锌指蛋白265在大鼠睾丸Sertoli细胞中的特异性表达

目的:研究锌指蛋白265(ZNF265)在大鼠睾丸Ser-toli细胞中的特异性表达。方法:分离培养SD大鼠睾丸Ser-toli细胞,以免疫荧光染色、流式细胞术(FCM)检测ZNF265在Sertoli细胞的表达,且抽提Sertoli细胞总RNA,用PT-PCR法检测ZNF265的表达。结果:经免疫荧光染色,实验组Ser-toli细胞核核周呈现明亮特异荧光,对照组未见特异性荧光;FCM检测结果显示实验组Sertoli细胞ZNF265的表达较对照组明显增高;RT-PCR扩增出目的条带ZNF265。结论:大鼠睾丸Sertoli细胞特异性表达ZNF265,且多表达于Sertoli细胞核核周胞质。

血管活性肠肽对leydig细胞分泌的IL-1、IL-6和TGF-β的影响

目的研究血管活性肠肽(VIP)对感染时的leydig细胞分泌的细胞因子IL-1I、L-6和TGF-β的影响。方法SD大鼠的睾丸经Ⅱ型胶原酶消化、过滤及Percoll分离获得高纯度、高活率的leydig细胞,经不同剂量的VIP作用后,再感染溶脲脲原体(UU),观察在UU感染时,不同剂量VIP对leydig细胞分泌的IL-1(MTT法)I、L-6、TGF-β(ELISA法)的影响。结果UU感染时,VIP对leydig细胞分泌的细胞因子有明显的影响:能促进leydig细胞分泌IL-1(活性)、抑制IL-6(含量)分泌;同时既能促进(高剂量VIP)又能抑制(低剂量VIP)TGF-β分泌。结论在UU感染时,VIP能改变大鼠leydig细胞细胞因子的分泌格局,表明VIP在抗感染免疫中具有一定的免疫调节作用。

血管活性肠肽对大鼠Leydig细胞的免疫调节作用

目的:研究血管活性肠肽(VIP)对大鼠睾丸间质细胞(Leydig细胞)免疫功能的调节。方法:以VIP作用于溶脲脲原体(UU)感染的SD大鼠及大鼠Leydig细胞为研究对象,观察VIP对大鼠Leydig细胞分泌的细胞因子(IL-1、IL-6及TGF-β)和FasL表达的调节,从体外及动物整体水平来探讨VIP对大鼠Leydig细胞免疫功能的调节。结果:在睾丸局部感染时,VIP能调节Leydig细胞IL-1、IL-6、TGF-β及FasL的分泌和表达格局;同时VIP对大鼠睾丸局部免疫豁免的调节和维持也起到一定的作用。结论:VIP能调节大鼠Leydig细胞的免疫功能,并参与调节大鼠睾丸局部的免疫豁免。

鳖血提取物对小鼠免疫功能正向调节作用的研究

目的 :研究鳖血提取物对小鼠的免疫调节功能。方法 :采用环磷酰胺为免疫抑制剂 ,获得免疫功能低下的小鼠动物模型。比较鳖血提取物作用前后 ,小鼠T细胞亚群的数量、NK细胞的杀伤功能 ,淋巴细胞的增殖功能以及细胞因子水平的变化。结果 :鳖血提取物对免疫功能低下小鼠的CD4 + T细胞在外周血中的比例、NK细胞的杀伤活性、淋巴细胞的增殖功能 ,均具有正向调节作用 (P <0 .0 5 ) ,并呈剂量依赖性 ;能提高淋巴细胞分泌IFN γ的能力。结论

