免疫鸡血清新城疫病毒抗体水平与攻毒保护效果的相关性研究

为了明确不同血清新城疫病毒(NDV)抗体水平对鸡的保护效果,本研究采用重组NDV灭活疫苗(A-Ⅶ株)对鸡进行免疫,通过交叉血凝抑制(HI)试验比较A-Ⅶ株与La Sota株间的血清学差异,并采用NDV标准强毒株F_(48)E_(8)和基因Ⅶ型强毒株JSC0804对不同抗体水平免疫鸡进行了攻毒保护试验。结果显示:抗A-Ⅶ株血清用A-Ⅶ株抗原测得的平均HI抗体效价显著高于La Sota株抗原(P<0.01),约高1.5log2,而抗La Sota株血清用La Sota株抗原测得的平均HI抗体效价稍高于A-Ⅶ株抗原,但无显著差异(P>0.05),表明2种疫苗株存在一定的血清学差异。在试验条件下,所有免疫鸡经点眼滴鼻攻毒后均未表现明显临床症状,但存在不同程度的排毒现象,排毒率总体上随抗体效价升高呈逐渐下降趋势。A-Ⅶ株疫苗免疫鸡血清HI抗体效价分别达≥13log_(2)和≥14log_(2)时可完全阻止F_(48)E_8株和JSC0804株排毒。免疫鸡排毒一般仅限于攻毒后5 d内。本研究阐明了免疫鸡的抗体水平和免疫保护效果的相关性,为新城疫免疫控制提供了依据。

后备种鸽不同新城疫疫苗免疫方法比较与免疫程序优化

为制定科学合理的鸽新城疫(ND)疫苗免疫程序,研究比较了1日龄乳鸽新城疫病毒(NDV)母源抗体与种母鸽NDV抗体水平的相关性,对乳鸽母源抗体的衰减规律进行了检测,对采用ND活疫苗与灭活疫苗的不同组合及不同免疫次数的鸽群免疫效果进行了比较。结果显示:1日龄乳鸽NDV母源抗体水平与种母鸽抗体水平呈极显著正相关(r=0.93);乳鸽NDV母源抗体水平在1日龄时为(8.38±1.51)log2,5日龄时略有上升,随后逐日下降,22日龄时降至抗体临界保护值4 log2以下,母源抗体半衰期约为4.45 d;无论采用何种疫苗组合,各免疫组NDV抗体水平在二免后17 d均升至9 log2以上,随后逐渐下降,但在二免后5个月依然维持在7.80 log2以上;除首免后40 d A-1组抗体效价显著高于B-2组、A-2组抗体效价极显著高于B-2组,以及首免后93 d时A-1组显著高于B-2组外,其余各时间点各免疫组之间抗体效价差异均不显著;在种鸽场的实际生产中,鸽群如60日龄转入飞棚时未经免疫,抗体水平在二免后21 d(即51日龄)达到峰值(7.46±1.73)log2后逐渐下降,120日龄时降至(5.87±1.06)log2,而60日龄经过加强免疫的鸽群抗体水平可迅速升至(9.40±1.35)log2,且120日龄时仍能维持在(8.73±1.28)log2。根据研究结果,并结合鸽的饲养特性,推荐后备种鸽ND免疫程序为:15日龄同时采用ND活疫苗与灭活疫苗进行首免,30、60日龄分别采用ND灭活疫苗加强免疫,150日龄配对开产前可使用ND灭活疫苗再次加强免疫。

不同饲养模式对塔里木乳鸽生长性能的影响

随机选取封闭式群养和笼养模式下28日龄塔里木乳鸽各30只,进行体重体尺和屠宰性能的测定,研究不同饲养模式对塔里木乳鸽生长发育的影响。结果:群养模式下乳鸽各检测指标标准差较大,个体差异大。乳鸽体重笼养模式极显著高于群养模式(P<0.01)。体尺指标中除了胫长和胫围外,其他指标均是笼养模式比群养模式高,且达到差异极显著水平(P<0.01)。屠宰指标中腹脂重和腹脂率笼养模式低于群养模式,其中腹脂率达到极显著水平(P<0.01);其他屠宰指标均是笼养模式比群养模式高,除腿肌率外均达到极显著性水平(P<0.01)。器官指标中除了腺胃,其他器官指标2种模式存在差异显著性,其中肝脏指数和肺脏指数群养模式高于笼养模式,其他指标均为笼养模式高。相关性分析显示,笼养模式下,以心脏重与屠宰性状相关性最高,与体重、半净膛重、全净膛重、屠体重和胸肌重相关性达到0.6以上;群养模式下,以肝脏重与体重的相关性最高,为0.54,心脏重与其他屠宰性状相关性最高,与半净膛重、全净膛重、屠体重达到0.7以上。综上,群养模式下乳鸽个体发育差异较大,笼养模式下乳鸽发育群体一致性较好;饲养模式对塔里木乳鸽28日龄体重、体尺、屠宰性能和器官重有重要影响,但胫长受饲养模式影响较小,笼养模式优于群养模式。

