β防御素2对大鼠肺部炎症细胞因子的影响

目的探讨β防御素2(rBD2)对大鼠肺部炎症反应的影响及其可能机制。方法构建大鼠rBD2的cDNA慢病毒载体和RNA干扰载体,双向调节rBD2在大鼠肺组织内的表达水平,ELISA法检测肺组织中IL-1α、IL-1β、IL-4、IL-10的表达变化,Western blot检测肺组织中rBD2的表达,Real time PCR法检测肺组织中rBD2mRNA的表达。结果成功构建rBD2cDNA慢病毒和RNA干扰载体,并成功转染。大鼠肺部感染时,上调rBD2可降低IL-1α、IL-1β等促炎细胞因子的水平,提高抗炎细胞因子IL-4、IL-10的含量(P<0.01)。结论 rBD2可调节大鼠肺组织炎症相关细胞因子的水平,参与并抑制大鼠肺部炎症反应。

日本汉方大建中汤在消化道外科领域的基础与临床研究进展

日本的传统医学称为汉方（Kampo）,目前共有148种汉方药被批准进入国民健康保险。在当代日本,汉方临床应用虽然发展很快,但是有关汉方的作用机制却没有阐明,其循证医学（EBM）的情报也很少,

23价肺炎球菌多糖疫苗体外诱导人气道上皮细胞hBD-2表达的机制

目的探讨23价肺炎球菌多糖疫苗在体外诱导人气道上皮细胞人防御素2(humanβ-defensin 2,hBD-2)表达的机制。方法 0.5μg/ml的23价肺炎球菌多糖疫苗刺激原代人气道上皮细胞12 h,电泳迁移率变动分析法(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测原代人气道上皮细胞中NF-κB的活性。激光扫描共聚焦显微镜技术检测原代人气道上皮细胞内钙离子浓度的变化情况。结果 23价肺炎球菌多糖疫苗刺激原代人气道上皮细胞24h后,细胞内NF-κB活性增高;静息状态下人气道上皮细胞内钙离子浓度为(38.4±1.21)nmol/L,随着刺激时间的延长,钙离子的浓度逐渐上升,20、30、40 min分别为(50.5±3.26)、(51±2.83)、(48±3.47)nmol/L,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 23价肺炎球菌多糖疫苗诱导hBD-2表达上调是通过激活NF-κB信号通路介导的,细胞内钙离子浓度增高可能是NF-κB激活的重要因素之一。

黄芪丹参提取物改善急性呼吸窘迫综合征大鼠肺损伤的作用和机制研究

目的通过大鼠在体研究明确黄芪丹参提取物对急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrme,ARDS)大鼠肺损伤的影响及作用机制。方法通过慢病毒途径在大鼠肺部靶向沉默白细胞介素(interleukin,IL)4Rα,经黄芪丹参提取物给药后通过油酸与脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)联合诱导建立大鼠ARDS模型,造模后6 h应用称重法检测肺组织湿干重比,HE染色评估肺组织病理学改变,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中肿瘤坏死因子(tumor necrosing factor,TNF)-α、IL-1β、IL-6含量以及肺组织中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性。流式细胞术检测BALF来源中性粒细胞凋亡率。免疫印迹法检测BALF来源中性粒细胞中IL-4Rα及半胱氨酸蛋白酶3水解体(Caspase 3-cleaved)蛋白表达,荧光定量PCR检测肺组织中趋化因子含量。结果与假手术组比较,ARDS模型组大鼠肺组织湿干重比明显增加(P<0.01),肺组织损伤评分明显升高(P<0.01),BALF中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6含量和肺组织中MPO含量明显升高(P<0.01)。BALF来源中性粒细胞凋亡率稍降低(P>0.05)。IL-4Rα与Caspase 3-cleaved蛋白表达明显减弱(P<0.01)。肺组织中趋化因子CCL2、CCL3和CCL17 m RNA表达量明显增加(P<0.01)。10 mg/(kg·d)和30 mg/(kg·d)黄芪丹参提取物连续3 d灌胃给药能够明显改善上述指标的异常变化(P<0.05,P<0.01)。IL-4Rα沉默能有效逆转黄芪丹参提取物的上述作用(P<0.05,P<0.01)。结论黄芪丹参提取物能够通过上调IL-4Rα表达并间接诱导ARDS大鼠肺部中性粒细胞凋亡诱导因子Caspase 3-cleaved表达而导致中性粒细胞程序性坏死,并最终有效降低肺部炎症因子释放和减轻ARDS导致的大鼠肺损伤。

