广东省平胸龟遗传多样性的RAPD分析

由于栖息地的破坏和人为的滥杀滥捕,平胸龟野外资源数量急剧下降,现已处于濒危状态。将13条可重复的、扩增图谱清晰的RAPD引物用于广东省内20个平胸龟个体的遗传多样性分析。扩增所得的条带显示,多态性位点含量为60.71%,Nei’s基因多样性指数为0.1196,Shannon’s多样性信息指数为0.1966,表明平胸龟遗传多样性仍较丰富。同时,计算20个个体间遗传距离为0.0507-0.2925,并采用UPGAM方法绘制聚类分析树状图,20个个体聚类较分散,主要聚为1个大群体,表明广东省内的野生平胸龟并没有形成明显的种群的分化。了解平胸龟的遗传现状、种群结构,可为该物种的种质资源保护、野生资源恢复与利用提供理论依据。

丙烯醛单克隆抗体的制备及ELISA方法的建立

目的利用丙烯醛阳性杂交瘤细胞株制备腹水型单克隆抗体，优化并建立丙烯醛的ELISA检测技术。方法采用直接人工合成法，将丙烯醛半抗原与载体耦合制备完全抗原（免疫原）。利用PEG法将免疫效价高的Balb／c小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，采用有限稀释法进行4次亚克隆，筛选得到1株能稳定分泌抗丙烯醛抗体的亚型为IgG2b的杂交瘤细胞株1G7G6，并制备腹水型抗体。在此基础上，优化并建立检测丙烯醛的间接竞争ELISA方法。结果合成适于免疫和ELISA检测的完全抗原丙烯醛-KLH（免疫原）和丙烯醛-BSA（包被原），制备的丙烯醛抗体（腹水）的效价均在8×10^4以上，与其他丙烯醛类似物交叉反应率均小于1％，特异性高。优化后丙烯醛ELISA方法的检测灵敏度（IC50）为43．2ng／ml，检测线性范围为4．4-417．2ng／ml，检测限（LOD）为1．8ng／ml。结论成功制备得到高亲和力、高效价的丙烯醛腹水型单抗，筛选优化了间接竞争ELISA检测条件，建立了检测液相中丙烯醛的特异、快速、灵敏的ELISA检测技术。

固定甘氨酸制备阳离子交换树脂及其吸附金属离子性能的研究

利用环氧氯丙烷活化法将甘氨酸固定于Sephadex G-25凝胶上制备弱酸性阳离子交换树脂。通过树脂对水中Ca2+和Mg2+的静态吸附、动态吸附和解吸等实验,探讨了金属离子溶液初始浓度、树脂pH值和流速等对树脂吸附Ca2+和Mg2+的影响以及再生条件。结果表明,环氧氯丙烷活化法固定甘氨酸制备阳离子交换树脂的偶联率为12mg·g-1;树脂对Ca2+和Mg2+有良好的吸附/解吸性能,室温下,对Ca2+和Mg2+的静态饱和吸附量分别为7.59mg·g-1和6.16mg·g-1,而动态饱和吸附量则分别达到10.83mg·g-1和8.80mg·g-1。该树脂交换柱较好的操作条件如下:以pH值为8.5的0.05mol·L-1 Tris-HCl溶液作为平衡液,上样流速1mL·min-1;以pH值为1.5的1mol·L-1 NaCl-HCl溶液作为洗脱液,流速0.5mL·min-1。该树脂性能稳定,再生效果好,可重复多次使用。

利用牵出技术分析与虾主要过敏原相互作用的蛋白质

目的:应用牵出技术研究与虾主要过敏原相互作用的蛋白质。方法:将纯化的虾主要过敏原原肌球蛋白偶联在用环氧氯丙烷活化的载体Sepharose-4B上作为配基并制成层析柱,以过敏原为饵蛋白从虾过敏患者血清中钓出与之相互作用的蛋白质。结果:SDS-PAGE和间接ELISA检测显示,由过敏原牵出的蛋白质至少有两种,分别是抗原特异性IgE和IgG,这说明虾过敏反应除了是由IgE所介导外,IgG也在其中起到一定的作用。结论:实验所采用的牵出技术是一个快速且有效的研究蛋白质相互作用的方法,其基于免疫亲和层析原理。