分离产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌

目的 检测我院内科某病区产金属 β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌及其对抗菌药物的耐药性。方法 纸片法测定产金属 β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌 ;微量稀释法测定其对抗菌药物的耐药性。结果 该病区产金属 β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌占同期分离铜绿假单胞菌的 32 .3% ,产酶菌株对替卡西林 /克拉维酸、头孢哌酮、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、奈替米星 ,复方增效磺胺耐药 ;对阿米卡星敏感 ;对哌拉西林、哌拉西林 /他唑巴坦、环丙沙星、洛美沙星部分敏感。结论 产生金属 β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对头孢类及碳青酶烯类耐药的机制之一 ,实验室对其正确检测可帮助临床合理选用抗菌药物并减少耐药性的扩散。

肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌中ESBLs和AmpC酶基因的研究

目的研究肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌中ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶的存在形式及其基因类型和转移方式。方法利用CLSI纸片法确认实验和APB纸片增强试验分别检测ESBLs和AmpC酶,基因芯片技术和序列分析测定两种酶基因的类型,接合转移实验了解肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌耐药基因转移方式。结果在对头孢西丁不敏感的72株肺炎克雷伯菌和20株产酸克雷伯菌中,以同时产生ESBLs和AmpC酶为主要形式,分别占54.2%和75.0%;单产ESBLs分别为22.2%和25.0%,肺炎克雷伯菌中单产AmpC酶占12.5%;肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌中的AmpC酶基因绝大多数为DHA型(测得DHA-1型基因),ESBLs则以SHV型为主(测得SHV-12型),它们均能通过接合转移方式将其质粒携带的耐药性传递至受体菌。结论同时存在的ESBLs和AmpC酶是肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌耐药的主要原因,耐药基因的转移可导致耐药性的传播扩散。

检测多药耐药鲍氏不动杆菌的碳青酶烯酶及整合酶基因

目的检测多药耐药鲍氏不动杆菌(MDRAba)的碳青酶烯酶及整合酶基因。方法从70株对耐亚胺培南鲍氏不动杆菌中用PCR方法测定碳青酶烯酶OXA23类、OXA24类、OXA51类和OXA58类基因及Ⅰ类和Ⅱ类整合酶基因,对扩增阳性的碳青酶烯酶基因进行测序分析;抗菌药物敏感试验采用琼脂稀释法。结果获得OXA-23类基因阳性56株,占80.0%,OXA-58类基因阳性1株,仅1株菌OXA51类基因阴性;Ⅰ类整合酶基因阳性61株,占87.1%,未测得OXA24类碳青酶烯酶和Ⅱ类整合酶基因;序列分析提示分离的CRAba为OXA-23型和OXA-58型,所测菌株对环丙沙星、头孢他啶、庆大霉素、哌拉西林/他唑巴坦高度耐药,对多黏菌素B一致性敏感。结论新近出现的CRAba菌株主要是以Ⅰ类整合子携带的OXA-23型碳青酶烯酶。

肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌AmpCβ内酰胺酶的表型检测

目的比较研究临床实验室对AmpCβ内酰胺酶(AmpC酶)的表型检测方法,了解对头孢西丁不敏感的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中产生AmpC酶和超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的分布情况。方法利用加与不加3-氨基苯酚硼酸(APB)的头孢他啶、头孢噻肟和头孢西丁纸片进行APB纸片增强试验检测肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的AmpC酶,并与Tris-EDTA纸片试验检测AmpC酶的结果进行比较。用CLSI纸片确认实验检测肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产生的ESBLs。结果APB纸片增强试验与Tris-EDTA纸片法检测结果完全一致。对头孢西丁不敏感的62株肺炎克雷伯菌和74株大肠埃希菌中,分别检测到产AmpC酶41株(66.1%)和33株(45.0%)。AmpC酶和ESBLs同时存在的肺炎克雷伯菌占51.6%,单产AmpC酶和单产ESBLs的肺炎克雷伯菌分别为14.5%和21.0%;而大肠埃希菌则以单产ESBLs为主,占40.5%,单产AmpC酶及同时产生AmpC酶与ESBLs的分别占20.3%和24.3%。结论APB纸片增强试验和Tris-EDTA纸片试验操作简单,应用方便,成本低廉,均可用于临床实验室检测产AmpC酶的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌。

