温度对麻痹性贝毒含量的小鼠生物测定法的影响

为探讨温度对小鼠生物法(mouse bioassay,MBA)测定麻痹性贝毒(paralytic shellfish poisoning,PSP)含量的影响。在29～30℃和32～33 ℃下,用 MBA 测定从塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense)中提取的 PSP 含量,探讨了温度对MBA 测定 PSP 含量的影响。结果显示0.1 mol/L 盐酸是最佳的 PSP 萃取剂。温度为29～30℃时,MBA 测得的 PSP 浓度(y)和实际 PSP 浓度(x)呈正相关,y=0.507x+0.151(R^2=0.937 7,P<0.01);温度为32～33℃时,两者也呈正相关,y=1.046 9x+0.054 5(R^2=0.980 7,P<0.01),MBA 测定的 PSP 浓度与实际 PSP 浓度的差值在29～30℃时随浓度下降而增大;在32～33℃时,差值较恒定,结果提示温度对 PSP 的 MBA 测定法的结果有一定影响。

高效液相色谱法测定4种石磺中牛磺酸的含量

利用高效液相色谱邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生法测定瘤背石磺(Onchidium struma)(上海崇明)、里氏拟石磺(Paraoncidium reevesii)和平疣桑椹石磺(Platevindex mortoni)(福建厦门)、紫色疣石磺(Peronia verruculata)(广东湛江)肌肉组织中牛磺酸的含量。结果表明,瘤背石磺、紫色疣石磺、里氏拟石磺、平疣桑椹石磺的肌肉组织中牛磺酸平均质量浓度分别为6 740.42、7 168.96、5 545.42、5 263.33 mg·kg-1。紫色疣石磺和瘤背石磺的牛磺酸含量均较高,两者无明显差异。

4种石磺科贝类的胆甾醇含量测定

将瘤背石磺(Onchidium struma)、里氏拟石磺(Paraoncidium reevesii)、平疣桑椹石磺(Platevindex mortoni)和紫色疣石磺(Peronia verruculata)样品,经活体解剖取四种石磺肌肉组织,运用高效液相色谱法对其可食部分进行了胆甾醇含量测定。结果表明:瘤背石磺胆甾醇平均浓度最高,达5 870.00 mg/kg;平疣桑椹石磺、紫色疣石磺、里氏拟石磺的胆甾醇平均质量分别为3 480.00、388.00、316.00 mg/kg,统计分析显示四种石磺可食部分的胆甾醇含量差异显著。

缢蛏早期耐高温家系建立及抗氧化能力测定

为筛选缢蛏(Sinonovacula constricta)耐高温新品系,该实验以缢蛏新品种申浙1号为基础群,先期建立了16个全同胞家系,并在第2、8、22、36日对各家系的生长进行了监测,在稚贝期分别挑选了3组壳长较长和3组壳长较短家系进行了半致死温度试验与抗氧化能力测定。结果表明:家系6、14在稚贝期的成活率显著高于其他家系(P<0.05),其中家系14的成活率最高;在半致死温度试验中,家系16的半致死温度最高达到36.64℃,且壳长较长家系与壳长较短家系半致死温度差异显著(P<0.05);各家系过氧化物酶(POD)、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽(GSH)随温度升高而升高,壳长较长家系的3种抗氧化能力在高温下均显著高于壳长较短家系(P<0.05)。通过家系选育和高温实验挑选具有抗逆性的耐高温后代,并通过抗氧化能力的测定在生理生化角度证明了家系挑选的必要性。在综合评估了各家系的壳长、存活率、耐热性和抗氧化能力等数据后最终确定家系14是适合生产的最优家系,家系15、16可用作备选家系。

