藤多甙片水溶性成分及醇溶性成分在体外,对人外周血 CD_4、CD_8的作用一致,使 CD_4、CD_8阳性细胞增多(P<0.05),且二者都能增强PHA 对CD_(25)表达的诱导作用(P<0.05);雷公藤多甙片醇溶性成分为200μg/ml 对静止期淋巴细胞有促分裂作用,而当其浓度达1mg/ml 时,能抑制 PHA 对静止期淋巴细胞的促分裂作用。结果提示:雷公藤多甙片中的水溶性成分在体外对淋巴细胞有免疫增强作用,而醇溶性成分在小剂量时有免疫促进作用,但大剂量时则为免疫抑制作用。

全反式维甲酸对胃癌细胞株SGC7901的抗增殖及诱导分化作用的研究

本研究结果表明,全反式维甲酸在体外能抑制SGC7901细胞的增殖,并抑制细胞内DNA合成,同时还抑制该细胞在双层软琼脂中的集落形成。裸鼠体内实验表明,全反式维甲酸可以延迟移植瘤的形成及影响其生长速度。

幽门螺杆菌和非甾体消炎药对胃上皮细胞动力学的影响

目的:观察幽门螺杆菌(H pylori)和非甾体消炎药(NSAID)对胃上皮细胞增生凋亡的影响. 方法:胃癌细胞株AGS与H pylori和/或消炎痛,阿司匹林体外共培养,通过MTT比色法,增生细胞核抗原(PCNA) 的Western Blotting检测技术,观察细胞增生情况,FITC- Annexin-V/PI双染色流式细胞仪检测,DNA凝胶电泳, 透射电镜方法等检测细胞凋亡. 结果:MTT比色法和蛋白质印迹检测细胞PCNA表达结果表明细胞毒素相关基因A(CagA)阳性的H pylori菌株NCTC11637能够促进细胞增生,此外,低密度(3.2 ×107-4×109CFU/L)NCTC11637能促进细胞的增生,而高浓度(>2 ×1010CFU/L)则抑制细胞的增生.消炎痛和阿司匹林能抑制细胞的活力.当AGS细胞与H pylori和NSAID共同孵育时,细胞的生长亦明显受到抑制.FITC-Annexin- V/PI双染色流式细胞仪检测表明消炎痛和阿司匹林可诱导细胞凋亡明显增强,而H pylori组则未见凋亡的增强,当二者共同作用于AGS细胞时,细胞凋亡率明显升高,但与非甾体消炎药单独作用组相比,则有所下降.透射电镜和DNA琼脂糖凝胶电泳进一步证实了FITC-Annexin-V/PI双染色流式细胞仪检测的结果. 结论:CagA阳性H Hpylori更加容易促进胃上皮细胞的增生.H pylori对细胞生长的影响与H pylori的密度有关. H pylori和NSAID间的作用是相互拮抗的.

系统性红斑狼疮患者妊娠期外周血中的T淋巴细胞亚群的变化

目的：探讨系统性红斑狼疮（SLE）孕妇外周血中的T淋巴细胞亚群的改变。方注：采用流式细胞仪对14例系统性红斑狼疮患者妊娠后（SLE＋NP组）的外周血T淋巴细胞亚群进行检测，并以18例系统性红斑狼疮非妊娠妇女（SLE组），2Z例正常非妊娠妇女（NNP组）作对照。结果：SLE＋NP组的CD3+、CD8+百分率与SLE，NNP组比较元显著性差异，而CD4+的百分率和CD4+／CD8+的比值都明显低于SLE和NNP组（P＜0．01）。结论：妊娠引起部分SLE病情复燃，可能与T细胞亚群的变化有关，CD4+／CD8+比值不失为临床监察SLE患者妊娠后疾病变化的一种有效手段。

细小病毒H－1对正常仓鼠肝细胞DNA周期动力学的影响

健康成年金黄仓鼠腹腔内接种ＰＶＨ－１（５×１０６ｐｆｕ），ＦＣＭ动态检测肝细胞ＤＮＡ周期动力学变化，结果显示：ＰＶＨ－１接种后处于Ｇ０＋Ｇ１期的肝细胞与对照组动物相比无显著差异。Ｓ期肝细胞在第３天显著高于对照组动物（Ｐ＜０．０５），且在第７天时仍呈上升趋势，第１４天到３０天趋于正常水平。Ｇ２＋Ｍ期肝细胞在ＰＶＨ－１接种后第３０天升高（Ｐ＜０．０５）。结果提示，动物在ＰＶＨ－１接种后第３到第７天是病毒在肝细胞中的复制高峰，并阻滞仓鼠处于Ｓ期肝细胞分裂进入Ｇ２＋Ｍ期，但是这种阻滞作用较短暂、并可逆，在ＰＶＨ－１接种后１４～３０天自然消失。

高糖环境HGF和TGF-β表达对肾成纤维细胞周期的影响

目的探讨HGF和TGF-β对高糖作用下的肾间质成纤维细胞周期的影响,以及作用机理。方法取肾肿瘤切除的正常极肾脏组织,贴壁法培养肾间质成纤维细胞。细胞分别培养于不同的葡萄糖培养液中,另设相同渗透压的甘露醇组。采用流式细胞仪检测细胞周期,MTT方法检测细胞增殖,RT-PCR方法对细胞表达HGF和TGF-β进行检测。结果 高浓度葡萄糖作用早期,细胞增殖旺盛,然而随着高糖的持续刺激,细胞增殖发生停滞,同时诱导细胞发生肥大反应。同时观察到高糖作用的早期HGF表达升高,随着作用的持续时间延长,其表达量下降,而TGF-β出现持续的高表达,同时外源加入HGF可以抑制TGF-β的表达。结论高糖作用下的肾间质成纤维细胞早期出现自限性增殖后细胞增殖停滞,出现肥大。这与HGF和TGF-β的表达差异相关。