红细胞醛糖还原酶测定荧光法的建立及临床应用

目的红细胞醛糖还原酶测定荧光法的实验探讨。方法利用NADPH、DL一甘油醛、磷酸缓冲液和适量红细胞溶血液组成的反应体系，建立了一种红细胞醛糖还原酶（AR）的荧光测定法，并对酶反应最适条件进行了实验探讨。结果发现所加溶血液量在工～10μl范围内，随所加量的增多，反应后NADPH消耗也逐渐增加，二者呈良好的线形相关。反应时间在l～8分钟内，随反应时间的延长，反应后NADPH消耗逐渐增加，二者有良好的相关性。PH6．0～6．5时反应后NADPH的消耗最大。反应温度对测定结果影响不明显。重复性实验表明，该方法的批内变异系数（CV）5．27％；批间变异系数（CV）8．98％。应用该方法测定了10例正常人和210例糖尿病患者的红细胞AR活性。结论糖尿病患者AR活性显著高于正常人（P＜O．01），且AR活性与血糖值呈正相关（P＜O．01）。本研究为深入了解AR与糖尿病慢性并发症（DCC）发生、发展的关系，提供了一种较为简单而可靠的检测方法。

红细胞醛糖还原酶荧光法的建立及意义

目的建立一种准确测定醛糖还原酶（ＡＲ）活性的方法。方法利用ＮＡＤＰＨ、ＤＬ－甘油醛、磷酸缓冲液和适量红细胞溶血液组成的反应体系，以荧光法测定了红细胞ＡＲ活性，并对酶反应最佳条件进行了实验探讨。结果①血红蛋白浓度在１～１０μｌ范围内，随着所加量的增加，反应后的ＮＡＤＰＨ消耗也逐渐增加，两者之间有很好的相关性；②反应温度对测定结果的影响不很明显；③以ＮＡＤＰＨ作辅酶时测得酶活性约为ＮＡＤＰＨ的１／３，这两种辅酶测得的荧光读数有良好的相关性（ｒ＝０．９２）；④ｐＨ６．０～６．５时ＮＡＤＰＨ的消耗最大；⑤批内变异系数（ＣＶ）５．２７％；批间变异系数（ＣＶ）８．９８％；⑥该法测定２０例正常对照和４０例糖尿病人红细胞ＡＲ结果表明，糖尿病人ＡＲ活性显著高于正常人（Ｐ＜０．０１），且ＡＲ活性与血糖值正相关（Ｐ＜０．０１）。结论荧光法灵敏、准确、稳定、特异，为深入研究ＡＲ与慢性并发症（ＤＣＣ）的发生、发展的关系，提供了一个可靠的手段。

胰岛素依赖型糖尿病患者外周血T淋巴细胞亚群的变化

为了探讨胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)患者外周血 T 淋巴细胞亚群的变化,本文采用单克隆抗体技术测定了35例 IDDM 患者的外周血 T 细胞亚群,同时测定了胰岛素抗体和糖基化血红蛋白(GHb),发现早期 IDDM 患者CD_3,CD_8阳性细胞数明显低于对照组(P<0.01);CD_4/CD_8值显著高于对照组(P<0.01)。随病程延长这种变化逐渐消失(P<0.05)。早期 IDDM 患者 CD_4/CD_8值与 GHb 呈中度正相关(r=0.5684)。可见,外周血 T 淋巴细胞亚群的失衡是IDDM 发病的一个重要因素,其失衡程度与早期病程呈正相关。

老年原发性甲状腺功能减退症临床分析

目的总结老年原发性甲状腺功能减退症(甲减)的特点,早诊断,早治疗,以提高老年人的生活质量。方法对我院2001年～2006年确诊为老年原发性甲状腺功能减退症的52例患者的资料进行回顾分析。结果老年原发性甲减多发于女性(男女之比为1:2.06),本病的发生与高自身免疫性抗体有关。TGAb阳性率为82.6%(男阳性率为52.9%,女阳性率为97.1%);TPOAb阳性率为76.9%(男阳性率为52.9%,女阳性率为97.1%),女性尤为明显。可出现贫血(32.7%)、高血压(36.5%)、心包积液(26.9%)、高血脂(甘油三酯占78. 8%、胆固醇占63.5%)及血清心肌酶升高(17.3%)。结论老年原发性甲减可引起多系统损害,但多数起病隐匿,病程发展缓慢,易与衰老本身伴随的症状混淆而得不到重视。