底质和规格对缢蛏潜沙行为及摄食率的影响

为了探究缢蛏(Sinonovacula constricta)对底质的选择及潜沙后的摄食差异,以不同规格缢蛏(壳长分别为2.5、3.0、3.5 cm)为试验对象,研究了不同底质类型(全泥、1/3沙、2/3沙和全沙)和底质厚度(6、12、18、24、30 cm)对其潜沙行为、摄食率的影响。结果表明:在水温为25℃、盐度为20条件下,规格和底质类型对缢蛏潜沙率、潜沙时间存在极显著交互作用(P<0.01),24 h内仅在全泥底质下潜沙率达到100%,当底质含沙率大于30%时,缢蛏的潜沙行为明显受阻,不同规格个体间的半数竖壳时间(T E50)均有显著性差异(P<0.05);规格和底质厚度对缢蛏潜沙率、潜沙时间和摄食率均无显著交互作用(P>0.05),个体规格与潜沙深度、摄食率存在显著正相关关系(P<0.05),其中,壳长3.5 cm的缢蛏个体潜沙深度约为底质厚度的2/3,且在18 cm底质厚度下的摄食率为6 cm底质厚度下的2.12倍,在6 cm底质厚度下,壳长2.5 cm缢蛏摄食率最大。研究表明,适宜缢蛏潜沙的底质为泥质底,小规格缢蛏潜沙能力较强,且底质越厚越有利于其下潜后的摄食。

5-羟色胺对瘤背石磺低氧胁迫的调节作用

【目的】分析外源5-羟色胺(5-HT)对低氧胁迫瘤背石磺(Onchidium reevesii)氧化应激水平和存活率的影响,探究5-HT在瘤背石磺应对低氧胁迫的调控作用。【方法】分别利用免疫组化和实时荧光定量PCR检测瘤背石磺体内5-HT含量和5-羟色胺受体基因(5-HTR)的相对表达量;采用酶联免疫吸附(ELISA)和实时荧光定量PCR检测瘤背石磺血淋巴中5-HT含量及各组织5-HTR基因的相对表达量。比较低氧胁迫期间(0、3、6、9、12和24 h)瘤背石磺存活率;通过注射5-HT及磷酸盐缓冲溶液(PBS)分析瘤背石磺在低氧胁迫下应激相关酶活性及表达量差异。【结果】5-HT及其受体在瘤背石磺肝胰腺、胃、性腺、肠道、腹足和肌肉中均有分布。受到低氧胁迫的影响,5-HTR基因在各组织中相对表达量也发生改变,随着低氧胁迫时间的延长,5-HTR基因高相对表达量组织从腹足、肠道、胃变为性腺组织。低氧胁迫下瘤背石磺血淋巴中5-HT产生响应,其含量先下降—上升—下降的变化趋势。注射5-HT使瘤背石磺在低氧胁迫时有更好的存活表现,在低氧刺激9 h后,注射5-HT组的瘤背石磺存活率高于注射PBS处理和低氧处理。用5-HT刺激瘤背石磺低氧胁迫9 h后发现,注射外源5-HT可降低瘤背石磺氧化应激水平,提高其抗氧化酶活性和表达量及总抗氧化能力。【结论】瘤背石磺受低氧胁迫后,其体内5-HT及其受体会产生响应,参与生理调节;注射外源5-HT可提高瘤背石磺的低氧耐受能力和存活率。

