氟西汀调控CUMS抑郁大鼠海马突触重塑

目的:探究氟西汀(fluoxetine)对慢性不可预见性温和刺激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)抑郁大鼠海马突触重塑的m TOR和细胞自噬信号调控作用。方法:60只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分成正常对照(control)组、CUMS组和氟西汀组。采用CUMS结合孤养法构建CUMS抑郁模型,期间给予氟西汀(20 mg·kg-1·d-1)灌胃治疗。通过体重变化、糖水测试水平及行为学实验验证模型建立,采用RT-PCR和Western blotting等生化方法测定突触重塑相关蛋白胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、突触泡蛋白(synaptophysin,SYP),细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、cleaved caspase-3,m TOR信号通路相关蛋白m TOR、4EBP1,自噬相关蛋白beclin 1、LC3 mRNA及蛋白表达水平的变化。结果:与control组相比,CUMS大鼠的体重、糖水摄取量、旷场实验总路程和中间停留时间均下降,差异具有统计学显著性。RT-PCR和Western blotting实验结果显示,与control组相比,CUMS组SYP和GFAP的mRNA和蛋白水平显著下调,Bcl-2表达下调,cleaved caspases-3上调,m TOR及下游靶分子4EBP1磷酸化水平下调,细胞自噬关键基因beclin1和LC3在mRNA和蛋白水平显著上调。氟西汀可以减缓以上结果中的上调或下调趋势,差异具有统计学显著性。结论:氟西汀可能通过下调细胞凋亡和自噬信号通路以及上调m TOR信号通路调节海马突触重塑并缓解抑郁症状。

尺动脉穿支皮瓣的应用解剖学研究

目的 为尺动脉穿支皮瓣的临床应用提供解剖学依据。方法 观察10具动脉铸型标本。取新鲜成人尸体25具（50侧），行一次性全身动脉造影。通过直接层次解剖，应用图像分析和测量系统Scion image，对前臂内侧区穿支进行定性、定量分析；螺旋CT扫描数据以Dicom 格式输入Mimics 图像工作站，对尺动脉穿支皮瓣进行三维重建。结果 该区共有外径≥0.5mm 的穿支（7.0±2.0）支，外径（0.6± 0.2） mm，蒂长（2.7±1.4）cm，单穿支的供血面积（26.0±7.0）cm2。尺动脉除在远端发出粗大的尺动脉腕上皮支，在肱骨内上髁以下8～10cm处也有较粗、恒定的穿支，尺动脉多个穿支相互吻合形成前臂内侧血管链。结论 可以尺动脉近端穿支为基础设计游离皮瓣，以内侧血管链为基础设计长而窄的增压穿支皮瓣也是切实可行的。

五年制医学本科开展局部解剖与外科手术学综合性实验的实践

为深化医学教学改革，积极探索实用性医学人才的培养途径，笔者采用局部解剖学与临床外科手术学相结合的方法，将临床外科手术与人体局部解剖学实验内容加以整合，设计综合性专业技能训练项目，并在临床医学专业第8个学期临床实习前开展实训活动，从而构建局部解剖学与外科手术学的综合性实验教学体系。

药流绒毛中波形蛋白的免疫荧光和免疫电镜研究

目的 :观察米非司酮对人孕早期绒毛组织中波形蛋白 (Vimentin)表达的影响。方法 :应用间接免疫荧光和胶体金标记免疫电镜技术 ,检测正常早孕人流电吸组和米非司酮组绒毛组织中波形蛋白的表达。结果 :对照组绒毛中轴间质细胞、血管内皮细胞波形蛋白阳性表达 ,药流组荧光着色细胞则明显减少 ,表达强度显著降低 ;对照组绒毛间质细胞波形蛋白中间丝沿细胞的长轴呈良好的丝状排列 ,整齐、致密 ,胶体金颗粒成簇或散在分布于细胞核与细胞质之间除细胞器以外的细胞质所有部位 ,胞核呈阴性 ;药流组间质细胞中间丝明显辣少 ,出现断裂、排列紊乱 ,金颗粒分布明显稀疏。结论 :米非司酮显著降低绒毛中波形蛋白表达水平并影响绒毛间质细胞的细胞骨架成分。

基于SPOC和病例引导的翻转课堂模式在系统解剖学理论教学中的应用

翻转课堂(flipped classroom)是一种以学生为中心的新型教学模式,即学生课前通过自主学习教学资源完成知识传授,课堂上通过参与汇报交流、讨论等互动形式完成知识的内化与吸收,课后学生自主规划学习内容、学习节奏和呈现知识的方式。而SPOC(small private online course)是针对在校学生而设置的在线课程,近年来SPOC与翻转课堂相结合的教学模式也在医学课程教学中得到应用,并取得一定成效[1-3]。系统解剖学是临床医学生接触的第一门专业重要核心课程,在医学教学中占有十分重要的地位。

