miR-15a/16-1基因敲除小鼠的鉴定及其脾脏免疫细胞频率分析

目的 :探讨mi R-15a/16-1基因敲除小鼠的繁育与子代鼠的鉴定,及其脾脏免疫细胞频率。方法 :从子鼠鼠尾中提取基因组DNA,采用PCR方法进行基因型鉴定。mi R-15a/16-1基因敲除小鼠眼眶取血,用动物血液分析仪进行全血细胞分析。采用流式细胞仪分析mi R-15a/16-1基因敲除小鼠脾脏中免疫细胞频率。结果:mi R-15a/16-1+/+、mi R-15a/16-1+/-、mi R-15a/16-1-/-各表型小鼠互交繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律。流式结果显示,mi R-15a/16-1基因敲除小鼠与野生型小鼠相比,CD19+、NKG2D+细胞增多,其余无明显差异。全血细胞分析结果显示淋巴细胞增多。结论:实验所用PCR方法可以鉴定mi R-15a/16-1-/-小鼠;mi R-15a/16-1-/-小鼠的获得为进一步探究mi R-15a/16-1的作用提供了较理想的动物模型;敲除mi R-15a/16-1基因,小鼠脾脏CD19+、NKG2D+细胞增多。

过表达miR-16下调IL-4诱导分化的THP-1细胞IL-10和Arg1的表达

目的探讨慢病毒介导的miR-16对THP-1巨噬细胞表达白细胞介素10(IL-10)和精氨酸酶1(Arg1)的影响。方法利用重组人IL-4(rh IL-4)将THP-1细胞诱导分化为M2型巨噬细胞,利用ELISA检测诱导前后细胞IL-10的分泌,实时荧光定量PCR检测THP-1巨噬细胞诱导前后miR-16的表达;通过慢病毒感染获得miR-16过表达细胞;ELISA检测miR-16过表达细胞和对照细胞IL-10的分泌;流式细胞术检测miR-16过表达细胞和对照细胞IL-10的表达;Western blot法检测miR-16过表达细胞和对照细胞Arg1的表达。结果 THP-1细胞经IL-4诱导后,培养上清中IL-10的分泌逐渐增加,并在第6天达峰值。IL-4将THP-1细胞诱导为M2型巨噬细胞后,miR-16表达下调;慢病毒感染M2型巨噬细胞经嘌呤霉素筛选后GFP表达率提高至97.7%;ELISA检测M2型巨噬细胞miR-16过表达组上清液中IL-10的分泌量为(72.15±0.16)pg/m L,较对照组(103.47±0.14)pg/m L低。流式细胞术检测显示miR-16过表达细胞IL-10的平均荧光强度(Gm)为3.47,胞内IL-10的表达水平较对照组(Gm=12.40)低。过表达miR-16后,M2型巨噬细胞中Arg1表达降低。结论慢病毒介导的miR-16能够抑制IL-4诱导分化的THP-1巨噬细胞中IL-10和Arg1的表达。

循证:挖掘小劳动里的大智慧

幼儿园里的小劳动无处不在,但是幼儿完成这些日常小劳动的过程,教师往往不是特别关注,只是根据劳动结果对幼儿进行简单评价,这样的评价是不全面的,有时甚至是无意义的。因此,在实施劳动教育的过程中,我们希望通过循证的方式使幼儿的学习过程看得见,进而帮助教师更加科学地指导幼儿,为不同发展水平的幼儿提供更适宜的劳动内容,从而促进幼儿全面发展。

BRAF V600E(VE1)在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义

目的:分析BRAF V600E、CK19及Galectin-3抗体在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)中的表达情况,并结合PTC的临床病理特征,探讨BRAF V600E抗体的诊断价值。方法:对80例PTC患者的临床病理资料进行分析,并以31例结节性甲状腺肿、13例桥本甲状腺炎患者作为对照组,观察BRAF V600E、CK19、Galectin-3 3种抗体在PTC组与对照组间的表达差异,并分析BRAF V600E抗体与PTC临床病理特征间的相关性。结果:PTC患者甲状腺被膜侵犯情况与淋巴结转移率有关(P<0.05)。80例PTC患者病理组织中的BRAF V600E、CK19及Galectin-3抗体阳性率分别为62.50%、98.75%、95.00%,联合运用CK19及Galectin-3,其诊断灵敏度达95.00%;BRAF V600抗体的诊断特异度为100%,分别与CK19、Galectin-3联合运用,可提高诊断特异度。BRAF V600E抗体表达与PTC患者的年龄、性别、肿瘤直径、甲状腺被膜侵犯与否、淋巴结转移、组织学亚型等临床病理参数间均无统计学相关性(P>0.05)。结论:联合运用BRAF V600E、CK19、Galectin-3抗体有助于PTC的病理诊断,BRAF V600E抗体可起到对BRAF V600E基因突变的初筛作用。