低氧和复氧对瘤背石磺肠道健康的影响

【目的】分析低氧和复氧对瘤背石磺肠道组织结构、能量代谢和微生物菌群的影响,探究其低氧抗逆和复氧恢复机制,为潮间带生物的抗逆及恢复机制研究提供理论参考。【方法】分别设常氧组(对照组)、低氧组和复氧组,在低氧胁迫4、8、12和24 h后复氧6、12、18、30和42 h,观察瘤背石磺肠道组织结构变化,测定乳酸含量、乳酸脱氢酶(LDH)和酸性磷酸酶(ACP)活性,同时分析肠道微生物群落变化情况。【结果】随着低氧胁迫时间的延长,瘤背石磺肠道组织中杯状细胞数量明显增加,至24 h时杯状细胞几乎遍布整个上皮层,复氧后逐渐恢复至正常水平。肠道组织的乳酸含量随低氧胁迫时间的延长呈上升趋势,LDH活性呈先升高后降低的变化趋势,分别在胁迫24和12h时达最高值,且与对照组间存在显著差异(P<0.05,下同),而ACP活性呈先升高后降低再升高的变化趋势,在8 h时降至最低值,且显著低于对照组;复氧后乳酸含量、LDH活性和ACP活性均有所恢复。肠道微生物菌群结构和菌落相对丰度因低氧条件而改变,门水平上优势菌群由对照组的厚壁菌门(Firmicutes)变化到变形杆菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)和弯曲杆菌门(Campylobacterota);属分类水平上优势菌落从气单胞菌属(Aeromonas)变化到弧菌属(Vibrio),复氧后厚壁菌门(Firmicutes)又恢复优势地位;虽然复氧后菌落的相对丰度呈回升状态,但总体丰度仍低于对照组。LEfSe分析结果显示,对照组与低氧8 h组有20个显著差异群落,且主要集中在内生单胞菌属(Endozoicomonas)和弧菌属等;对照组与复氧组有39个显著差异群落,主要集中在黄杆菌科(Flavobacteriaceae)和幽门螺杆菌科(Helicobacteraceae)等。【结论】低氧影响瘤背石磺肠道组织结构,导致肠道菌群发生改变,进而影响肠道的抗氧化功能和非特异性免疫功能。

水温对石磺胚胎发育的影响

通过实验室研究,对石磺(Onchidium sp.)胚胎发育过程进行了详细观察,比较了不同水温下石磺胚胎发育的速度,探讨了膜内面盘幼虫孵化出膜的主要条件.结果表明:石磺的胚胎发育过程类似于肺螺亚纲其他贝类,行体内受精,刚产出的卵为受精卵,细胞未进行分裂,卵裂从卵产出体外开始,分别经过卵裂期,囊胚期,原肠期,膜内担轮幼虫期,膜内面盘幼虫期,经过孵化期孵化出膜为自由生活的面盘幼虫期.对各阶段幼体的大小、形状、内部器官等特征以及发育变态过程进行了详细的显微观察和描述.26 ℃,28 ℃,30 ℃ 3个水温组中,从受精卵到膜内面盘幼虫孵化出膜分别需要300 h,290 h,288 h;发现影响幼虫孵化出膜的主要因素是水温和海水的刺激作用;繁殖盛期卵群工厂化水泥池自然水温孵化时间为10～14 d.并报道了水温低于23 ℃时石磺胚胎停止发育现象.

石磺繁殖生物学的实验研究

用实验室小型试验、贝类育苗场生产性试验和自然群体实地观察的方法，结合养殖池塘内石磺（Onchidium sp．）繁殖习性跟踪观察，2年内研究了沪浙地区石磺的繁殖季节，繁殖方式，繁殖力，受精卵的发育孵化，水温和盐度对胚胎发育的影响，胚胎停止发育现象，幼虫发育及变态前形态变化，对石磺繁殖生物学作了比较系统的实验研究。结果显示石磺雌雄同体，雄性先熟，异体交配，体长5cm体重10g以上的个体为繁殖的主要群体，其生物学最小型为体长3．1cm和体重3．5g；交配期多在气温22℃以上的5月中下旬至9月下旬，6-8月为繁殖盛期。产卵前经过5-10h的求爱和1-5h的交配过程，交配后15d左右产出受精卵，多在大潮日至小潮日期间3～5d内的晚间产卵；繁殖期具有6个明显的产卵高峰。卵群表面积15-30cm^2，每平方厘米卵群含卵子2650±300个，每个卵群含卵子4．4-8．0万粒。水里与潮湿环境中卵群孵化率没有明显差异；26-35℃的水温下，卵群孵化时间10-14d，水温23℃以下石磺胚胎出现停止发育的现象。适合卵群孵化的海水盐度为6～20，孵化出膜2-3d后的面盘幼虫开始摄食单胞藻。自由生活面盘幼虫经23d培育后出现明显的革质膜；变态后的幼体可能存在不断蜕去革质膜的过程，面盘幼虫的变态过程和变态条件仍有待研究。