5-羟色胺系统在肠易激综合征内脏感觉过敏机制中的作用研究

目的:研究检测5-羟色胺(5-HT)系统在脑-肠轴上的表达,探索肠易激综合征内脏感觉过敏的神经机制。方法:将新生期SD雄性大鼠随机分为两组,母婴分离组(实验组),在出生后第2～21天,每天将新生大鼠与哺乳期母鼠分离3 h;对照组在出生后第2～21天,不给予任何处理。成年后(出生后60 d)进行结直肠球囊扩张(Colorectal distcnsion,CRD),用免疫组化方法检测脊髓背角、脑干中缝背核5-HT神经元的表达和分布。结果:母婴分离组CRD后中缝背核5-HT免疫反应阳性细胞的数量为(40.67±4.73)个,脊髓背角5-HT免疫反应阳性细胞的数量为(20.67±2.08)个,均较对照组显著增加,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:新生期母婴分离引起大鼠5-HT系统在中枢改变,提示早期生活事件所致5-HT系统的异常可能在肠易激综合征内脏感觉过敏发生机制中起重要作用。

加强学科建设 确保本科教学质量

如何抓好学科建设 ,为医本科解剖学和组织胚胎学的教学打好基础 ,是刚升格医学院校所面临的实际问题。嘉兴学院医学院在更新教学思想观念、加强师资队伍建设、深化教学改革和改善教学条件等方面进行了探索和实践。

c-fos基因在内脏高敏感大鼠中的表达

研究检测c-fos在在肠易激综合征中的表达,探索肠易激综合征内脏感觉过敏的神经机制。用经新生期母婴分离方法建立内脏感觉过敏大鼠模型,成年后(出生后60 d)给予结直肠球囊扩张(colorectal distension,CRD),用免疫组化方法检测脑干中缝背核、脊髓腰骶节段背角c-fos蛋白的表达量。结果表明:母婴分离组CRD后中缝背核和脊髓背角c-fos疫反应阳性细胞的数量均较对照组显著增加,由此反映出早期生活事件所致脑-肠轴表达异常可能在肠易激综合征内脏感觉过敏发生机制中起重要作用。

腹膜腔内物质吸收的形态学研究

目的研究膈中心腱腹膜口与淋巴陷窝的结构与分布,揭示淋巴管的分布规律。方法30只出生后1～2d的仔兔,作膈间皮细胞硝酸银染色,膈淋巴管墨汁标记,光镜及电镜检查。结果间皮细胞铺片显示陷窝区与非陷窝区细胞的不同形态。膈肌性部腹膜口数目多于腱性部。膈淋巴管排列成二个丛:位于膈腹膜淋巴陷窝区与膈胸膜的集合淋巴管。在Epon包埋的半薄切片上,观察到淋巴陷窝的结构为间皮、间皮下组织和淋巴内皮3种成分。结论与腹膜吸收有关的结构为膈腹膜口、淋巴陷窝和淋巴管。本文揭示出未见报道过的膈腱性部淋巴陷窝的结构与膈淋巴管的分布。

青藤碱调控CUMS抑郁大鼠突触可塑性及其对Notch和mTOR信号通路的影响

目的:探究青藤碱(Sin)对慢性不可预见性温和应激(CUMS)所致抑郁大鼠症状的影响及可能的机制。方法:120只雄性健康SD大鼠随机分为对照(Ctrl)组、CUMS组、氟西汀(Fluo)组和Sin组(n=30)。建立CUMS抑郁大鼠模型,并分别给予Fluo(20 mg·kg^(−1)·d^(−1))或Sin(30 mg·kg^(−1)·d^(−1))灌胃治疗。通过检测体重、糖水实验及行为学检测抑郁症状;高尔基染色和苏木素-伊红染色分别检测树突棘密度和观察海马结构;qPCR和Western blot检测突触重塑相关蛋白脑源性神经营养因子(BDNF),Notch信号通路相关蛋白Notch1、Hes1和Jagged1,细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和cleaved caspase-3(C-C3),以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白磷酸化mTOR(pmTOR)及磷酸化真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(p-4EBP1)的变化;ELISA测定白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的变化。结果:与Ctrl组相比,CUMS组大鼠体重、糖水偏好、旷场实验总距离和中央不动时间显著下降,强迫游泳不动时间显著增加(P<0.05)。CUMS组大鼠海马神经细胞排列紊乱,细胞间隙增大,多数细胞变性萎缩,树突棘密度减少,BDNF表达显著下调,Notch信号通路中Notch1、Hes1和Jagged1表达显著下调,细胞凋亡信号通路中Bcl-2表达下调,C-C3表达显著上调,p-mTOR和p-4EBP1下调,炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。Fluo和Sin均可逆转上述结果,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:青藤碱能够缓解CUMS大鼠抑郁症状并改善突触可塑性,可能是通过激活Notch和mTOR信号通路,调节细胞凋亡和炎症反应来实现的。