酵母菌表达倍菲隆发酵工艺研究

目的 :为了探索用酵母菌表达乙型干扰素 (倍菲隆 )的大批生产的发酵工艺流程及优化的重要参数。选用 1 5L不锈钢发酵罐作为乙型干扰素发酵工艺研究系统。方法 :探索了种细胞密度对初始发酵期 (甘油利用期 )的影响 ,启动甘油补充期的溶解氧浓度 ,诱导目的蛋白表达时添加甲醇的速率条件控制 ,pH对酵母菌生长与蛋白表达的影响以及发酵时间对乙型干扰素表达量影响等重要发酵工艺参数。结果 :接种高密度的种菌 (OD60 0为 9)时酵母菌增殖快 ,湿细胞重量于1 8h即达到 1 5 7g L。当DO恢复至 67%时即开始补充甘油可使酵母菌在 5h内增殖达到 2 1 9g L。添加甲醇速率从 2 %(甲醇终浓度为 0 0 3%)开始 ,逐步增加 ,在 2 4h内达到 33%的添加速率 (甲醇终浓度为 0 5 %)。甲醇诱导前pH为 6时最有利于酵母菌生长 ,在蛋白表达时期 ,控制发酵罐内pH值在 3 0 ,可得最高蛋白表达量。发酵 70h乙型干扰素表达量达到高峰。结论 :接种高密度种菌可促进工程菌生长 ,当DO恢复至 67%时开始补充甘油可加快酵母菌生长 ,在诱导期中缓慢添加甲醇并维持发酵罐pH为 3 0 ,发酵 70h可获得最佳蛋白生产量。

大鼠重症急性胰腺炎时免疫机制及TAI的影响

目的:研究重症急性胰腺炎(SAP)时细胞免疫功能的变化并通过给予外源性胸腺素α1(TA1),观察能否减轻SAP的严重程度并初步探讨其作用机制. 方法:♂SD大鼠54只随机分为对照组、SAP组和TA1治疗组.SAP模型采用50g/L牛黄胆酸钠1mL/kg胰胆管逆行穿刺注射建立,治疗组造模成功后立即皮下注射TA1 (100μg/kg),对照组仅给予开腹手术.三组大鼠分别在造模后3,6,12h处死,收集外周血与胰腺标本.观察TA1 对血清淀粉酶、TNF-α及胰腺组织炎症评分的影响;同时应用流式细胞术观察外周血CD3,CD4+,CD8+T细胞的变化. 结果:SAP组与治疗组各时间点血清淀粉酶、TNF-α水平及胰腺组织炎症评分均显著高于对照组(P<0.01):12 h治疗组与SAP组相比,TNF-α水平明显下降,胰腺组织炎症评分显著改善(P<0.01).SAP组3,6h外周血CD3, CD4+T细胞百分率较对照组明显升高(P<0.01);但在12h 则明显低于对照组(P<0.01);治疗组3 h外周血CD3, CD4+T细胞百分率较对照组明显升高(P<0.01),但6,12 h 与对照组没有明显的差异. 结论:SAP时存在细胞免疫功能的低下,外源性TA1可能通过调节CD3,CD4T细胞分化从而减轻胰腺炎症.

CD44基因拼接体、p53基因突变和染色体倍性与大肠癌转移之间关系的机理研究

目的:探讨大肠癌ＣＤ４４ｖ６表达、ｐ(53)基因突变和染色体倍性与大肠癌转移之间的关系和作用机理。方法：流式细胞仪测定大肠癌细胞倍性及其在细胞周期各相中的分布；ＲＴ－ＰＣＲ方法及特异探针Ｄ３对大肠癌细胞进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ，并对杂交条带进行辉度扫描；银染ＰＣＲ单链构象多态性（ＳＳＣＰ）技术检测大肠癌细胞ｐ(53)基因突变。结果：正常对照、良性腺瘤、肿瘤未转移和肿瘤转移组其ＣＤ４４ｖ６阳性率和ｐ(53)基因突变率呈逐渐上升趋势，ＣＤ４４ｖ６辉度扫描表明肿瘤未转移组（２３１７．２６±１９８．７３）和转移组（１００２４．１６±８５５．４０）相比较，表达量有显著差异（Ｐ＜０．０２）；ＣＤ４４ｖ６阳性和阴性两组中Ｇ２Ｍ期细胞均值分别占６．２４％和５．４８％（Ｐ＞０．０５），异倍体细胞分别为６２．１６％和６０．００％（Ｐ＞０．５）；而ｐ(53)基因突变和未突变两组中Ｇ２Ｍ细胞占１０．３３％和４．０１％（Ｐ＜０．０５），异倍体细胞分别为８５．２０％和３０，００％（Ｐ＜０．００５）；肿瘤异倍体细胞转移率显著高于二倍体细胞。结论：ＣＤ４４ｖ６的表达与转移高度相关，ＣＤ４４ｖ６和ｐ(53)基因突变与肿瘤转移关系可能涉及不同的作用机理。Ｃ?