安宫牛黄丸在重症监护室中的应用浅识

本文论述安宫牛黄丸在重症监护领域的临床应用,认为应用安宫牛黄丸必须药证相符,继而论述安宫牛黄丸的服用方法及配伍应用,最后列举急性脑血管病(脑梗死)、重型颅脑损伤、肺部感染高热神昏3则验案,进一步具体地阐述安宫牛黄丸的临床应用心得。

流行性感冒病毒裂解疫苗刺激人气道上皮细胞hBD-2表达的研究

目的研究流行性感冒病毒裂解疫苗刺激人原代气道上皮细胞后能否促进人β防御素2(humanβ-defensin-2,HBD-2)的表达及分泌,探讨人工诱导增强防御素表达的方法。方法分离培养人原代气道上皮细胞,以不同浓度流行性感冒病毒裂解疫苗刺激人原代气道上皮细胞,分别于刺激后6、12、24 h提取细胞总RNA及培养细胞上清液,RT-PCR、ELISA检测hBD-2的mRNA和蛋白表达,纸片法观察杀菌效果。结果不同浓度流行性感冒病毒裂解疫苗刺激气道上皮细胞6 h后,各组细胞中hBD-2的mRNA和蛋白表达与对照组相比无明显变化;12h后,疫苗浓度>1.0μg/ml的各组细胞中mRNA表达和蛋白水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),但24 h后均下降。1.0μg/ml流行性感冒病毒裂解疫苗作用12 h后的细胞培养上清液有明显的杀菌效果。结论一定浓度的流行性感冒病毒裂解疫苗刺激人原代气道上皮细胞,可促进hBD-2 mRNA的表达和hBD-2蛋白浓度的增加,为人工方法刺激机体产生hBD-2,对抗病原菌感染提供新的方向。

机械通气治疗创伤性连枷胸合并肺挫伤的临床观察

在我国胸部创伤约占各类创伤的10％～15％，而在美国则占到1／3。出现连枷胸的患者，死亡率达10％～36％。机械通气是治疗连枷胸的常用方法之一，但因人工气道的建立导致呼吸机相关性肺炎的发生率升高，正压通气可造成气压伤，故对连枷胸患者能否进行机械通气仍有争议。本研究对创伤性连枷胸合并肺挫伤患者应用机械通气治疗的指征、疗效、并发症及病死率进行探讨。

降钙素原、D-二聚体与乳酸对脓毒血症患者预后评估的临床价值研究

目的:探讨血降钙素原、D-二聚体与乳酸3种生物标记物评价脓毒血症患者预后的临床价值。方法:56例脓毒血症患者按预后分为生存组和死亡组,比较发病早期血降钙素原、D-二聚体、乳酸水平及APACHEⅡ评分,并建立ROC曲线观察标记物对预后评估的临床价值。结果:3种标记物水平和APACHEⅡ评分在2组患者均有明显差异,3种标记物水平与APACHEⅡ评分存在明显相关;标记物阳性项目越多,病死率越高;3项标记物预测死亡的ROC曲线下面积在0.72～0.79之间。结论:血降钙素原、D-二聚体和乳酸水平均对患者的死亡有较好的预测意义,联合检测可提高预测的敏感性。

脑卒中后免疫抑制

临床观察发现很多患者脑卒中后发生感染,随着对其免疫状态的观察和研究,脑卒中后免疫抑制被逐渐认识。脑卒中后免疫抑制的机制可能是免疫抑制信号通过下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴及自主神经系统下传至周围免疫系统而导致全身免疫状态变化。脑卒中后免疫抑制可引起全身免疫功能下降,但对于脑卒中后的脑组织可能具有保护作用。有关脑卒中后免疫抑制的研究对预测患者的预后,预防脑卒中后感染甚至减少梗死面积,改善预后等具有重要意义。

无创与有创通气治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重的疗效分析

目的评价无创与有创通气对于慢性阻塞性肺疾病急性加重(acute exacerbations of chronic obstructivepulmonary diseases,AECOPD)患者的治疗效果。方法59例AECOPD患者按早期使用机械通气方式随机分为有创组(28例)和无创组(31例),观察患者机械通气前后血气分析指标,Glasgow昏迷评分(Glasgow coma scale,GCS),以及机械通气时间。结果有创组机械通气2 h后,pH、p_aO_2明显上升,p_aCO_2明显下降(P<0.05);无创组机械通气2 h后,p_aO_2明显上升(P<0.05),pH及p_aCO_2无明显改变(P>0.05)。使用机械通气12 h后,无创组p_aCO_2与pH均明显好转(P<0.05)。有创组机械通气时间较无创组更长(P<0.05)。对无创组进行亚组分析,最终需要改有创通气的患者在早期入院时血气分析较可坚持使用无创通气的患者有更低的pH及更高的p_aCO_2(P<0.05)。结论早期有创通气对AECOPD患者血气分析改善优于无创通气;机械通气12 h后,两种通气方式对血气指标的改善作用相似。有创通气者可能需更长机械通气时间。早期p_aCO_2、pH的水平可作为评价患者最终是否需要插管的指标。