肺炎克雷伯菌质粒编码的AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的表型和基因型分析

目的研究肺炎克雷伯菌质粒编码的AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的表型和基因型。方法利用3-氨基苯酚硼酸及ESBLs确认试验检测AmpC酶与ESBLs表型,接合转移试验了解质粒在细菌间的传递;通过质粒的提取、纯化,PCR反应及序列分析,研究肺炎克雷伯菌质粒携带的ampC基因和ESBLs基因类型。结果从肺炎克雷伯菌中获得1条约15 kb大小的质粒,此质粒可通过接合转移方式将耐药性传递至大肠埃希菌,以从肺炎克雷伯菌及接合转移后的接合子细菌中,提取的质粒为模板,均可扩增出DHA型ampC基因及SHV型ESBLs基因,序列分析进一步证实ampC及ESBLs基因型分别为DHA-1型及SHV-12型。结论从肺炎克雷伯菌可转移的质粒中,检测到DHA-1型ampC基因及SHV-12型ESBLs基因。

12家部队医院细菌分布及耐药监测分析

目的调查不同地区部队医院患者血液、尿液等标本中的细菌分布及耐药情况,为合理使用抗菌药物提供实验室依据。方法收集12家部队医院2006年1-12月临床分离的1099株不重复细菌,采用琼脂稀释法测定抗菌药物对细菌的最低抑菌浓度(MIC),计算MIC50、MIC90,并按美国临床实验室标准化协会(CLSI)2007年标准判断敏感率(S%)、中介率(I%)、耐药率(R%),利用WHONET5.4软件进行分析。纸片法检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),3-氨基苯酚硼酸(APB)纸片增强法检测AmpC酶。结果共获得革兰阳性菌436株(39.7%),革兰阴性菌663株(60.3%)。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCN)检出率分别为62%和92%,未发现万古霉素耐药的肠球菌和葡萄球菌。大肠埃希菌(E.coli)、肺炎克雷伯菌产ES-BLs的比率分别为51.1%和45.1%,二者产AmpC酶的比率分别为11.3%和16.2%。血液中E.coli和肺炎克雷伯菌对头孢他啶、阿米卡星、头孢噻肟、头孢西丁和左氧氟沙星的耐药率普遍低于尿液中的相应细菌,而血液中铜绿假单胞菌和不动杆菌对美罗培南、头孢他啶、多黏菌素、米诺环素的耐药率均显著高于尿液中的相应细菌。结论MRSA、MRSCN以及产ESBLs、AmpC酶的耐药细菌在部队医院的发生率较高;自血液和尿液分离的细菌对抗菌药物的耐药性差异较大。

基因芯片技术检测大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌中ESBLs和AmpC酶基因

目的检测大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌产生的ESBLs和AmpC酶的基因。方法在对ESBLs和AmpC酶表型检测的基础上,利用基因芯片和PCR技术研究大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌产生ESBLs和AmpC酶的基因,并对部分ESBLs和AmpC酶的基因扩增产物进行序列分析。结果大肠埃希菌和产酸克雷伯菌以单产ESBLs为主,肺炎克雷伯菌则以同时产生ESBLs和AmpC酶为主。大肠埃希菌产生的ESBLs(除TEM型外)主要是CTX-M-9组型,占63.5%。肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌产生的ESBLs分别以SHV型和CTX-M-3组型为主,分别占70.4%和89.8%。肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌的AmpC酶均为DHA-1型酶的基因,大肠埃希菌的AmpC酶主要编码CMY-2型AmpC酶。结论基因芯片技术可同时检测多种耐药基因,是ESBLs和AmpC酶基因检测的新途径。