一种新的肿瘤相关蛋白-OVA12和抗体制备及其初步应用

目的 制备原核表达的OVA12纯化蛋白 ,研究正常人与肿瘤患者血清中抗OVA12抗体水平的差异。方法 克隆OVA12的cDNA至pGEMT载体中 ,经测序确证后 ,将该基因插入原核表达载体pET32a( +)中 ,并转化至E .coli表达菌BL2 1(DE3)中 ,诱导 6×His融合蛋白表达 ,经Ni2 + 亲和层析及胶回收技术纯化蛋白 ,并将蛋白免疫动物制备兔抗OVA12蛋白抗体 ;采用ELISA、Dotblot、Westernblot法比较正常人及肿瘤患者血清中抗体水平的差异。结果 获得纯化OVA12蛋白及高滴度的兔抗血清 ;ELISA法测定显示 ,正常人组OD均值为 0 17± 0 0 7,肿瘤患者组OD均值为0 32± 0 15 ,两组之间有显著性差异 (P <0 0 0 0 1) ,并选择其中样本经Westernblot、Dotblot加以进一步证实。结论 成功克隆OVA12基因 ,并获得纯OVA12蛋白和高滴度的兔抗血清 ;ELISA等方法测定肿瘤患者与正常人血清中OVA12抗体水平有明显差异 ,为临床检测的应用奠定基础。

cDNA微阵列技术比较胚胎大鼠脑和脊髓神经干细胞的基因差异表达

目的 从分子水平探讨脑和脊髓来源的神经干细胞(NSCs)的生物学特性,并鉴定这两种来源的NSCs 的分子表达差异。 方法 应用cDNA微阵列技术对脑和脊髓来源的NSCs的基因表达情况进行检测和比较,在成 功分离、培养和鉴定脑和脊髓两种来源的NSCs的基础上,抽提细胞总RNA并纯化、定量,以32P逆转录标记合成 cDNA探针。AltasTMcDNAExpressionArray(ClontechCo)与探针杂交、洗膜后在磷屏上曝光并扫描成像,以Arrayvision 5.1软件分析杂交结果。 结果 cDNA阵列膜上覆盖的1176个基因中,绝大部分基因表达无明显差异,但也有14 个基因在两种来源的NSCs中的表达有显著差异,其中8个在脑来源的NSCs中表达较高,6个在脊髓来源的NSCs 中表达较显著。在两种来源的NSCs都明显表达的基因中,许多分子如P 选择素(P selectin)、钙黏素(cadherin)、乙酰 胆碱受体α、cyclins、某些转录因子和原癌基因等可能在NSCs的自我更新(增殖)、神经球形成和保持不分化状态中 起重要作用。 结论 两种来源的NSCs的生物学特性基本相同,但也存在一定的差异。

p53基因突变及染色体倍性与大肠癌转移之间关系初探

目的研究大肠癌转移与ｐ５３基因突变及染色体倍性之间的关系。方法采用特异合成引物对ｐ５３基因的有关外显子进行ＰＣＲ扩增，结合单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和银染技术，检测１５例大肠癌手术标本ｐ５３基因的突变；使用流式细胞仪（ＦＡＣＳ）分析其染色体的倍性。结果８例有转移灶大肠癌病人中７例表现有ｐ５３基因的突变，而７例未转移大肠癌病人只显示３例有ｐ５３基因的突变。异倍体的９例病人中７例有ｐ５３基因突变，二倍体的６例病人中有３例有ｐ５３基因突变。

猪FasL基因在猪软骨细胞上的表达和鉴定

目的: 实现猪Fas配体(FasL)基因在猪软骨细胞中表达和鉴定。方法: 用RT- PCR扩增猪FasL基因片段, 构建重组pGCEN-FasL逆转录病毒载体, 并转染PA317细胞。经G418筛选获得高滴度的病毒液, 感染猪软骨细胞, 应用FACS和Westernblot检测软骨细胞上FasL的表达。结果: 经酶切分析、测序证明, 成功地构建pGCEN- FasL逆转录病毒载体。转染的软骨细胞表面FasL的表达率为 57%。Westernblot显示, 在Mr为 37 000处有 1条特异性蛋白带, 具有诱导Fas+细胞凋亡的作用。结论: 成功地构建重组猪FasL基因的逆转录病毒载体, 并在转染的软骨细胞上高表达具有生物学活性的FasL, 为建立同种异体软骨细胞移植的免疫耐受提供了实验依据。

