干扰素调节因子3在慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞中的表达及意义

目的:探讨慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞中干扰素调节因子3(interferon regulate factor 3,IRF3)在HBV诱导的抗病毒免疫反应中的表达及作用.方法:选取HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者28例,健康对照者27例,用免疫磁珠细胞分选(MACS)法获得纯化的CD14+单核细胞,RPMI 1640培养基培养,用hGM-CSF、hIL-4诱导单核细胞成为未成熟的MoDC,加入PolyI∶C刺激,获得成熟的MoDC.PolyI∶C刺激后0、12、24、48h收集细胞培养的上清液及细胞,Real-Time PCR法检测IRF3和Toll样受体3(TLR3)的表达,ELISA方法检测MoDC细胞上清液中IFN-β的浓度变化.结果:12h健康对照组MoDC中IRF3 mRNA表达水平明显升高,并达高峰与0h相比差异显著(P<0.05),24、48h表达逐渐下降.而患者组MoDC中IRF3 mRNA的表达上升不明显.24h健康对照组MoDC中TLR3表达上调显著(86.27%±14.74%vs70.78%±11.16%,P<0.05),48hTLR3表达与0h相比无显著性差异,而患者组0、12、24hTLR3表达上调不明显,48hTLR3表达上调显著(85.46%±6.87%vs69.17%±20.43%,P<0.05).健康对照组IFN-β mRNA表达及细胞上清液中的浓度与0h相比显著升高(P<0.05),较患者组0、12、24和48hIFN-β的表达显著升高(P<0.05).结论:HBV慢性感染患者在感染病毒后不能激活IRF3从而导致宿主不能分泌足够的IFN-β以清除病毒,这可能是HBV慢性持续感染的原因之一.

e抗原阳性慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞干扰素β的表达

目的探讨慢性乙型肝炎患者树突状细胞干扰素β(IFN-β)表达与乙型肝炎病毒(HBV)感染后宿主免疫清除障碍的关系。方法选择e抗原阳性慢性乙型肝炎患者52例,健康对照48例,用免疫磁珠细胞分选乙型肝炎e抗原(HBeAg)法从外周血获得纯化的CD14+单核细胞,并用hGM-CSF、hIL-4诱导单核细胞成为未成熟的髓样树突状细胞(mDC),加入polyI:C(25μg/ml)刺激后获得成熟的mDC,在刺激后0h、12h、24h、48h用流式细胞仪检测细胞表面分化抗原CD86、HLA-DR、CD1a,real-time PCR检测IFN-β的表达变化。用ELISA方法检测mDC细胞上清液中IFN-β、IL-12、IL-10的浓度变化。结果两组mDC上0hIFN-β mRNA表达水平及细胞上清液中IFN-β浓度差异无统计学意义(P>0.05)。健康对照组mDC在12hIFN-β mRNA表达水平及IFN-β浓度与0h相比显著升高(P<0.05),较患者组0h、12h、24h、48hIFN-β表达显著升高(P<0.05)。而患者组mDC刺激后12h、24h和48hIFN-β mRNA及IFN-β表达水平与0h相比无显著变化。与0h比较,健康对照组12h、24h、48hCD86表达水平较患者组显著上升(P<0.05)。两组之间CD1a、HLA-DR表达差异无统计学意义。二组IL-10及IL-120h表达水平差异无统计学意义(P>0.05),患者组IL-10表达24h及48h与0h相比明显上升(P<0.05),而对照组12h、24h、48hIL-10表达水平没有明显上升。与之相反,患者组12h、24h、48hIL-12表达与0h相比表达水平没有明显上升,对照组在12hIL-12表达水平与0h相比差异有统计学意义(P<0.05),24h、48hIL-12表达水平继续升高(P<0.05)。结论慢性HBV感染者mDC受polyI:C刺激后IFN-β表达异常,协同刺激因子CD86表达低下,可能造成宿主对HBV感染的免疫清除障碍,导致疾病慢性化。

周期信号极值电压的准确测量

本文阐述一种新的极值响应测量原理。适用于周期信号各峰点、谷点极值电压的准确测量。本文并就减小误差的若干措施和不确定度指标的验证考核作了扼要陈述。

e抗原阳性慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞Toll样受体3的表达及意义

目的探讨Toll样受体3（TLR3）的表达与HBV感染后宿主免疫清除障碍的关系。方法选取轻度CHB患者50例,健康对照者48名,其外周血用免疫磁珠细胞分选法获得纯化的CD14^＋单核细胞,用RPMI 1640培养基培养,并且用人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和hIL-4诱导单核细胞成为未成熟的髓样树突状细胞（mDC）,加入聚肌胞刺激后获得成熟的mDC。分别在剌激后0、12、24、48h用流式细胞仪检测TLR3、CD86、HLA-DR和CD1a的表达,实时PCR检测TLR3的表达变化。结果健康对照组中mDC在刺激后24h,TLR3表达较0 h时上调显著（P〈0.05）,48h时TLR3的表达与0h相比差异无统计学意义（P〉0.05）;患者组在刺激后12、24h TLR3的表达与0h时相比,上调不明显,48h时TLR3的表达显著上调（P〈0.05）。实时PCR检测mDC上TLR3 mRNA结果发现,对照组TLR3 mRNA在刺激后12h的表达水平较0h显著上升（P〈0.05）,也显著高于患者组刺激后0、12、24h的表达水平;患者组刺激后48h的TLR3 mRNA表达水平较0h显著上升（P〈0.05）。与0h比较,健康对照组在刺激后12、24h和48h,CD86的表达水平显著高于患者组（P〈0.05）。患者组与对照组间CD1a和HLA-DR的表达差异无统计学意义。结论慢性HBV感染者mDC受聚肌胞刺激后TLR3表达异常,协同刺激因子CD86表达低下,可能造成宿主对HBV感染的免疫清除障碍,导致疾病慢性化。