2型糖尿病患者微量白蛋白尿与胰岛素抵抗关系调查

目的探讨2型糖尿病患者微量蛋白尿与胰岛素抵抗(IR)的关系。方法伴微量白蛋白尿的2型糖尿病患者(DM-MA)36例,不伴有微量白蛋白尿的2型糖尿病患者(DM-NA)29例,正常对照组(NC)20例。3组患者均行空腹血糖、胰岛素、血脂等测定,并计算HOMA-IR评估组织胰岛素抵抗,根据结果进行比较分析,将所有患者的尿白蛋白排泄率(UAER)与有关因素进行多元回归分析。结果DM-MA组与DM-NA组HOMA-IR均高于NC组,差异非常显著(P<0.01),DM-MA组HOMA-IR示明显高于DM-NA组(P<0.05),而且HOMA-IR与UAER呈独立相关(r=0.4875,P<0.01)。结论与尿白蛋白正常的2型糖尿病相比,伴微量白蛋白尿的2型糖尿病患者有更严重的IR,IR是微量白蛋白尿的独立危险因素。

2型糖尿病对骨代谢及相关激素的影响

目的 探讨２型糖尿病对骨代谢紊乱及相关激素的影响。方法 测定２０例健康对照者和６０例２型糖尿病患者血甲状旁腺激素（ＰＴＨ）、降钙素（ＣＴ）、２５羟维生素Ｄ３ 〔２５（ＯＨ）Ｄ３〕、环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）和血、尿钙（Ｃａ）、磷（Ｐ）、镁（Ｍｇ）、糖基化血红蛋白（ＨｂＡ１ｃ）、２４小时尿糖、Ｃ肽曲线下面积等指标。结果 ①２型糖尿病患者血ＰＴＨ 水平显著高于对照组（Ｐ＜ ０．００１和Ｐ＜ ０．０１），ＣＴ水平显著低于对照组（Ｐ＜ ０．０１），尿Ｃａ、尿Ｍｇ 排泄量显著高于对照组（Ｐ＜ ０．０１和Ｐ＜ ０．０５）；②ＰＴＨ水平与ＨｂＡ１ｃ和尿Ｃａ 呈显著正相关（ｒ＝ ０．４０，Ｐ＜ ０．０５和ｒ＝ ０．８３，Ｐ＜ ０．００１），与ＣＴ呈显著负相关（ｒ＝ － ０．７４， Ｐ＜ ０．０１）；③ＰＴＨ水平与Ｃ肽曲线下面积呈负相关（ｒ＝ － ０．３１， Ｐ＜ ０．２）。结论 ２型糖尿病患者存在明显Ｃａ、Ｍｇ 代谢异常和继发性ＰＴＨ、ＣＴ改变是造成骨质疏松的主要原因，这种变化在糖尿病早期更明显。

中药黄芩甙与黄连素对糖尿病鼠醛糖还原酶活性作用的观察

利用糖尿病ＳＤ大鼠动物模型，观察了中药黄芩甙、黄连素及典型的醛糖还原酶抑制剂Ｓｏｒｂｉｎｉｌ对大鼠组织醛糖还原酶（ＡＲ）活性和肾脏病变的影响。结果发现糖尿病鼠经上述三种药物治疗后，其晶体、肾脏ＡＲ活性明显下降，尿蛋白呈下降趋势，肾小球病理变化得到明显改善。提示，中药黄芩甙、黄连素对逆转糖尿病肾脏病变疗效显著，本研究将为糖尿病肾脏病变的防治提供一条有希望的新途径。