对环丙沙星耐药的肺炎克雷伯氏菌外膜蛋白图谱分析

为了探讨肺炎克雷伯氏菌对喹诺酮类药物的耐药机制，从临床送检标本中分离出８株耐环丙沙星的肺炎克雷伯氏菌，对其外膜蛋白进行了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析。结果发现除１株菌外，其余所有耐环丙沙星的肺炎克雷伯氏菌４２ｋＤ外膜蛋白带消失，另有１株菌的２５ｋＤ外膜蛋白带也同时消失。这一结果表明，肺炎克雷伯氏菌的４２ｋＤ外膜蛋白与其对环丙沙星的通透性有关。

从大肠艾希菌和肺炎克雷伯菌中检测超广谱β内酰胺酶和AmpC酶

目的 :了解对头孢类抗生素耐药的大肠艾希菌和肺炎克雷伯菌中ESBLs和AmpC酶的分布及其对抗生素的敏感性。方法 :利用双纸片协同试验及纸片法确认试验检测ESBLs ,三相试验检测AmpC酶 ,并用K B法纸片扩散试验和微量稀释法测定细菌对抗生素的敏感性。结果 :从对头孢噻肟耐药的大肠艾希菌和肺炎克雷伯菌中检出产ESBLs分别为 91 4 %和 96 7% ;产AmpC酶分别为 17 1%和 10 % ;ESBLs和AmpC酶共同存在者分别为 8 6 %和 6 7%。产酶菌株对三代头孢类抗生素高度耐药 ,对环丙沙星、庆大霉素及复方增效磺胺耐药率较高 ,对亚胺培南敏感 ,产AmpC酶细菌对含酶抑制剂的复合抗生素高度耐药。结论 :产生ESBLs和AmpC酶是大肠艾希菌和肺炎克雷伯菌对头孢类抗生素耐药的重要机制 ,实验室应对其检测和监测给予足够重视 。

患者标本产超广谱β内酰胺酶细菌的分析

目的：了解产超广谱β内酰胺酶细菌的种类及其对抗生素的敏感性。方法：用双纸片扩散试验从１９９７年我院患者标本中检测产超广谱β内酰胺酶的细菌，测定它们对抗生素的敏感性。结果：产超广谱β内酰胺酶细菌以大肠杆菌和肺炎克雷伯菌为主，从正常为无菌部位的标本中分离的菌株产酶者占４７％。体外药敏试验提示，产超广谱β内酰胺酶细菌对亚胺硫霉素全部敏感，对阿米卡星耐药率低，对氧哌嗪青霉素、三代头孢类抗生素及喹诺酮类耐药性高。结论：产超广谱β内酰胺酶细菌种类多。

产超广谱β内酰胺酶细菌的研究近况

超广谱β内酰胺酶是近年来发现的对三代头孢类抗生素耐药的主要原因。本文从ESBLs的类型和作用、产ESBLs细菌的种类、临床检测、对抗生素的敏感性及与医院感染暴发流行的关系诸方面进行了综述。对理解细菌对头孢类抗生素的耐药机制，正确选择抗生素进行治疗以及控制医院产ESBLs 细菌引起的暴发感染等均有重要意义。

刀豆氨酸-甘氨酸-溴麝香草酚蓝培养基在区分格特隐球菌与新生隐球菌中的应用

目的研究刀豆氨酸-甘氨酸-溴麝香草酚蓝培养基(CGB培养基)在区分新生隐球菌和格特隐球菌中的作用。方法将已鉴定并报告为新生隐球菌的219株不重复的保存菌种经复苏后接种至CGB培养基进行筛选。对筛选阳性的菌株以及随机选择筛选阴性的菌株进行PCR扩增,将扩增的IGS1、URA5和GPD1基因产物进行测序,与基因库中的标准序列进行比对。结果既往报告为新生隐球菌的219株菌中,有3株在CGB培养基上生长且使菌落周围培养基颜色变为蓝色,筛选为阳性,其余216株在CGB培养基上虽有生长,但培养基颜色无变化;3株显色阳性菌经基因扩增和测序鉴定为格特隐球菌,2株显色阴性菌基因扩增及测序鉴定为新生隐球菌格鲁比变种。结论格特隐球菌在CGB培养基上生长产生明显的颜色变化,可用于其与新生隐球菌的鉴定。