虚拟实验室与组织胚胎学实验教学

传统的组织学与胚胎学实验教学方式存在很多不足,虚拟实验室可以使教学活动的时间和空间得到最大限度的扩大,虚拟实验室在组织胚胎学实验教学中可发挥很多优势:虚拟实验室可有效衔接对相关知识,可以模拟不同知识情景,更有效的结合基础与临床。通过结合传统实验室和虚拟实验室,将会提高组织胚胎学实验教学的效果。

LC3蛋白在小鼠卵泡颗粒细胞中的表达及定位研究

目的:探讨自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)在小鼠卵泡颗粒细胞中的表达及定位。方法:昆明小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)前及注射后的第1、2、3、4、5天,采用免疫组织化学染色方法检测自噬相关蛋白LC3和凋亡相关蛋白cleaved caspase-3在卵泡中表达及共定位情况;促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)处理颗粒细胞后,Western blot检测LC3和cleaved caspase-3在颗粒细胞中的水平,免疫荧光方法对LC3在颗粒细胞中的亚细胞定位进行研究。结果:在小鼠卵泡发育的各个阶段,LC3蛋白主要在颗粒细胞中表达;免疫荧光显示在闭锁卵泡的颗粒细胞中cleaved caspase-3和LC3的蛋白水平较高;在PMSG腹腔注射后第1、2天,颗粒细胞cleaved caspase-3和LC3-II的蛋白水平减少(P<0.05);在PMSG腹腔注射后第3、4、5天,颗粒细胞的cleaved caspase-3和LC3-II蛋白水平依次增加;LC3-II和cleaved caspase-3的蛋白水平具有相关性(r^2=0.8299,P<0.05)。FSH处理后,LC3-II定位于颗粒细胞胞浆并呈点状分布。结论:LC3主要在卵泡颗粒细胞中表达,其表达具有细胞特异性和区域特异性,提示自噬在卵泡发育过程中主要在颗粒细胞中发生。卵巢颗粒细胞自噬和凋亡具有相关性,均呈促性腺激素依赖性。

五年制医学本科开展组织学与胚胎学PBL教学的实践

1PBL教学模式概述 PBL（problem-based learning）是以问题为基础的教学方式，其核心是采用基础学科和临床实践结合的教学方法，通过以问题为基础的学习和训练，使学生树立整体的医学观。PBL以学生为主体、具有综合性、系统性及更大灵活性的课程教学模式。

关于建立中国特色PBL教学模式的思考和探索

如何促使学生具备主动学习和思维的能力,形成临床意识,是医学教育的当务之急。针对学生长时间受应试型教育而形成的被动学习和思维以及国内医学教学的现实情况,采取大宽度、低强度、接力式、以点带面、重点刺激、不断强化的方式,在各门基础课程中结合传统教学全面开展"基于问题的学习"(PBL)教学,确定传统教学与PBL的适当比例,是培养学生的主动学习和思维较为有效、值得继续探索的途径。

IL-24基因重组腺病毒载体转染的树突状细胞促进宫颈癌CaSki细胞凋亡

目的:探讨白细胞介素24(interleukin-24,IL-24)基因重组腺病毒载体转染的树突状细胞(dendritic cells,DCs)是否在体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T-lymphocytes,CTLs)对宫颈癌CaSki细胞的杀伤效应。方法:分离培养小鼠未成熟DCs,将已成功构建的带有IL-24基因的重组腺病毒感染体外培养的小鼠未成熟DCs,提取CaSki细胞裂解物负载DCs,制备DC疫苗,Western blotting检测IL-24蛋白的表达;PE-Annexin V和Western blotting检测细胞凋亡及cleaved caspase-3表达;克隆形成实验检测克隆形成能力;裸鼠荷瘤模型体内研究带有IL-24基因的重组腺病毒载体转染DCs在体外诱导的CTLs对宫颈癌CaSki细胞的杀伤效应。结果:Western blotting检测IL-24蛋白高表达;DCs疫苗诱导产生的CTLs后与CaSki细胞共培养,对CaSki细胞生长具有明显的抑制作用,DCs疫苗诱导产生的CTLs促进CaSki细胞凋亡,增加cleaved caspased-3蛋白表达,克隆形成实验检测该疫苗具有抑制CaSki细胞形成克隆的能力。裸鼠的成瘤实验表明,带有IL-24基因的重组腺病毒载体转染DCs可以抑制体内肿瘤的形成,促进肿瘤细胞凋亡。结论:IL-24基因重组腺病毒感染DCs制备的DCs疫苗可诱导CTLs,从而抑制宫颈癌CaSki细胞增殖,并促进其凋亡。

