microRNA调控间充质干细胞成骨分化的研究进展

间充质干细胞是一类体内广泛存在的多能干细胞,具有多向分化潜能,为多种组织器官提供保护及损伤修复。近年来,间充质干细胞向成骨细胞诱导分化用于治疗骨代谢等相关性疾病已成为热点。microRNA(miRNA)作为生物体内重要的小分子非编码RNA,通过转录后调控影响基因表达,参与各种生命过程。研究显示,多种不同的miRNA在间充质干细胞向成骨分化过程中起着核心调节作用。本文结合相关文献,对miRNA调控间充质干细胞成骨分化的作用及机制归纳总结,以帮助全面了解靶向miRNA治疗骨代谢性相关疾病的潜能。

miR-29b调节TET蛋白对脂肪来源的间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨在干细胞定向分化以及胚胎早期发育中,miRNA-29b对DNA去甲基化酶TET蛋白功能的调控机制。方法采用生物信息学的方法结合双荧光素酶报告基因检测进行体外验证获得靶miRNAs;通过受精卵显微注射进行体内验证;对脂肪来源的间充质干细胞(adipose-derived stromal cells,ASCs)定向分化,确认靶miRNAs对Tets基因的影响。结果小鼠Tet1、Tet2、Tet3基因都是miR-29abc的靶基因,且miR-29b抑制效率最高(P<0.05);通过CRISPR/Cas9技术突变,miR-29b能增强Tets的表达(P<0.05),并能显著促进ASCs向成骨细胞分化的效率(P<0.05)。结论 miR-29b可以下调Tets表达,并且下调miR-29b能显著促进间充质干细胞向成骨细胞分化的效率。

间充质干细胞深低温保藏技术体系的建立与初步分析

采用不同的冻存剂冻存脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSC),冻存复苏后检测细胞活性、细胞周期、成骨分化变化和基因表达谱变化,明确冻存剂的冻存效果。本实验采用三种冻存剂,六组实验;1号,5%DMSO+10%FBS;2号,5%DMSO;3号,5%Trehalose+10%FBS;4号,5%Trehalose;5号,5%L-carnitine+10%FBS;6号,5%L-carnitine;分别冻存ADSC,复苏后通过CCK-8,检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期,以及成骨诱导分化,并对5%DMSO+10%FBS为冻存剂,冻存前后进行基因表达谱分析。细胞活性检测分析。1号与2号相比,冻存效果差异显著,3号与5号相比,冻存效果相似,总体来看,1号,2号冻存效果要比3号,5号要好。2号不如1号冻存剂效果好。使用4号和6号冻存剂,细胞冻存后基本不能存活。并且使用5%DMSO+10%FBS为冻存剂,分别对冻存前和冻存后的ADSC进行了表达谱分析,结果表明,在冻存过程中,DMSO的存在会对细胞的表达谱会产生一定的影响。