老年人呼吸生理的变化

随着人口老龄化的加剧，老年医学的研究越来越受到重视。老年人自有其特殊的生理功能和变化，与各种疾病的发生发展有着密切的联系。人体的呼吸系统约在25～30岁左右生长发育成熟，肺泡数明显增加，肺功能也在这段时期达到峰值。此后呼吸系统开始老化，肺组织结构逐渐出现退行性变，功能随着年龄的增长而逐渐衰退。60岁以后老化现象更加明显，

骨髓增生异常综合征去甲基化治疗后血小板减少的中药疗效探讨

目的：观察骨髓增生异常综合征（MDS）去甲基化治疗后血小板减少的中药疗效。方法：将39例MDS去甲基化治疗后血小板减少患者随机分成两组,对照组采用常规方法（止血敏、输注单采血小板）治疗,中药组在对照组基础上加服补肾健脾止血中药治疗,检测血小板计数、血小板减少持续时间、血清IL-11水平、骨髓单个核细胞IL-11受体α基因的表达与变化。结果：与对照组比较,中药组治疗后15 d血小板计数明显升高达（101.3±16.2）×10~9/L,血小板减少持续时间缩短为（12.2±2.0）d、血小板输注量减少至17 U;2组血清中IL-11水平及骨髓单个核细胞IL-11受体α基因的表达两组之间无明显差异。结论：MDS去甲基化治疗后配合补肾健脾止血中药,可以减轻出血症状、加快血小板恢复,减少血小板输注。

补肾健脾止血方防治骨髓增生异常综合征去甲基化治疗致血小板减少临床研究

目的研究补肾健脾止血方防治骨髓增生异常综合征(MDS)去甲基化治疗所致血小板减少的临床疗效。方法将39例MDS患者随机分为两组;对照组(18例)给予地西他滨治疗,治疗组(21例)给予地西他滨和补肾健脾止血方治疗。15天后,观察两组出血情况、血小板指标和血清IL-11水平变化。结果 1治疗组出血率为42.86%,对照组为66.67%;治疗组出血发生率低于对照组(P<0.05)。2治疗后两组血小板计数、血小板分布宽度、血小板压积均较治疗前增加(P<0.05),平均血小板体积较治疗前降低(P<0.05);治疗组血小板计数和血小板分布宽度大于对照组(P<0.05)。3两组治疗前后及组间血清IL-11水平无统计学差异(P>0.05)。结论补肾健脾止血方可防治MDS去甲基化治疗所致血小板减少,减少出血发生。

β-防御素2与病原疫苗及其免疫效应的关联性研究

目的研究病原菌疫苗及其免疫反应与大鼠β-防御素2蛋白（rBD-2）表达的关系，探讨β-防御素2人为诱导的方法及其在疫苗免疫防御中的作用。方法使用两种疫苗（23价肺炎链球菌多糖疫苗、B型流感嗜血杆菌结合疫苗）分别滴人大鼠肺内，Western blotting法检测肺组织rBD-2蛋白含量；选择作用显著的疫苗滴人鼠肺，不同时间检测肺组织rBD-2蛋白含量，EUSA检测血清中TNF-α、IL—1β、和IL-10蛋白含量。结果两组疫苗作用大鼠后肺组织中rBD-2蛋白均明显上升，B型流感嗜血杆菌结合疫苗的作用更明显；B型流感嗜血杆菌结合疫苗作用后21d，rBD-2随时间逐渐升高，血清细胞因子含量均呈先升高、后降低的趋势，与对照组比较差异显著。结论病原菌疫苗可明显上调大鼠肺组织rBD-2的表达，rBD-2与疫苗引起的免疫反应存在关联，在疫苗的免疫防御效应中有一定作用。