胰岛素强化治疗对成人晚发自身免疫性糖尿病患者胰岛功能的保护作用

目的 观察胰岛素强化治疗对成人晚发自身免疫性糖尿病 (LADA)患者胰岛功能的保护作用。 方法 将病程在 1年以内的LADA组患者 70例 ,随机分为胰岛素强化治疗组 (A组 )和非胰岛素治疗组 (B组 )。A组使空腹血糖 (FPG)控制在 <6 .1mmol L ,餐后 2h血糖 ( 2hPG)控制在<8mmol L ,糖化血红蛋白 (HbA1 c)控制在 <7%。B组未进行胰岛素强化治疗 ,血糖、GHbA1 c未达到A组治疗标准。二组患者随访治疗时间 6年。A、B两组完成随访观察各 32例。 结果 随病程的延长 ,酮症发生率B组高于A组 (P <0 .0 5 ) ;A、B两组在开始进入临床观察时 ,其C肽释放试验各时相值差异无显著意义 (P >0 .0 5 ) ;经 2、4、6年胰岛功能动态观察 ,2年时A组的胰岛功能比治疗前好转。随病程延长 ,B组C肽水平进行性下降 ,而A组C肽水平相对稳定 ,较B组下降明显延迟。 结论 对LADA患者及时进行胰岛素治疗可保护残存胰岛β细胞功能 ,防止糖尿病并发症的发生。

伴或不伴2型糖尿病大血管病变患者血清高灵敏度C-反应蛋白水平

目的观察2型糖尿病及非糖尿病大血管病变患者血清中高灵敏度C 反应蛋白(hsCRP)浓度的变化。方法选择2型糖尿病患者148例,其中伴大血管病变77例,无大血管病变71 例;非糖尿病大血管病变73 例,正常人群组75 例。采用ELISA法测定4组患者的血清hsCRP浓度。结果2 型糖尿病患者(合并或不合并大血管病变)以及非糖尿病大血管病变组血清hsCRP水平均明显高于正常对照组(P<0 .01 或P<0. 001);2 型糖尿病组与非糖尿病大血管病变组间hsCRP水平无显著性差异(P>0 .05);2型糖尿病合并或不合并大血管病变组之间hsCRP水平也无显著性差异(P>0 .05)。结论2 型糖尿病患者及非糖尿病大血管病变患者体内可能存在慢性低水平炎症反应,CRP可能是2型糖尿病以及动脉粥样硬化发生发展的一个良好预测因子。

索比尼尔、托瑞司他及24种中药对醛糖还原酶的抑制作用

目的:观察24种中药及典型醛糖还原酶(AR)抑制剂索比尼尔、托瑞司他对AR活性的抑制作用,以筛选防治糖尿病慢性并发症的中药。方法:利用牛睾丸纯化的AR观察药物对酶促反应动力学的影响,酶活性反应体系包括:NADPH0.1mmol.L-1,DL-甘油醛10mmol.L-1,Na+-K+磷酸缓冲液67mmol.L-1和酶适量。将测得的酶促反应速度按双倒数(Lineweaver-Burk)作图法确定药物对AR的抑制类型,再用Dixon或Cornish-Bowden作图法求取药物对AR的抑制系数Ki,根据Ki值大小筛选出作用较强的中药。结果:索比尼尔为非竞争性抑制剂,托瑞司他为反竞争性抑制剂,除龙胆草、柴胡无抑制作用外,其余中药均为混合性抑制剂。槲皮素、黄连素、鬼针草、黄芩苷、水飞蓟宾、艾叶、知母、墨旱莲、野菊花、决明子、茜草、青果酶抑制作用较强,其Ki为2.1～617.2μg.mL-1,黄芪、葛根素、淫羊藿、紫竹草、吴茱萸、牡丹皮、肉桂、菟丝子、丹参、甘草抑制作用较弱,其抑制常数超过mg.mL-1水平。结论:利用本实验建立的方法可进行AR抑制剂的初步筛选。

腹腔镜胆囊切除术对胰岛β细胞功能的影响

目的 了解腹腔镜胆囊切除术 (LC)对人胰岛 β细胞功能的影响。 方法 40例择期在硬膜外阻滞麻醉下胆囊切除术病人 ,随机分为腹腔镜胆囊切除术组 (LC组 ,n =2 0 )和开腹胆囊切除术组 (OC组 ,n =2 0 )。分别于术前、气 (开 )腹后 2 0分钟、术毕 2 0分钟取血样 ,用放免法测定血浆胰岛素和C肽 ,用葡萄糖氧化酶 (GOD)法测定血糖。结果 气 (开 )腹后和术毕两组血糖均高于术前。以OC组增高明显 (P <0 0 1) ;LC组仅术毕 2 0分钟高于术前 (P <0 0 5 )。胰岛素、C肽和胰岛素 /血糖比 (I/G)∶LC组气腹后、术毕均略高于术前 (P >0 0 5 )。与术前比OC组胰岛素增加不明显 (P >0 0 5 )。C肽开腹后降低 (P <0 0 5 ) ,术毕后升高 (P <0 0 5 )。I/G术毕略低于术前 (P >0 0 5 )。结论 LC应激反应轻于OC ,对胰岛 β细胞功能无明显影响。