丙型肝炎病毒基因组变异性的研究进展

在对丙型肝炎病毒(HCV)基因组序列的比较研究中发现HCV基因组具有高度的变异性。此变异性与地区、感染时间及基因组的结构部位有关。本文对HCV基因组变异性有关问题的研究进展加以简要综述。

丙型肝炎病毒外膜E_2／NS_1区基因在大肠杆菌中的表达

将丙型肝炎病毒外膜Ｅ_２／ＮＳ_１基因亚克隆至融合型表达载体，在大肠杆菌中进行表达，表达的重组蛋白经ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ和ＥＬＩＳＡ鉴定具有丙型肝炎病毒外膜蛋白的抗原性，能与丙型肝炎病毒感染血清发生特异性结合反应，为研究外膜蛋白抗体的意义创造了条件。

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的分布及其耐药性研究

目的 了解我院产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的分布及不同来源的ESBLs耐药性。方法采用纸片扩散法进行药敏试验并应用WHONET5．3和EXCEL软件分析细菌分布和耐药性。结果我院产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌从1999年的14％和15％上升为2003年的30．1％和34．5％；产ESBLs大肠埃希菌和产ESBLs肺炎克雷伯菌在血中分别为30．2％和30．4％；在21～30岁年龄组中肺炎克雷伯菌发生ESBLs最高占34．8％，产ESBLs大肠埃希菌在81～90岁年龄组中分离率最高为36．7％；门诊患者产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌分别为19．8％和14．0％；住院患者产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌分别为26．6％和31．6％，在住院患者中ICU的发生率最高为43．5％和52．4％；血液标本中大肠埃希菌一旦产生ESBLs与呼吸道标本和尿标本中产生的ESBLs大肠埃希菌对17种抗菌药物的耐药性差异无显著性；尿路标本中的ESBLs的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌除对头孢哌酮／舒巴坦（85．0％，65．2％）和哌拉西林／他唑巴坦（66．6%，29．4%）耐药性不同外，对其他抗菌药物的耐药率差别不大。结论肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的ESBLs发生率逐年增加，这些产ESBLs菌分布在不同病区的各种标本中，临床及时了解它们耐药特点和变化趋势对合理的应用抗菌药物十分重要。

头孢哌酮/舒巴坦与2种抗菌药物联用对多药耐药鲍氏不动杆菌药敏试验研究

目的评价头孢哌酮/舒巴坦与米诺环素、头孢哌酮/舒巴坦与左氧氟沙星联合用药,对110株临床分离的多药耐药鲍氏不动杆菌的体外抗菌效应。方法采用棋盘法设计,琼脂稀释法测定不同浓度组合的抗菌药物对110株临床分离的多药耐药鲍氏不动杆菌最低抑菌浓度,并计算部分抑菌浓度(FIC)指数判定联合效应。结果头孢哌酮/舒巴坦与米诺环素联用后,其MIC50显著降低,FIC指数分布:FIC≤0.5占53%,0.5<FIC≤1占39%,1<FIC≤2占8%,FIC>2为0;头孢哌酮/舒巴坦与左氧氟沙星联用后,其MIC50显著降低,FIC指数分布:FIC≤0.5占59%,0.5<FIC≤1占37%,1<FIC≤2占4%,FIC>2为0。结论头孢哌酮/舒巴坦无论是与米诺环素还是与左氧氟沙星联用,对多药耐药的鲍氏不动杆菌表现为协同作用和相加作用,并以协同作用为主,无关作用较少,无拮抗作用。

丙型肝炎病毒包膜糖蛋白的研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白基因是HCV基因组中变异最大的部位,包膜蛋白的糖基化作用与其分子量大小及抗原性强弱有关,HCV包膜糖蛋白分子上可能具有中和表位,但其抗原性易变异的特点给疫苗研制带来一定困难。