人为噪音胁迫对瘤背石磺氧化应激和免疫应答的影响

为探究人为噪音对瘤背石磺(Onchidium reevesii)氧化应激和免疫应答的影响,将瘤背石磺分别暴露在1000 Hz的人为噪音中1、3、6、12和24 h后,分别测定瘤背石磺血清中超氧化歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)等氧化应激指标和谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性和碱性磷酸酶(AKP)等免疫指标,同时测定了肝胰腺中热休克蛋白27(Hsp27)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)、髓样分化因子(MyD88)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等基因的mRNA表达量变化。结果显示,相对于未暴露组,SOD和CAT活性在噪音暴露1 h后显著升高(P<0.05),AST和ALT活性在噪音暴露3 h后显著升高(P<0.05),AKP活性在噪音暴露1 h后显著升高(P<0.05);Hsp27和GSH-Px基因的mRNA表达量在噪音暴露1 h后显著上调(P<0.05),GST基因的mRNA表达量在噪音暴露1 h后显著下调(P<0.05),MyD88和TNF-α基因的mRNA表达量在噪音暴露1 h后显著上调。研究表明,人为噪音作为一种胁迫因子,使瘤背石磺机体产生了氧化应激和免疫应答,研究结果可为表征潮间带动物应对人为噪声胁迫提供参考依据。

盐度对石磺胚胎发育的影响

28℃水温下，实验室内比较观察了盐度为0、3、6、9、15、20、30、40八组水体中石磺（Onchidium sp．）受精卵的胚胎发育状况，并对囊胚期的胚胎进行了低盐度（0、3、6、9）培育试验。结果表明：石磺受精卵在不同盐度水体中的胚胎发育状况有很大的差异，盐度0组中的胚胎畸形率高达97％±2％，盐度3组中的胚胎畸形率达75％±2％，盐度30组中停止发育的胚胎（即单卵黄球胚胎）比例为60％±4％，盐度40组中停止发育胚胎的比例达98％±2％，盐度6、9、15、20组的胚胎能正常发育，孵化率均在90％以上；石磺卵群孵化的适宜盐度范围为6～20。囊胚期的胚胎适应低盐度的能力稍强，盐度0组中的囊胚期胚胎分裂球解体，不能正常发育；盐度3、6、9组中的囊胚期胚胎能正常发育。盐度为23．4和27．4的自然海水环境中，石磺胚胎也能正常发育和孵化。

几种饲料对石磺的暂养效果及其消化率的初步研究

用6种饲料喂养石磺,比较其生长、存活状况,从而找到人工饲养石磺的适宜饲料;利用Cr2O3湿式灰化定量法,测定了石磺对3种植物性饲料的消化率。试验结果表明,动物性饲料易败坏水质,饲养效果不佳;石磺喜食植物性饲料;饲料效果以玉米粉最好,依次为玉米粉>菜粕>豆粕>次粉>酵母>鱼粉。测定石磺对玉米粉、菜粕和次粉3种植物性饲料的平均消化率分别为21.680%,14.262%,4.871%。玉米粉喂养石磺的效果较好,实验室内能完成石磺的交配、产卵和二次交配、二次产卵等全过程;日饲料投喂比例为体重的1%～5%。

毛蚶对单胞藻的滤除率、选择性和消化状况

测定了不同水温下毛蚶对5种单胞藻的滤除率、选择性和表观消化状况，结果表明，在16℃～24℃的水温范围内，毛蚶对海洋小球藻的滤除率逐步升高，24℃时的最大滤除率为1．8494（mL／ind·min），24℃～26℃时的滤除率逐步下降。22℃为毛蚶对微绿球藻、球等鞭金藻3011和三角褐指藻的最佳滤食温度，最大滤除率分别为1．1424、3．8045和4．4304。水温8℃～24℃之间，毛蚶对巴夫藻的滤除率变化不明显，平均滤除率为2．7972。毛蚶不仅对不同大小、形状的藻类具有选择性，而且对大小、形状相似的藻类也具有明显的选择性。水温22℃下，毛蚶对5种单胞藻的表观消化状况不同。贝类对其滤除率大、消化状况差的藻类在促进贝类净化进程中有良好的应用参考价值。