FasL^+组织工程化猪软骨细胞的同种异体移植

目的:探讨表达FasL的猪组织工程化软骨细胞在同种异体内的生长状况和免疫排斥反应。方法:实验于2002-09/2004-03在上海交通大学医学院,上海市免疫学研究所进行。①分离制备猪软骨细胞。②制备FasL+软骨细胞,构建重组pGCEN-FasL反转录病毒载体,转染PA317细胞。经G418筛选获得分泌pGCEN-FasL病毒颗粒的PA317细胞克隆,选择高滴度的病毒液,感染猪软骨细胞。再经过G418筛选获得FasL+的软骨细胞克隆,扩增培养。③FACS检测FasL的表达,应用JAM试验测定FasL+的软骨细胞诱导Fas+的Jurkat细胞及活化的T细胞的凋亡率。同时制备转染pGCEN反转录病毒空载体的软骨细胞为对照。④取FasL+的软骨细胞与可注射性生物材料PluronicF127混合,注射于同种异体猪的腹壁皮下。在第4,5周取材,通过组织病理和免疫组织化学等方法,检测软骨细胞生长和免疫排斥反应。结果:①经转染的软骨细胞表面FasL的表达率为57%。②FasL+的软骨细胞具有明显诱导Fas+细胞和活化的同种异体T细胞的凋亡,最大的凋亡率分别为53.41%,30.38%(效/靶=10∶1),对照组分别为32.27%,13.16%(效/靶=10∶1)。③组织工程化猪软骨结节的结构与正常软骨组织基本一致,可见清晰的软骨凹陷和软骨膜,仅细胞排列较正常软骨略显混乱、不均匀现象。④免疫组织化学染色显示FasL+的组织工程化猪软骨结节的Ⅱ型胶原蛋白分布均匀,形状清楚,与正常软骨比较基本一致。⑤第5周的软骨细胞表面的FasL分子表达明显,周围的炎性细胞浸润相对较少。而对照组的软骨细胞周围可见到大量浸润的炎性细胞。结论:成功构建FasL+软骨细胞并有效表达,抑制免疫排斥反应,为建立同种异体软骨细胞移植的免疫耐受提供了实验依据。

三个中国汉族人纯合细胞DQA1基因启动子多态性的分子生物学研究

近年来国外发现参与Ⅱ类基因转录调控的启动子区也存在多态性，运用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和末端终止法，对三个中国汉族人ＨＬＡ纯合细胞的ＤＱＡ１基因启动子区（ＱＡＰ）３１８ｂｐ的核苷酸（包括顺式作用元件Ｘ、Ｙ、Ｘ２和Ｗｂｏｘ）进行了扩增和测序，发现等位基因ＤＱＡ１＊０３０１１（纯合细胞ＳＭＹ２３Ａ）的ＱＡＰ结合和白种人的同一等位基因ＤＱＡ１＊０３０１１的ＱＡＰ不同，而与ＤＱＡ１＊０３０１２的ＱＡＰ结构相同。

体外同种异体细胞刺激诱导出免疫抑制

目的：观察习惯性流产患者接受主动免疫治疗后免疫反应性的变化。方法：采用改良的体外混合淋巴细胞培养（ＭＬＣ） 模拟临床主动免疫治疗，刺激后的患者淋巴细胞的反应能力用ＣｏｎＡ 检测。结果：经患者丈夫单核细胞刺激后的患者淋巴细胞对ＣｏｎＡ 的反应能力显著下降，与未经刺激的细胞相比，Ｐ＜ ０００１ 。同时，患者夫妇的ＭＬＣ上清对无关个体间的ＭＬＣ 具有抑制作用，抑制率为３６７ ％ 。结论：表明同种异体细胞的刺激能诱导出免疫抑制，这一结果与临床习惯性流产患者主动免疫治疗的结果相一致。

血管活性肠肽(VIP)对大鼠Leydig细胞FasL表达及介导Jurkat细胞凋亡的影响

目的研究VIP对大鼠Leydig细胞FasL表达及介导Jurkat细胞凋亡的影响。方法VIP作用于UU感染的SD大鼠及大鼠Leydig细胞,观察VIP对大鼠Leydig细胞FasL表达的调节,从体外及动物整体水平来探讨VIP对大鼠Leydig细胞FasL表达及介导Jurkat细胞凋亡的影响。结果在睾丸局部感染时,VIP能调节Leydig细胞FasL表达格局并能调节Leydig细胞介导Jurkat细胞的凋亡率。结论VIP参与调节大鼠睾丸局部的免疫豁免。