三磷酸腺苷对小鼠内源性β防御素2表达的作用研究

目的研究三磷酸腺苷(ATP)对小鼠内源性β防御素2(miceβ-defensin-2 m BD-2)表达的影响,探讨提高机体抗感染防御能力的途径和方法。方法取60只小鼠为研究对象,随机分为对照组(N,30只)和实验组(T,30只),实验组小鼠每只体内注入相同剂量的ATP,对照组小鼠注射等剂量的生理盐水,于注射后不同时间段12 h(T1组)、24 h(T2组)、36 h(T3组)分别(10只/组)提取小鼠肺组织,检测内源性m BD-2mRNA的表达,同时制作肺组织病理标本,用免疫组化法检测各组小鼠肺组织中m BD-2蛋白的表达。结果与对照组相比,经ATP处理后,实验组小鼠内源性m BD-2 mRNA的表达出现不同程度的上调,差别有统计学意义(P<0.01)。实验组间比较,T2组m BD-2 mRNA表达水平较T1组高,差别有统计学意义(P<0.01);T2组m BD-2 mRNA表达水平较C组高,差异具有统计学意义(P<0.05);m BD-2 mRNA表达水平在T1组和T3组之间无差异,无统计学意义(P>0.01)。免疫组化结果提示经ATP作用后,实验组小鼠肺组织中m BD-2蛋白表达上调,在24 h达强阳性,与12 h和36 h相比有显著差异(P<0.05)。结论体内注射外源性ATP可以上调小鼠肺组织m BD-2 mRNA的表达,且m BD-2mRNA及m BD-2蛋白的表达随ATP作用时间的不同而不同,其在24 h时表达水平达到峰值。

人β防御素2在肺部疾病中的作用及研究进展

细菌对传统抗生素的耐药已成为严重的全球性问题，因此，发展新的高科技抗微生物战略势在必行。内源性抗生素肽（简称抗菌肽）是近10多年来在天然免疫肽分子机制研究方面所获得的重要进展之一。防御素（defensin）是其中的一类小分子抗菌肽，对革兰阳性（G＋）和阴性（G-）菌、霉菌、厌氧菌、螺旋体、分支杆菌以及包膜病毒如流感病毒、艾滋病毒等均有很强的杀伤活性，在哺乳动物、鸟类、两栖类、昆虫界、植物界普遍存在，是最大的内源性抗生素肽家族。依据基因和肽分子层面上的结构特征，

基于危重病人综合管理的住院医师规范化带教策略的探索

急危重病科(ICU)与临床各科关系密切,是临床各科危重急症诊治的重要环节,也是多个住院医师规范化培训学科基地的必选轮转科室。如何对住院医师进行规范化培训,提高其综合医疗水平是目前必须解决的重要问题。近年来,我科在《上海市住院医师规范化培训细则》的基础上进行探索性的改革,修订科室培训体系和相关考核方法,更好地培训和评价急诊基地住院医师和其他基地来ICU轮转的住院医师。

补阳还五汤通过上调白细胞介素4受体α抑制急性呼吸窘迫综合征患者肺部中性粒细胞炎性活化

目的 探讨补阳还五汤抑制急性呼吸窘迫综合征(ARDS)病理条件下肺部中性粒细胞炎性活化的作用机制。方法 获取经补阳还五汤治疗及未治疗的ARDS患者的支气管肺泡灌洗液(BALF),采用ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-4的含量,同时分离中性粒细胞并通过蛋白质印迹法检测IL-4受体α(IL-4Rα)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)和caspase 3水解体的表达。给予IL-4Rα沉默的原代中性粒细胞补阳还五汤大鼠药物血清预处理,后通过脂多糖和低氧诱导的方法建立ARDS体外细胞模型,采用ELISA检测细胞培养上清液中炎症因子的含量,采用CCK-8和流式细胞术分别检测细胞增殖活性和凋亡水平。结果 与常规治疗组ARDS患者比较,补阳还五汤治疗组ARDS患者BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6含量均降低(P均<0.01),IL-4含量略有升高但差异无统计学意义(P>0.05)。与常规治疗组比较,补阳还五汤治疗组ARDS患者BALF来源的中性粒细胞中IL-4Rα和caspase 3水解体表达升高、HIF-1α表达下降(P均<0.01)。与正常条件培养的中性粒细胞比较,脂多糖和低氧诱导48 h的中性粒细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6含量增加,细胞增殖活性增强(P均<0.01);与ARDS体外模型细胞比较,补阳还五汤药物血清预处理的中性粒细胞培养上清液中上述炎症因子的含量均降低,细胞增殖活性减弱且凋亡率增加(P均<0.01),而IL-4Rα基因沉默能够逆转补阳还五汤药物血清的上述作用(P均<0.01)。结论 补阳还五汤能够通过上调IL-4Rα抑制ARDS病理条件下中性粒细胞炎症因子释放。