猪舍空气细颗粒物对猪肺泡巨噬细胞精氨酸代谢和糖酵解的影响

[目的]本试验旨在探究猪舍空气细颗粒物(PM_(2.5))对猪肺泡巨噬细胞极化相关的精氨酸代谢和糖酵解以及TLR4-NF-κB信号通路的影响。[方法]选用猪肺泡巨噬细胞系(3D4/21)作为细胞模型,设置不同质量浓度(0、25、50和100μg·mL^(-1))的PM2.5和不同处理时间(4、8、12、16、20和24 h)处理细胞,收集细胞测定精氨酸代谢、糖酵解以及TLR4-NF-κB信号通路相关指标。[结果]PM_(2.5)处理细胞12 h后,细胞上清液中一氧化氮(NO)浓度随PM2.5处理浓度的升高而逐渐上升,当PM_(2.5)浓度大于50μg·mL^(-1)时,NO浓度极显著升高(P<0.01)。以50μg·mL^(-1)PM_(2.5)处理细胞培养不同时间,发现PM_(2.5)处理16 h内细胞上清液中NO浓度逐渐升高;随着细胞处理时间的延长,PM_(2.5)对细胞的影响逐渐减轻。此外,不同浓度PM_(2.5)处理12 h,细胞内精氨酸酶活性降低,其中,50μg·mL^(-1)PM_(2.5)处理组与对照组相比差异极显著(P<0.01)。同时,随着PM_(2.5)浓度的升高,细胞内乳酸生成量/葡萄糖消耗量(L/G)值升高(P<0.05),标志着细胞内葡萄糖向乳酸转化的比率增高,糖酵解相关基因GLUT-1和GAPDH mRNA表达水平显著提高(P<0.05);100μg·mL^(-1)PM_(2.5)处理显著提高了细胞内IL-1β mRNA表达水平(P<0.01);50μg·mL^(-1)PM_(2.5)处理后M2巨噬细胞标志物CD206 mRNA表达水平显著降低(P<0.05),100μg·mL^(-1)PM_(2.5)显著增加细胞TLR4和MyD88 mRNA表达水平(P<0.05)和p-p65蛋白表达水平(P<0.05),激活TLR4-NF-κB信号通路。[结论]猪舍空气PM_(2.5)能够诱导猪肺泡巨噬细胞发生炎症反应,促进细胞内精氨酸和葡萄糖代谢向M1表型特征的代谢转换。

复合酸化剂对海兰褐蛋雏鸡生长、免疫性能和血清抗氧化能力的影响

试验旨在研究日粮添加复合酸化剂对生长期海兰褐蛋雏鸡生长性能、免疫性能和血清中抗氧化指标的影响。试验选取3周龄海兰褐蛋雏鸡120只,随机分为2组,每组6个重复,每个重复10只鸡。对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂添加0.2%复合酸化剂的基础日粮,试验期为35 d。结果:生长期海兰褐蛋雏鸡日粮中添加复合酸化剂可以改善饲料利用率,但对雏鸡的平均日增重无显著影响(P>0.05);添加复合酸化剂可以显著降低生长前期蛋雏鸡血清中丙二醛(MDA)水平,显著提高血清中超氧化物歧化酶(SOD)(P<0.01)和铜蓝蛋白(CP)(P<0.05)含量;能够显著降低生长早期蛋雏鸡血清中IgM的含量,显著提高生长后期血清中IgG的含量(P<0.01)。提示:在生长期蛋雏鸡饲料中添加复合酸化剂,对改善雏鸡的免疫性能及血液中抗氧化指标具有一定的促进作用。

虾青素对氧化应激小鼠肝原代细胞的保护作用

试验旨在研究虾青素对过氧化氢(H_2O_2)诱导小鼠肝原代细胞产生氧化应激的影响。采用改进的原位二步灌流法提取ICR小鼠肝原代细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率、活细胞率的变化,生物化学法测定细胞中丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的活性变化;荧光定量PCR测定CAT、γ-GCS催化亚基(GCLC)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)mRNA相对表达量的变化,ELISA法检测细胞中Keap1、Nrf2蛋白的变化。结果表明:虾青素能够降低H_2O_2诱导小鼠肝原代细胞产生氧化应激的细胞凋亡率、MDA含量、Nrf2和Keap1 mRNA相对表达量(P<0.05),提升活细胞率、CAT和γ-GCS活性(P<0.05)、CAT和GCLC的mRNA相对表达量(P<0.05),抑制Nrf2蛋白及Keap1蛋白的表达(P<0.05)。虾青素能够促进相关抗氧化酶的活性,抑制Nrf2蛋白及Keap1蛋白表达进而抑制Keap1-Nrf2-ARE信号通路的激活。