何首乌、肉苁蓉复方制剂干预肾虚血瘀证老年患者的免疫功能变化

目的:观察从肾虚血瘀病机立论,以补肾活血为治疗原则拟定的何首乌、肉苁蓉复方制剂对老年肾虚血瘀证患者免疫功能和临床症状的影响。方法:①选择2000-01/12潍坊市人民医院中医科的住院患者肾虚血瘀证老年患者34例,男22例,女12例,平均年龄(63±3)岁。均对治疗方案和检测项目知情同意。②采用何首乌、肉苁蓉复方制剂治疗肾虚血瘀证,该方为自拟方,其组成:何首乌30g,肉苁蓉20g,炙黄芪60g,川芎15g,当归30g,丹参15g,浸泡30min,用BZE150A5型自动煎药包装机煎药,每付药加水500mL,武火开锅后转文火煎30min至200mL,分2袋包装。患者口服100mL/次,2次/d,6个月为1个疗程。③参照《中药新药治疗老年病临床研究指导原则》对临床症状(腰膝酸软、健忘耳聋、夜尿频多、肢体麻木、头晕眼花、失眠多梦、性功能减退、舌质紫暗或有瘀斑)进行计分:用统一的语句提问,按5级(0～4分)计分,能主动说出症状的4分,无症状者0分。计分之和为该观察病例临床症状积分值。④于治疗前后用美国Elite流式细胞计数仪测定淋巴细胞亚群CD3+,CD4+,CD8+所占百分比,计算CD4+与CD8+比值;采用酶联免疫吸附法测定血白细胞介素1、白细胞介素2水平;采用SF-3000Sysmex血细胞计数仪(Roth公司产品)测定淋巴细胞绝对值;采用Array360蛋白反应仪(Beckman产品)测定免疫球蛋白IgG,IgA,IgM含量及总补体活性。⑤两样本均数比较采用t检验。结果:肾虚血瘀证老年患者34例均进入结果分析。①症状积分值:治疗后患者的临床症状夜尿频多、腰膝酸软、肢体麻木、头晕眼花、健忘耳鸣、性功能减退、舌质紫暗积分(除失眠多梦外)均较治疗前明显降低(1.07±0.18,1.95±0.58,1.58±0.06,0.85±0.07,2.47±0.42,0.78±0.16,0.29±0.05;2.85±0.44,2.45±0.22,2.23±0.25,2.77±0.34,2.88±0.65,2.67±0.56,0.43±0.11,P<0.05～0.01)。②免疫功能:治疗后患者外周血T淋巴细胞亚群CD3+所占百分比及CD4+与CD8+比值、血清白细胞介素1、白细胞介素2水平、淋巴细胞绝对值较治疗前明显升高[(65.10±5.16)%,1.59±0.26,(57.39±10.77)ng/L,(77.62±16.34)ng/L,(2.91±0.47)个/L;(63.27±10.11)%,1.44±0.84,(39.25±10.38)ng/L,(65.12±15.12)ng/L,(2.07±0.47)个/L,P<0.05～0.01],IgM水平明显降低[(1.83±0.44),(2.03±0.65)g/L,P<0.01]。结论:何首乌、肉苁蓉复方制剂可增强肾虚血瘀证老年患者免疫调节功能,改善临床症状。

甲巯咪唑治疗Graves病的临床疗效及预后研究

目的探讨甲巯咪唑治疗Graves病的临床疗效,分析影响Graves病的复发因素。方法选择186例Graves病患者为研究对象,均予甲巯咪唑进行治疗,根据用药后的治疗效果将患者分为缓解组、复发组和未停药组。采用化学发光法检测血清游离甲状腺素3(FT3)、游离甲状腺素4(FT4)、敏感促甲状腺激素(sTSH)、抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)、抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb),采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测抗促甲状腺素受体抗体(TRAb),采用ELISA双抗体夹心法检测CXC趋化因子配体10(CXCL10)。采用Logistic回归分析Graves病的复发因素。结果缓解组患者血清FT3、FT4、TgAb、TPOAb、TRAb及CXCL10明显低于复发组和未停药组(P<0.05),sTSH明显高于复发组和未停药组(P<0.05)。甲状腺大小、TRAb水平及FT3/FT4值为治疗后复发的危险因素(P<0.05)。结论甲硫咪唑可在一定程度上缓解Graves病的症状,但发病初甲状腺明显肿大、TRAb水平高、FT3/FT4比值高的患者,停药后复发风险较大。

