羊口疮病毒ORF019基因的克隆及表达

【目的】克隆、分析羊口疮病毒(ORFV)的ORF019基因,进而表达、纯化和鉴定重组表达产物.【方法】根据GenBank登录的ORFV OV-SA00株(AY386264)E2L基因序列设计1对引物,以提取的ORFV/QH02/2010株基因组DNA为模板,通过PCR获得该毒株的ORF019基因,将该基因连接至原核表达载体pET-32a(+)上,获得重组质粒pET-32a-ORF019,并对其测序,测序结果与副痘病毒属及其脊椎动物痘病毒亚科代表毒株的E2L蛋白进行一致性分析;并转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导获得重组融合蛋白,用SDS-PAGE和Western-blot对表达的目的蛋白进行分析.【结果】成功获得重组质粒pET-32a-ORF019,读码框正确;生物信息学分析发现,ORF019基因在副痘病毒属各成员间高度保守,也在脊椎动物痘病毒亚科痘病毒的遗传进化过程中保留了相对稳定的氨基酸残基;获得了约100 ku的融合蛋白表达产物,并以包涵体的形式存在于宿主菌.【结论】成功对ORFV019基因进行系统的遗传演化分析,并利用原核表达系统获得了重组表达产物.

近交合作猪血液生理生化指标的测定及分析

动物机体健康状态及免疫功能与其血液生理生化指标紧密相关,同时该指标也可反映不同物种的独特生物学特性。近交系动物具有遗传稳定、个体差异小的特点而被广泛应用于科学研究中。为了探究近交合作猪血液生理和生化的特性,采用兽用全自动血液细胞分析仪和全自动生化分析仪,对58头近交合作猪和34头原产地合作猪血液中12项生理指标和16项生化指标进行了测定。结果表明,近交合作猪相对于原产地合作猪而言,其10项生理指标和8项生化指标均存在显著差异,说明近交合作猪具有独特的生理和生化特性,这为其实验动物化培育提供了科学依据。

Ⅳ型胶原蛋白在成年牦牛生精小管的定位及分布特征

采用H．E和Masson特殊染色以及免疫组织化学法结合形态计量学统计分析，对成年牦牛（5～7岁）生精小管中的Ⅳ型胶原蛋白进行定位，研究其分布特征．结果表明：睾丸生精上皮结构清晰，有4～8层细胞，胶原纤维分布于生精小管固有膜和间质血管壁上；免疫组织化学染色观察Ⅳ型胶原蛋白在sertoli细胞、各级生精细胞及精子上呈强阳性表达，血管内皮细胞有阳性表达，生精小管基膜及管周肌样细胞为弱阳性表达，而leydig细胞几乎元表达；Ⅳ型胶原蛋白的相对表达量在sertoli细胞及各级生精细胞显著高于在leydig细胞和管周肌样细胞中（P〈0．05），但在固有膜和管周肌样细胞之间的相对表达量无显著差异（P〉0．01）．IV型胶原蛋白在成年牦牛睾丸中的分布特征与胶原纤维分布相一致，sertoli细胞和管周肌样细胞在合成及分泌Ⅳ型胶原蛋白中发挥作用．