猪舍细颗粒物促进猪原代肺泡巨噬细胞向M1极化

旨在研究猪舍细颗粒物(PM_(2.5))对猪原代肺泡巨噬细胞(PAMs)精氨酸代谢、炎症因子表达和极化标志物表达的影响。利用支气管肺泡灌洗方法,体外分离PAMs,细胞纯化后,利用Diff-quik染色和F4/80标记鉴定PAMs,并测定细胞活力。将纯化培养的PAMs分为对照组和PM_(2.5)处理组(50μg·mL^(-1)),继续培养4、8和12 h,测定细胞活力,收集细胞上清测定一氧化氮(NO)的含量,裂解PAMs测定精氨酸酶的活性,并采用RT-PCR检测PAMs炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-10以及M1、M2型巨噬细胞标志物CD 80和CD 206的表达水平。结果显示,通过支气管肺泡灌洗方法成功分离培养了PAMs,并发现PAMs的细胞活力随着培养时间的延长逐渐降低(P<0.05)。PM_(2.5)处理PAMs,显著提高了细胞上清中NO含量(P<0.05),显著降低了细胞精氨酸酶的活性(P<0.01),并显著提高了细胞炎症因子IL-1β和TNF-αmRNA表达水平(P<0.01),降低了IL-10 mRNA表达水平(P<0.05)。另外,PM_(2.5)处理PAMs早期,显著提高了CD 80 mRNA表达水平(P<0.01),在后期显著降低CD 206 mRNA表达水平(P<0.01)。综上表明,猪舍PM_(2.5)促进了PAMs向M1表型极化,促进了炎症的发展。

饲料加工工艺和抗氧化剂添加对蛋雏鸡生长性能及抗氧化指标的影响

试验旨在研究饲料加工方法和日粮中添加乙氧喹抗氧化剂对海兰褐蛋雏鸡生长性能及抗氧化指标的影响。试验将240只21日龄海兰褐蛋鸡随机分为四组,每组6个重复,每个重复10只。1组饲喂基础日粮颗粒料,2组饲喂基础日粮粉料,3组在1组基础上添加抗氧化剂乙氧喹,4组在2组基础上添加抗氧化剂乙氧喹。预试期为1周,正试期为4周。结果表明:1组与2组日增重、日采食量、饲料转化比差异均不显著(P>0.05),3组、4组血清中丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.01),3组相对于1组饲喂5周MDA降低了31.88%。由此可见,日粮中添加乙氧喹能提高蛋雏鸡的抗氧化能力,采用二次制粒工艺,对改善蛋雏鸡生长性能也有良好的效果。

虾青素缓解脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤

【目的】研究虾青素(AST)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肝损伤的影响。【方法】健康雄性ICR小鼠40只随机分为4组,包括对照组、AST组、LPS组和虾青素预保护组(AST+LPS组)。记录小鼠体质量并计算肝脏系数;通过ELISA法检测血清中髓过氧化物酶(MPO)含量;生物化学法测定肝组织中丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性;荧光定量PCR法检测抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)的mRNA相对表达量;通过HE染色观察各组肝脏细胞形态和肝损伤程度。【结果】各组小鼠初始体质量均为18 g,末次称量与初始体质量相比增加9～11 g,但各组间体质量增加无显著性差异(P>0.05)。与LPS组相比,AST+LPS组小鼠肝脏系数(0.054)、血清MPO质量浓度(10.20 ng·m L^(–1))和肝组织中MDA质量摩尔浓度(2.83μmol·g^(–1))显著降低(P<0.05),抗氧化酶SOD(512.14 U·mg^(–1))、GSH-Px(848.91 U·mg^(–1))和CAT(61.53 U·mg^(–1))活性显著提高(P<0.05),抗氧化酶mRNA的相对表达量均显著升高(P<0.05),同时肝脏损伤程度低,肝细胞形态完整,排列均匀。【结论】虾青素可保护小鼠肝细胞形态,提高肝脏抗氧化水平,调节肝组织中抗氧化酶mRNA的表达,从而缓解LPS引起的肝脏氧化应激,减轻急性肝损伤。

T-2毒素激活活性氧/核转录因子-κB信号通路诱导猪空肠上皮细胞发生炎性反应

本试验以猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)为模型细胞,探讨T-2毒素诱导IPEC-J2炎性反应的影响及相关作用机制。通过四甲基偶氮唑盐(MTT)方法测定细胞活力,选择适宜的T-2毒素和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)浓度。试验分为4个组,分别为对照组、NAC组(4.0 mmol/L NAC)、T-2组(4.0 ng/mL T-2毒素)和T-2+NAC组(4.0 ng/mL T-2毒素+4.0 mmol/L NAC),处理12 h后测定各组IPEC-J2中丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性、活性氧(ROS)水平、细胞炎症相关基因和核转录因子-κB(NF-κB)的相对表达量。结果表明:1)与对照组相比,T-2组IPEC-J2中CAT、T-SOD活性极显著降低(P<0.01),IPEC-J2中MDA含量和ROS水平极显著升高(P<0.01)。与T-2组相比,T-2+NAC组IPEC-J2中CAT和T-SOD活性极显著升高(P<0.01),IPEC-J2中MDA含量和ROS水平显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01)。2)与对照组相比,T-2组IPEC-J2中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(P<0.05)、白细胞介素-6(IL-6)(P<0.01)、白细胞介素-10(IL-10)(P>0.05)的mRNA相对表达量升高。3)与对照组相比,T-2组IPEC-J2中NF-κB蛋白相对表达量极显著升高(P<0.01)。与T-2组相比,T-2+NAC组IPEC-J2中NF-κB蛋白相对表达量极显著降低(P<0.01)。由此可见,T-2毒素通过诱导IPEC-J2产生过量的ROS,促进炎症相关基因及NF-κB蛋白的表达,导致IPEC-J2发生炎性反应。