分子生物学技术在瘤胃厌氧真菌分类多样性与定量分析研究中的应用

栖居在瘤胃中的厌氧真菌对饲料纤维的降解具有重要的促进作用。围绕瘤胃厌氧真菌的生物学分类以及生活史,对国内外研究进展进行了综述分析。核糖体DNA的序列分析、限制性片段长度多态性(RFLP)、核糖体间隔基因自动分析(ARISA)等分子生物学技术的快速发展与应用为厌氧真菌分类多样性研究开辟了新的途径。这些快速、易于操作的新技术,因其所具有高度灵敏性和特异性,而被广泛用于对瘤胃厌氧真菌的分类鉴定和系统进化分析中,与此同时,实时定量PCR技术目前已经被广泛接受并用来定量监测瘤胃微生态环境下的真菌生物量。

高产纤维降解酶牦牛瘤胃厌氧真菌分离株的筛选与鉴定

为获得高产纤维降解酶瘤胃厌氧真菌,从放牧饲养条件下随机选出10头屠宰后的青海大通牦牛瘤胃中采集食糜样本,通过亨盖特滚管技术筛选得到29株厌氧真菌菌株。以小麦秸秆为底物,测定这些菌株第6天培养液中乙酰酯酶、阿魏酸酯酶、木聚糖酶、羧甲基纤维素酶和微晶纤维素酶的活性。29株真菌之间5种酶活性差异显著,阿魏酸酯酶活性最高的菌株比活性最低的菌株活性高出7.9倍,差异最显著;而羧甲基纤维素仅高出2.5倍,差异最不显著。对各菌株5种酶活性进行相关分析,乙酰酯酶、阿魏酸酯酶、木聚糖酶和羧甲基纤维素酶相互之间均存在显著的正相关性(r>0.67,P<0.000 1),而且它们之间的相关性高于其与微晶纤维素间的相关性(P>0.05)。从中筛选得到1株高产纤维降解酶厌氧真菌YAK11,该菌株第6天培养液中5种酶活性分别达到165、10、1138、83和16 mU。通过18S rDNA基因序列分析该株菌,初步确定为Neocallimastix frontalis。