肿瘤相关抗原线粒体蛋白12基因的RNA干扰对HeLa细胞的抑制作用

目的:探讨肿瘤相关抗原线粒体蛋白质12基因(tumor-associated antigen mitochondrial protein 12 gene,TAMP12)表达变化对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用。方法:利用计算机辅助设计并化学合成3对针对TAMP12的siRNA片段,通过脂质体法将siRNA转染于TAMP12高表达的HeLa细胞中,筛选有效的siRNA片段。以RT-PCR、实时定量PCR及流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞TAMP12 mRNA及蛋白表达的变化。以激光扫描共聚焦显微镜(confocal lyser scarning microscope,CLSM)观察双色荧光标记蛋白的亚细胞定位和定量表达。以3H-TdR掺入实验和FCM检测阻断TAMP12基因表达对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。结果:CLSM检测显示TAMP12蛋白主要表达在HeLa细胞线粒体中。转染siRNA-TAMP12的肿瘤细胞中TAMP12 mRNA及蛋白的表达显著降低,与对照组对比,抑制率分别为81%和87%(P<0.01);转染细胞的DNA合成受抑制,抑制率达42%(P<0.01);转染siRNA-TAMP12肿瘤细胞的凋亡率由对照细胞的8.14%上升到15.59%(P<0.01)。结论:RNA干扰可阻断TAMP12基因的表达,从而对人宫颈癌Hela细胞产生抑制作用。

移植物抗宿主病小鼠肝脏及异体CD8^+T细胞趋化因子和趋化因子受体表达分析

为探讨趋化因子及其受体介导的效应性细胞迁移在移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)发生发展中的重要作用,采用次要组织相容性抗原异配的GVHD小鼠模型,应用流式细胞分选术(FACS)、实时荧光定量聚合酶链反应等方法,分析GVHD靶器官和异体CD8+T细胞趋化因子及受体的表达。肝脏高表达干扰素诱导蛋白-10(IP-10)、干扰素诱导的T细胞趋化因子(ITAC)、γ干扰素诱生单核因子(MIG)、巨噬细胞炎症蛋白(MIP)-1α/β等趋化因子。异体CD8+T细胞上则高表达CXC趋化因子受体(CXCR)3和CC趋化因子受体(CCR)5。随着肝脏趋化因子的表达增加,异体CD8+T细胞迁移浸润的数量也增高。因而趋化因子及异体CD8+T细胞上趋化因子受体的特异对应关系,促使大量异体CD8+T细胞迁移浸润并造成肝脏损伤。

睾丸局部感染时Leydig细胞IL-1、IL-6、TGF-β和Fas、FasL转录水平的变化

目的:研究Leydig细胞在抗感染中的免疫调节作用。方法:以溶脲脲原体(UU)直接注入大鼠膀胱拟上行性感染的途径,制备大鼠睾丸感染的动物模型,分别在UU感染的1周、2周、3周处死大鼠,分离取得睾丸组织,观察组织的病理变化,并分离获得高纯度的Leydig细胞,抽提总RNA,用RTPCR方法比较UU感染组与正常对照组之间IL1、IL6、TGFβ和Fas、FasLmRNA表达的差异。结果:与正常对照组相比,UU感染的大鼠睾丸组织发生明显的病理改变,IL1、IL6、TGFβ均升高,Fas表达下降、FasL表达升高。结论:大鼠Leydig细胞在抗感染免疫中,可通过改变IL1、IL6、TGFβ和Fas、FasL转录表达格局来发挥抗UU的免疫调节作用。

新一代航空电子系统的结构模块化与通用模块

本文阐述了新一代航空电子系统结构模块化要实现的目标和模块应具有的特性，并就通用模块的应用范围、功能能力、尺寸及类型等问题，分别作了讨论．

美军战术飞机的下一代通信、导航、识别系统(下)

3.2.2.2 TRW的系统结构方案 TRW公司采用的是一个低风险的方案,其基本特点是:在多个通道上采用一般的超外差方法进行接收。侧重于采用现有的技术成熟的模块。系统的具体结构及实现硬件同样也有个演变发展的过程。