应用傅里叶红外光谱研究强声波作用下植物壁蛋白质二级结构变化

本论文采用傅里叶红外光研究烟草花粉细胞在不同频率和不同功率的强声波作用下，细胞壁蛋白质二级结构的变化．实验表明，在酰胺Ⅰ和酰胺Ⅱ带都有变化．当频率为４００Ｈｚ，功率分别为１１０ｄＢ、１００ｄＢ时，酰胺Ⅰ带β⊥折叠向Ｂ‖折叠转移，振动态由ν⊥（π，０）→ν‖（０，０）；当功率为９０ｄＢ，频率分别为８００Ｈｚ、８０００Ｈｚ时，酰胺Ⅱ带α螺旋稍有改变．因此，本工作的结果将有助于我们了解强声波对植物细胞的作用效应．

准弹性激光光散射在血细胞检测中的应用

本文利用准弹性激光散射法和细胞电泳法对不同哺乳动物的红细胞，淋巴细胞、粒细胞进行检测，结果表明在一定条件下，不同类型的血细胞平均电泳速度有明显差别．这一结果为光散射法应用于血细胞检测提供了可能性．

激光微束诱导pSV－β质粒导入Hela细胞的研究

本文报道了用一套Ｎｄ：ＹＡＧ紫外激光微束系统研究基因转移。我们以ｐＳＶ－β质粒（β─半乳糖苷酶基因）作为报道基因，利用紫外激光微束将其导入Ｈｅｌａ细胞中，通过组织化学染色检测到质粒在Ｈｅｌａ细胞中获得表达，在最佳的激光辎照条件下，Ｈｅｌａ细胞的导入表达成功率在８０％以上。本工作是国内首次报道激光微束诱导外源基因进入动物细胞中并获得表达，为激光微束技术在动、植物细胞高效率导入外源ＤＮＡ的研究中摸索到一套经验，也将有力地促进这一技术在细胞工程方面的应用。

激光微束技术及其在基因转移研究中的应用

本文中介绍了我们设计和安装的一套激光微束系统,该系统分为二部份:激光源和显微镜.工作波长355nm是由电子调Q Nd:YAG激光经KDP倍频和混频后得到的.这束光从显微镜的左边引入45°反射,再经×100物镜聚焦.光束直径小于1μ.这束激光可给细胞打孔,约在1秒内小孔自行修复,在修复之前荧光物质和质粒可以扩散进细胞.我们成功地把GUS基因导入烟草花粉细胞中并得到瞬间表述,还把DAPI-λDNA导入M85胃癌细胞必观察到兰色荧光.从本工作初步表明这种导入方法很有发展前途.

抗癌药物顺铂对DNA结构的影响

本文采用脉冲激光荧光技术及常规的荧光分光光度计详细地研究了顺铂对DNA变性温度的影响,DNA氢键受损的碱基对数随温度变化,DNA的G—C碱基含量对顺铂作用效果以及顺铂浓度的影响,初步探讨了抗癌药物顺铂对DNA的结构影响.

激光微束辐照剂量对细胞存活率外源物质导入率影响的研究

本文介绍了一套经过改进的 Nd:YAG 紫外激光微束系统,以小鼠巨噬细胞及 Hela细胞为实验材料,并利用多种荧光物质作为导入物,系统地研究了激光微束辐射剂量与细胞存活率、外源物质导入率的关系,为深入地研究激光微束与细胞的相互作用机理摸索出优化条件.