Ⅱ型糖尿病患者钙、磷代谢相关激素的变化及其意义

对２０例健康对照者和６０例Ⅱ型糖尿病（ＤＭ）患者测定血清甲状旁腺激素（ＰＴＨ）、降钙素（ＣＴ）、２５羟维生素Ｄ３〔２５（ＯＨ）Ｄ３〕、环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）等指标。结果显示，Ⅱ型ＤＭ患者存在明显钙（Ｃａ）、镁（Ｍｇ）代谢异常，且其继发性ＰＴＨ、ＣＴ改变是造成骨质疏松的主要原因；这种变化在ＤＭ早期更明显；

小剂量环孢霉素A治疗Ⅰ型糖尿病疗效观察

我们采用小剂量环孢霉素A(CsA)治疗17例Ⅰ型糖尿病(IDDM)患者,并设置对照组,结果如下。1 资料和方法 将33例IDDM者(根据1985年WHO标准确诊,排除可疑病例及妊娠者)随机分为两组:CsA组17例,男12例、女5例,年龄35.8±5.8岁,病程3.21±4.5个月,76％有酮症史;单纯胰岛素组(对照组)16例,男11例、女5例,年龄31.2±9.5岁,病程3.09±3.8个月,75％有酮症史。

益寿饮颗粒对D-半乳糖所致亚急性衰老模型自由基代谢的影响

目的:探讨益寿饮颗粒对D半乳糖所致亚急性衰老模型自由基代谢的影响。方法:Wistar大鼠80只,随机分为模型对照组、六味地黄丸组、益寿饮小剂量组及益寿饮大剂量组。昆明种小鼠80只,随机分为模型对照组、六味地黄丸组、益寿饮小剂量组及益寿饮大剂量组。实验结束后将鼠处死,断头取脑,制成10%的组织匀浆,测定大、小鼠一氧化氮(NO)、脂褐素(LP)、丙二醛含量(MDA)及超氧化物歧化酶活力(SOD);收集小鼠血清测定SOD、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、MDA含量。结果:益寿饮大、小鼠脑组织中NO含量显著增加,LP和MDA显著减少(P<0.01),小鼠血清中SOD、GSHPx的含量明显提高(P<0.05,P<0.01),与模型对照组及六味地黄丸组比较,均有显著性和非常显著性差异(P<0.05,P<0.01)。结论:益寿饮能使D半乳糖所致亚急性衰老模型NO含量增加,调整自由基代谢,提高抗氧化酶的活力,抑制自由基对机体的损伤,改善机体衰老导致的各种病理变化。

2型糖尿病糖化血红蛋白水平与肾脏微血管病变的关系

目的探讨2型糖尿病(DM)糖化血红蛋白(GlycosylatedHemoglobinA1c,GHbA1c)的水平与糖尿病肾脏微血管病变的关系。方法对81例该病患者及33名正常对照者,采用离子交换层析法检测其GHbA1c,RIA法检测尿微量白蛋白(mAlb)和β2-微球蛋白(β2-m)。结果当2型DM患者血GHbA1c正常时,其尿mAlb及β2-m水平与正常人相比无明显差异(P>0.05),但随着血GHbA1c水平的增高,其尿mAlb及β2-m水平随之明显升高(P<0.01),并随血GHbA1c水平的升高呈逐步上升趋势;2型DM患者血GHbA1c水平与尿mAlb及β2-m水平之间呈明显的正相关,不同血GHbA1c水平患者之间的尿mAlb及β2-m水平之间也存在显著性差异(P<0.01)。结论GHbA1c水平与糖尿病肾脏微血管病变密切相关,联合检测GHbA1c、mAlb及β2-m对于糖尿病肾病的早期预防及诊断具有重要意义。