禽源沙门菌的分离鉴定及耐药性分析

2013年对江苏、安徽、山东、浙江等地的禽场进行了沙门菌分离、鉴定和耐药性分析。从506份样品中分离获得119株沙门菌,鸡、鸭和鹅的沙门菌分离率分别为28.35%(114/402)、5.40%(4/74)和33.33%(1/30)。鸡源菌株均属于D群,鹅源菌株属于C1群,鸭源菌株分属于C1和E1群。择70株进行了21种抗菌药敏感性试验,结果显示,所有分离株均表现出不同程度的耐药性,分离株对萘啶酸耐药最为普遍,耐药率高达90.00%,其次为四环素(72.86%)、强力霉素(69.57%)、链霉素(62.86%)、复方新诺明(58.57%)和大观霉素(52.86%)。87.14%的分离株耐3种以上抗菌药,其中有1株可耐9种药物。耐6种抗菌药的菌株数量最多,约占37.14%,最常见的多重耐药谱为强力霉素/萘啶酸/链霉素/大观霉素/四环素/复方新诺明。

重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型)对鸭和鹅的免疫效果观察

由H5N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)引起的高致病性禽流感(highly pathogenic avian influenza,HPAI)是禽类的一种烈性传染病,疫苗免疫是禽流感防控中的重要环节。本试验采用重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1,Re-5株)和重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1、Re-5株+Re-4株)进行了鸭和鹅的免疫试验,对免疫鸭和鹅的抗体水平进行了动态监测。试验结果表明,两种疫苗对鸭和鹅均具有良好的免疫效果。基于试验结果提出了鸭和鹅禽流感免疫程序:2 w左右首免,4~5 w时二免,开产前三免,此后每隔4~5个月加强免疫一次。

江苏扬州某蛋种鸡场沙门氏菌耐药性调查与分析

沙门氏菌为肠杆菌科沙门氏菌属成员,引起的鸡白痢、禽伤寒及禽副伤寒等是鸡常见的细菌性传染病,可导致鸡生产性能和繁殖能力下降,甚至急性死亡,给养禽业造成严重的经济损失。在引起禽副伤寒的众多沙门氏菌中,鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、海德堡沙门氏菌等是导致人类食物中毒的最为常见病原菌,具有重要的公共卫生意义。长期以来,除对种鸡群实施净化外,养殖场主要是采用抗菌药物对沙门氏菌病进行防控。然而,抗菌药的长期以及不合理使用造成包括沙门氏菌在内的致病菌耐药性逐渐增强,耐药谱也逐渐增宽[1,2],药物的治疗效果下降、疾病防治成本增加、感染禽病死率增加等诸多问题。加强细菌耐药性监测是合理选用药物、控制细菌耐药性发生的重要措施之一。本文对扬州某种鸡场沙门氏菌的耐药性进行了调查和分析,明确了该场沙门氏菌的耐药现状,为沙门氏菌病的防治提供依据。

鸡白痢沙门菌耐药基因检测及其与药敏性的相关性分析

为探讨鸡白痢沙门菌耐药基因携带情况及其与药敏性的相关性,研究采用PCR方法对已确定耐药谱的207株鸡白痢沙门菌分离株的6类药物的10种耐药基因进行了检测。结果显示:12株(5.80%)未检出耐药基因,11株(5.31%)可携带多达7种耐药基因,携带3种耐药基因的菌株数量最多,占38.16%。10种耐药基因均可检出,tet C基因检出率最高(54.11%),其次为tet A(50.24%)和blaCMY-2(49.76%)。与菌株药敏性总符合率较高的基因依次为cat I(90.82%)、add A1(87.76%)、tet A(86.36%)、blaTEM-1(79.31%),但cat I的耐药符合率及add A1的敏感符合率均为0。blaCMY-2与tet C虽然基因检出率较高,但与药敏性的符合率均较低。研究表明:鸡白痢沙门菌分离株耐药基因携带率较高,但耐药基因与药敏性并不完全相符,耐药基因检测结果可能并不一定能反映分离菌株的实际耐药状况。