K14和CMV启动子驱动裸鼠体内HPV16 E6/E7基因表达的差异

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一种无包膜的环状闭合双链DNA病毒,具有严格的嗜人组织的特性.为探讨不同启动子驱动HPVE6/E7癌蛋白在裸鼠体内不同组织的表达效率,构建了带有角蛋白(K14)启动子和带有巨细胞病毒(CMV)启动子的E6/E7腺病毒载体(pAd-K14-E6/E7和pAd-CMV-E6/E7),pAd-K14-E6/E7和pAd-CMV-E6/E7、以及作为对照的重组腺病毒空载体pAdtrack-K14和pAd-CMV同源重组后,分别在293细胞中包装,收集重组病毒Ad-K14-E6/E7、Ad-CMV-E6/E7、Adtrack-K14和Ad-CMV,通过尾缘静脉注射到随机分组的裸鼠体内,并每d向裸鼠腹腔注射0.05 mg雌激素.采用RT-PCR和Western免疫印迹检测不同实验组E6/E7 mRNA和蛋白表达水平,免疫组化法检测P53和Bcl-2蛋白表达.结果显示,注射病毒Ad-K14-E6/E7(实验组1)裸鼠子宫体中E6/E7 mRNA、E6蛋白质、P53和Bcl-2蛋白高表达,而其它组织中低表达;注射病毒Ad-CMV-E6/E7(实验组2)裸鼠各组织E6/E7 mRNA、E6蛋白质、P53和Bcl-2蛋白均低表达.研究表明,在裸鼠体内角蛋白K14启动子可以调控E6/E7在子宫体中表达,CMV启动子未能诱导E6/E7在子宫体中表达.

shRNA介导的hWAPL表达沉默对人宫颈癌CaSki细胞增殖与凋亡的影响

目的:为探讨人半翼(hWAPL)蛋白在细胞增殖与凋亡中的作用及其作为分子靶点用于肿瘤治疗的潜在价值,本研究用RNA干扰技术抑制hWAPL基因的表达,并观察了其对人宫颈癌细胞CaSki细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法:实时荧光定量PCR和Western blotting检测hWAPL shRNA的干扰效率;MTT检测细胞增殖;Annexin V-PE和Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;蛋白质印迹分析凋亡蛋白cleaved caspase-3和细胞周期抑制蛋白p21、p27的表达。裸鼠荷瘤模型体内研究hWAPL沉默对CaSki细胞增殖的影响。结果:实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果表明,筛选到的hWAPL shRNA能有效抑制内源hWAPL的表达。MTT实验表明shRNA介导的hWAPL表达沉默显著抑制CaSki细胞的增殖。Annexin V-PE分析结果表明,hWAPL沉默增加了凋亡细胞数目。细胞核经Hoechst 33258染色出现浓染致密的固缩形态和颗粒状荧光;蛋白质印迹结果显示cleaved caspase-3、p21和p27表达增加;裸鼠成瘤实验表明,hWAPL沉默的肿瘤体积减小,增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达增加。结论:hWAPL沉默抑制CaSki细胞增殖,促进细胞凋亡,是一个潜在的肿瘤治疗新靶点。

Daxx抑制K562细胞向巨核细胞分化

目的:观察过表达死亡结构域相关蛋白(Daxx)对K562细胞活力和向巨核细胞分化的影响。方法:建立稳定过表达Daxx的K562细胞,荧光显微镜观察、实时荧光定量PCR和Western blot检测Daxx的过表达效果,CCK-8法检测过表达后细胞活力的变化;佛波酯(PMA)诱导K562细胞向巨核细胞系分化,Western blot检测在K562细胞向巨核细胞分化过程中Daxx和p-ERK的表达变化,流式细胞术检测CD41和CD61的表达变化;PMA处理过表达Daxx的K562细胞,NBT还原实验检测细胞分化情况,流式细胞术检测过表达Daxx后CD41和CD61的表达变化,Western blot检测p-ERK的蛋白水平。结果:建立了稳定的过表达Daxx的K562细胞,过表达Daxx抑制K562细胞的活力。PMA诱导K562细胞向巨核细胞分化,CD41和CD61表达水平增高,同时p-ERK的蛋白水平升高,Daxx表达水平下降。过表达Daxx可以抑制K562细胞向巨核细胞分化,CD41和CD61表达降低,同时p-ERK的蛋白水平降低。结论:过表达Daxx可以抑制K562细胞生长及向巨核细胞分化,同时抑制ERK的磷酸化。