显微红外研究巨噬细胞膜电融合后膜蛋白二级结构的变化

首次尝试了将显微傅里叶变换红外光谱术应用于研究电融合后细胞膜蛋白质二级结构的变化，发现脉冲电场作用于细胞具有穿透效应，施加电脉冲后，整个细胞的蛋白质体系能量增加，表明电脉冲对蛋白质的二级结构影响很大；同时，还发现用唾液酸苷酶和蛋白酶Ｐｒｏｎａｓｅ分别处理巨噬细胞膜表面后，膜上蛋白质二级结构无序化程度增加，用酶适度处理的细胞将更易发生电融合。

准弹性光散射研究脂质体表面电特性

电泳率对于研究细胞的表面特性有着很重要的意义.传统的测量方法是显微细胞电泳,这里所用的准弹性光散射电泳(QELS)可以在很短的时间内对大量带电颗粒的运动进行监测,得出有统计意义的结果.我们用脂质体作为模型.制备了含有不同比例磷脂酰胆碱(PC)、硬脂酸氨(SA)和磷脂酰甘油(PG)的脂质体,测定了它们的电泳率,并计算了它们的表面电荷密度. 一、材料和方法 1.脂质体制备应用逆相蒸发法.最终脂浓度为3.3 mmol/L,脂质体制备介质为20 mmol/L PBS,pH为7.38.

4′6二脒基-2-苯基吲哚与DNA结合特性研究

本文以小牛胸腺DNA和λDNA为材料,首次用激光拉曼光谱研究了4’6二脒基—2—苯基吲哚(DAPI)与DNA的结合机制.认为DAPI是以非镶嵌的方式在DNA小沟中同DNA的AT碱基对此氢键结合.在低PH下,这种结合受到抑制,盐浓度的高低与DAPI-DNA复合体的荧光强度成负相关.

超短脉冲激光微束对细胞作用的研究

本文详细地介绍了我们自己设计和安装的一个Nd:YAG超短脉冲激光微束系统,该系统分成二个部分:激光源和显微镜。由电光调Q非稳腔Nd:YAG激光倍频后得到355nm紫外光进入显微镜并由物镜聚焦。同时,这超短脉冲激光微束照射在细胞上并且在细胞上产生一个可以自恢复的小孔。在文中我们还讨论了超短脉冲激光微束与细胞之间作用效应及机理。

UV激光微束作用于细胞膜的机理研究

本文分别选用DOPC脂质体、非洲爪蟾和洋葱表皮等为材料,初步研究激光微束作用于细胞膜的作用机理,样品经由Nd/YAG激光器产生的355nm的UV激光微束作用,在膜上产生可恢复性小孔,选脂质体上的这种孔作Raman微区扫描,部位分别选在孔中心、孔边缘和孔外区域,得到三种谱图.根据膜的特性,在分子水平上对此作用机理建立了一个分子模型,很好地解释了实验结果和观察到的一些现象.

流式细胞术分析强声波对植物细胞周期的影响

应用流式细胞术分析烟草细胞在交变应力作用下细胞周期的变化。用特制的强声波发生装置产生频率和强度可调的交变应力场 ,研究不同频率和强度的交变应力作用后烟草细胞周期的变化。实验结果表明 ,在交变应力作用下直接影响细胞或细胞分裂的同步化 ,促进S期的DNA合成 ,有助于细胞有丝分裂。声波频率在400Hz至800Hz,强度在90dB到110dB内 ,随频率和强度的增加 ,交变应力使S期细胞明显增加 ,但频率或强度过大 ,反而使S期细胞大大减少。

交变应力作用下烟草细胞热力学相行为的研究

研究了交变应力对烟草愈伤组织细胞的影响， 采用本实验室研制的强声波发生装置来产生交变应力场， 并利用差式扫描量热仪（ＤＳＣ） 研究了不同强度和频率的交变应力作用后烟草细胞热力学相行为的变化。研究结果表明：交变应力的影响与应力的频率和强度密切相关，一定频率和强度范围内的交变应力能使得植物细胞的相变温度有明显的降低， 而过高频率的应力刺激则会使细胞相变温度升高。细胞热力学相变反映了细胞壁膜的流动性，相变温度变低表明细胞壁膜的流动性增强， 这必然为细胞的生长和分裂提供了便利的条件。 因此， 对于从细胞和分子水平研究交变应力对植物生长。