鸡毒支原体烯醇化酶的可溶性表达及检测

烯醇化酶参与支原体糖酵解、细胞黏附及免疫调节等多种生命活动,对其开展功能研究有助于了解鸡毒支原体黏附及感染机制。本研究通过重叠PCR克隆获得鸡毒支原体烯醇化酶,经原核表达获得可溶性融合蛋白rMGEno,将纯化产物免疫BALB/c小鼠后制备获得特异性多抗。通过Western blot和ELISA检测发现,烯醇化酶在鸡毒支原体不同强弱毒株中高度保守,表达产量高,在鸡毒支原体参试各毒株的细胞膜中均有分布。这一表达产物的成功制备为深入研究鸡毒支原体烯醇化酶的生物学功能奠定了基础。

鸡球虫病四价活疫苗对毒害艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫的免疫效果观察

为评价一种商品化鸡球虫病四价活疫苗[柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫]对E.necatrix和E.tenella的免疫保护效果,本研究基于试验鸡血便记分、存活率、相对增重率、病变值、卵囊值及抗球虫指数(ACI)等指标对其免疫效果进行检测。结果表明,免疫攻虫组抗E.necatrix和E.tenella的ACI分别为157.3和135.6,均低于160,表明该球虫疫苗抗两种球虫的效果均为低效。然而,免疫攻虫组鸡血便数量、血便记分、增重、卵囊产量和病变记分等指标均优于阳性对照组。综合指标显示,该疫苗对E.necatrix和E.tenella具有一定的免疫保护力,但单纯采用疫苗并不能够达到防控鸡球虫病的目的。

我国不同地方品种鸡(Gallus gallus domesticus)对柔嫩艾美耳球虫的易感性

旨在比较不同品种鸡（Gallus gallus domesticus）对柔嫩艾美耳球虫的易感性差异。选取26日龄无球虫感染的24个我国地方品种鸡和国外引进品种隐性白羽鸡各45只,分别分为2个感染组和1个非感染对照组,每组15只。感染组每只鸡嗉囊内接种1×105个孢子化柔嫩艾美耳球虫卵囊,基于感染鸡的死亡率、相对增重率、肠道病变记分、卵囊产量和抗球虫指数（ACI）等指标,评价不同鸡种对柔嫩艾美耳球虫的易感性。25个鸡种中,狼山鸡、藏鸡、大骨鸡、萧山鸡、文昌鸡、安义瓦灰鸡、白耳黄鸡、仙居鸡、大围山微型鸡和金湖乌凤鸡易感性最低,ACI介于56.80～85.76,表现为未发生死亡或死亡率低,相对增重率高,肠道病变记分低,但卵囊产量相对较高（藏鸡除外）。隐性白羽鸡、清远麻鸡、惠阳胡须鸡、固始鸡、北京油鸡、瓢鸡和汶上芦花鸡易感性最高,ACI介于-11.64～18.67之间,表现为死亡率较高（北京油鸡除外）,相对增重率较低,肠道病变记分和卵囊产量较高（固始鸡除外）。其余8个品种易感性中等,ACI介于29.81～53.36。不同品种鸡对柔嫩艾美耳球虫的易感性存在较大的差异,且肉用型品种较蛋肉兼用型品种易感性高。

H9N2亚型禽流感病毒NS1基因缺失减毒活疫苗候选株对蛋鸡的免疫效力评价

为评价H9N2亚型禽流感病毒(AIV)NS1基因缺失减毒活疫苗候选株r TX-NS1-128对蛋鸡的免疫效力,本研究对蛋鸡H9N2亚型AIV母源抗体半衰期、疫苗适宜免疫时间、抗体免疫保护临界值以及免疫鸡抗体消长规律等进行研究。结果显示,雏鸡H9亚型AIV母源血凝抑制(HI)抗体半衰期为3.29 d。雏鸡母源抗体水平对疫苗的免疫效果有较大的影响,以母源HI抗体滴度约为4 log2时免疫为宜。少数HI抗体滴度为4 log2~6 log2的免疫鸡攻毒后可在5 d或3 d内从咽喉短暂排毒,HI抗体滴度为4 log2、5 log2、6 log2和≥7 log2时攻毒保护率分别为80%、90%、90%和100%,建议该疫苗的抗体免疫保护临界值为5 log2。鸡一次免疫后平均HI抗体滴度在5 log2以上可持续9周左右。本研究为H9N2亚型禽流感新型减毒活疫苗的开发和应用提供依据。