近10年血培养分析及血中719株常见细菌的耐药性

目的了解我院10年来血培养的送检、检出以及血中常见细菌的药敏情况,指导临床对菌血症的治疗。方法利用WHONET5.2和EXCEL软件分析细菌分布、种类变化及纸片扩散药敏数据。结果我院自1994年1月～2003年11月30日共送检血液培养标本15262份,平均分离阳性率为8.1%,其中细菌1130株占91.0%;真菌9.0%;在凝固酶阴性葡萄球菌和金黄色葡萄球菌中MRSCN和MRSA分别为71.7%和36.4%,目前未发现对万古霉素耐药的葡萄球菌、粪肠球菌和屎肠球菌,但有8.7%、1.7%的屎肠球菌、粪肠球菌处于中介;血中产ESBLs的克雷伯菌和大肠埃希菌分别为15%和24.8%,在阴沟肠杆菌、克雷伯菌和大肠埃希菌中,克雷伯菌对环丙沙星的敏感性最高75%;铜绿假单胞菌和不动杆菌对阿米卡星、环丙沙星和头孢他啶耐药性较低,分别为2.0%、19.2%;9.8%、19.2%和11.8%、23.1%;有17.6%的铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药,目前没有对亚胺培南耐药的阴沟肠杆菌、克雷伯菌、大肠埃希菌和不动杆菌。结论目前我院菌血症仍以革兰阴性菌为主,引起菌血症的种类不同耐药性差异较大,及时了解血培养结果对临床有针对性地抗菌治疗提供依据,降低病死率,提高治愈率。

4种不同方法检测梅毒螺旋体抗体的比较

目的 对 4种不同的梅毒螺旋体抗体检测方法进行比较 ,筛选高敏感性和特异性诊断方法和试剂。方法 采用快速血浆反应素试验 (RPR) ;梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验 (TPPA) ;梅毒螺旋体特异性抗体酶联免疫吸附试验 (TP- EL ISA) ;梅毒螺旋体特异性抗体乳胶凝集试验 (TPL A) 4种方法对 76份可疑梅毒抗体阳性标本进行检测。结果 RPR有一定假阳性和假阴性 ;TPPA敏感性稍差 ;TP- EL ISA敏感性最高。结论 TP- EL ISA敏感性高 ,适合大批献血员筛查 ;TPL A与其他方法的检测结果符合率最高 ,且操作简便 。

铜绿假单胞菌MexAB-OprM主动外排表型筛选和外排基因检测

目的研究解放军总医院临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌的主动外排系统,为指导临床合理选择抗生素提供依据。方法采用外排泵抑制剂(苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺)与喹诺酮类抗生素,以微量肉汤稀释法测定加与不加外排泵抑制剂时环丙沙星与左氧氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)值,并计算MIC值的变化,根据加与不加外排泵抑制剂MIC值降低3个稀释度及以上筛选主动外排表型阳性菌株;PCR扩增外排表型阳性菌的耐药基因oprM、mexB和mexR,并对3株菌进行mexR基因测序分析;RT-PCR检测oprM基因的mRNA水平,分析耐药基因的表达情况。结果苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺能极大的降低左氧氟沙星和环丙沙星的MIC值,70株多重耐药铜绿假单胞菌中46株表型阳性(65.7%),其中PCR检测oprM、mexB和mexR基因同时阳性菌株42株(91.3%),仅oprM基因阳性2株(4.3%),oprM、mexB和mexR基因均阴性2株(4.3%)。RT-PCR产物测定A值(A260/A280)与PAO1对照阳性菌株13株,以PAO1的oprM/rpoD的A值为对照阳性菌株4株,同时满足A值(A260/A280)和oprM/rpoD比值均高于PAO1的菌株3株。测序结果与GenBank中已知的mexR基因比对,其中2株同源性为100%,1株第434位核苷酸插入2bp(AT)。结论中国人民解放军总医院多重耐药铜绿假单胞菌大多存在主动外排的耐药机制,其耐药与外排泵过度表达相关。