应用圆二色光谱研究交变应力对烟草细胞膜蛋白结构的影响

本文用圆二色光谱 (CD)研究了交变应力对烟草细胞膜蛋白结构的影响 采用本实验室研制的强声波发生装置来产生交变应力场 ,研究了不同强度和频率的交变应力场作用后烟草细胞膜蛋白结构的变化 研究结果表明 :细胞膜蛋白结构变化与应力的频率和强度密切相关 ,一定频率和强度范围内的交变应力能使得烟草细胞膜蛋白的二级结构发生明显的变化 ,表现为α螺旋的增加和 β转角的减少 这反映了细胞膜蛋白和磷脂相互作用的增强和细胞膜流动性的增加 ,进而为细胞的生长和分裂提供有利的条件 从细胞和分子水平研究交变应力对植物生长。

黄芪对人红细胞膜脂流动性及膜蛋白构象的影响

用荧光偏振、圆二色谱(CD)和准弹性光散射等实验技术研究了中药黄芪对人红细胞膜的作用。黄芪能增加人红细胞膜脂流动性,增加膜蛋白中α-螺旋的含量,对膜表面电荷也有影响。黄芪对膜蛋白的作用比对膜脂作用更敏感。黄芪对人红细胞膜作用的一个重要环节可能是保护人红细胞膜免受自由基的攻击。

玉米小斑病菌C小种毒素理化性质及光谱特征的研究

就玉米小斑病菌Ｃ小种分泌的毒素进行了分离纯化，得到一对Ｃ细胞质有专化侵染的活性有机物质ＴｏｘｉｎＩ，通过对ＴｏｘｉｎＩ的紫外，红外及质子核磁共振等的测定，确定了ＴｏｘｉｎＩ的一些光谱结构特征，推测其为一种新化合物。

包裹质粒DNA及线状DNA脂质体的制备

本实验制备组成分别为DOPE/Chol/OA(4:4:3)的酸敏脂质体及DOPC/Chol/OA(4:4:3)脂质体,用于包裹质粒pSV_2-neo、pUC18-ras、pSV-neo-ras及大分子线状DNA,包裹率可达50％.被脂质体包裹的DNA不被DNase降解,提示DNA分子被脂质体包裹在微球体内部.电泳检测表明,被包裹的DNA分子没有断裂.所得到的脂质体较稳定,4℃放置5～6月,脂质体内仍保留部分DNA分子.制备酸敏脂质体时,pH为8.0时脂质体较稳定,pH<6.5～7时则不稳定.

大黄素、大黄酸对平滑肌细胞增殖抑制作用研究

采用ＭＴＴ法（四氮唑法）及流式细胞技术测定大黄素、大黄酸对平滑肌细胞增殖抑制作用。结果显示，大黄素抑制平滑肌细胞增殖的有效剂量范围为其血药浓度的２５～１２５倍；大黄酸有效剂量范围为其血药浓度的１２．５～７５倍。大黄素对平滑肌细胞增殖抑制率２４．６％～９４．５８％，大黄酸抑制率为１４．３８％～８５．６４％。流式细胞技术测定大黄素处理后的平滑肌细胞出现凋亡细胞峰，Ｓ期细胞减少。

细胞融合技术的新进展

细胞融合技术的发展已有20多年的历史。利用细胞融合进行动物、植物以及微生物的细胞杂交,已成为生物科学诸多研究领域的一项重要手段,而细胞融合本身(特别是膜融合),也已成为理论与应用研究的重要领域。自1958年OKa-

TMV侵染后的烟草细胞膜蛋白结构变化的研究

为探明病毒侵染对烟草细胞膜的损伤作用 ,采用圆二色波谱仪 (CD)分析了被 TMV侵染的烟草细胞膜蛋白结构的变化 ,以及右旋紫草素对感病烟草细胞膜的作用。结果发现 ,被 TMV侵染的烟草细胞膜蛋白分子二级结构发生变化 ,表现为 α-螺旋的减少和 β-转角的增加 ;用右旋紫草素处理的感病烟草细胞膜蛋白分子二级结构的变化 ,表现为药剂作用比感病样品的细胞膜蛋白的二级结构中 α-螺旋成分比例增加 ,而 β-转角比例相应减少。