麻痹性贝毒在文蛤体内的累积及净化技术研究

试验研究分毒素累积和解毒两个阶段,文蛤(Meretrix meretrix)对麻痹性贝毒(Paralytic Shellfish Poisoning,PSP)的累积能力试验中每天投喂一定量塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense),定期测定文蛤体内的毒素含量;解毒试验通过投喂饵料和水体消毒的"内排外解"法进行。结果表明:文蛤对麻痹性贝毒的累积能力较弱,累积试验末期(15 d)的内脏毒素累积量仅为884μg/100g,内脏中毒素累积量高于肌肉,占全贝的77.4%～89.1%。15 d的解毒试验中,三组文蛤体内的毒素含量都有下降,对照组毒素排出量占总累积量的30.1%,臭氧处理组占32.8%,"内排外解"法处理组毒素排出比例最高,达总累积毒素的47.2%。试验表明,"内排外解"法能加快文蛤体内PSP的排出。

三种藻类对中华绒螯蟹Ⅰ期溞状幼体培育效果的比较

对中华绒螯蟹Z1幼体，分别投喂微绿球藻、三角稿指藻、钝顶螺旋藻粉，培育3天后，测定各试验组幼体变态成活率、发育期及水质状况。结果表明，虽然微绿球藻组幼体发育期较其他组延长23．5h±5．5h，但培育效果优于其他两组，其适宜的使用浓度为50～200×104／mL。在自然海水及消毒海水中，适宜浓度的藻类对中华绒螫蟹Z1幼体的变态成活率无明显影响。净化稳定水质的能力以微绿球藻组为好，能抑制有害藻类过度繁生，提高Z1幼体的变态成活率，微绿球藻不失为中华绒螫蟹Z1幼体的一种良好饵料，值得推广使用。

不同布苗法对河蟹早期溞状幼体变态率的影响

阐述了河蟹育苗过程中,清水布苗法和肥水布苗法的概念、特点和注意事项,分析了影响清水布苗法早期状幼体变态率的因素和对策;比较了微绿球藻和海链藻影响Z1变态率的原因,并分析了Z2死亡的原因和预防对策。通过对河蟹育苗过程中的Z1、Z2幼体的死亡原因分析,认为维持海链藻浓度在每毫升10万个左右可大大提高Z1、Z2幼体的变态成活率,节约育苗成本。同时,对同一水域不同时期育苗效果,有害藻类快速繁生现象作了分析。从幼体变态率、生产成本、稳定性等方面对两种布苗法作了全面比较,为河蟹育苗生产的科学安排提供了有益参考。

甲醛对中华绒鳌蟹各期溞状幼体及隐藻的急性毒性

通过静水试验法，用甲醛对中华绒螯蟹各期状幼体及隐藻进行急性毒性试验，结果分别为：Z1：24hLC50为41．214mg／L，48hLC50为33．364mg／L，SC为3．34mg／L。Z2：24hLC50为125．497mg／L，48hLC50为54．258mg／L，SC为5．43mg／L。Z3：24hLC50为143．617mg／L，48hLC50为93．817mg／L，SC为9．38mg／L。Z4：24hLC50为200．679mg／L，48hLC50为98．414mg／L，SC为9．84mg／L。甲醛对Z5的毒性状况比较特殊，虽经10次试验仍无规律性。试验表明，30mg／L以下的甲醛，24小时内波海红胞藻全部成活，甲醛对波海红胞藻的6hLC50为：90mg／L，12hLC50为：60．77mg／L，24hLC50为：57．5mg／L。一定浓度的甲醛可杀死苗池水中的赤潮生物，蓄水池中的赤潮生物可用含氯化合物杀灭，以降低赤潮生物对中华绒螯蟹幼体的毒性，提高幼体的变态成活率和育苗产量。