二氯异氰脲酸钠和过氧乙酸消毒剂对新城疫病毒灭活效果研究

采用悬液定量法和鸡胚接种试验研究了二氯异氰脲酸钠和二元型过氧乙酸消毒剂杀灭新城疫病毒效果及稳定性。在试验条件下,二氯异氰脲酸钠和过氧乙酸对新城疫病毒均有良好的杀灭效果,其杀灭病毒的最低浓度分别为0.1 g/L异氰脲酸钠和1 mL/L过氧乙酸消毒工作液保持杀毒效果的时间分别不超过1 d和5 d。

鸡传染性支气管炎病毒毒力变异的分子机制研究进展

鸡传染性支气管炎(IB)是由传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性、高度接触性传染病,是危害世界养禽业的主要疫病之一。该病毒很容易发生变异,随着不同病变类型和组织嗜性毒株的不断出现,传统的疫苗株驯化方法已经不能满足当前IB防控的需要,以现代基因工程技术为基础,研制安全、高效的新型疫苗成为国内外发展的必然趋势。本文总结了国内外IBV毒力变异的分子机制研究进展,为IB新型疫苗的研制提供新的方向。

不同生产模式对乳鸽生长性能、屠宰性能和肉品质的影响

为了探索分阶段饲喂模式应用于规模化商品乳鸽生产的可行性及该生产模式对商品乳鸽品质的影响,试验选择180只刚出雏健康乳鸽,随机分为3组,分别为自然哺喂组、人工灌喂组和分阶段饲喂组,每组3个重复,每个重复20只乳鸽,试验期为28 d。结果显示:分阶段饲喂组乳鸽在离笼后体重会因应激而急速下降,但后期增速较快,上市体重达530 g,显著高于其他两组(P<0.05)。分阶段饲喂组和人工灌服组乳鸽18~28日龄的日均耗料量和料重比均显著低于自然哺喂组(P<0.05)。分阶段饲喂组乳鸽28日龄宰前活重、屠体重、半净膛重、全净膛重均显著高于其他两组(P<0.05),腿肌重、胸肌重显著高于自然哺喂组(P<0.05)。分阶段饲喂组和人工灌服组28日龄乳鸽空肠回肠的长度和重量显著高于自然哺喂组(P<0.05)。分阶段饲喂组胸肌亮度值(L^(*))显著高于其他两组(P<0.05),剪切力显著低于人工灌服组(P<0.05)。综上所述,相较于自然哺喂和人工灌服这两种模式,分阶段饲喂模式生产的28日龄乳鸽体重大、耗料少、屠体重、消化道发育良好、肉色深、肉质嫩,更符合消费市场的需求。

五种喹诺酮类药物体外诱导鸡白痢沙门菌耐药与交叉耐药的研究

采用萘啶酸、恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、加替沙星等5种喹诺酮类药物进行了鸡白痢沙门菌体外诱导耐药试验,观察和分析了细菌耐药性发展进程及药物间的交叉耐药情况。鸡白痢沙门菌标准株C79-3以药物浓度递增法分别在5种药物的次抑菌浓度下诱导传代至30代,每10代进行药敏试验检测耐药性,并对诱导株诱导前和诱导30代后的药物最低抑菌浓度(MIC)进行测定和比较。结果:随着诱导代次增加,诱导株对诱导药物的敏感性逐渐下降,至30代时所有诱导株均对诱导药物产生耐药。不同药物诱导耐药的进程有一定程度的差异,萘啶酸最易诱导耐药,其次为恩诺沙星、环丙沙星和加替沙星,最后为诺氟沙星。环丙沙星诱导株的环丙沙星MIC增幅最大,萘啶酸诱导株的萘啶酸MIC值最高。5种药物间存在不同程度的交叉耐药现象,恩诺沙星、诺氟沙星和环丙沙星之间为双向交叉耐药,而萘啶酸与恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星和加替沙星间以及加替沙星与恩诺沙星、诺氟沙星和环丙沙星间为单向交叉耐药。此外,药物间的交叉耐药与菌株的耐药水平密切相关。

江苏省某种鸡场重要疫病血清学调查与分析

为了解江苏省某种鸡场重要疫病感染和免疫状况,从绿壳蛋鸡核心群采集了290日龄鸡的血清样品进行了禽白血病(AL)、网状内皮组织增生症(RE)、沙门菌病、新城疫(ND)和高致病性禽流感(HPAI)血清学调查。562份样品进行鸡白痢和鸡伤寒沙门菌(SP/SG)、新城疫病毒(NDV)和高致病性禽流感病毒(HPAIV)抗体检测,取460份样品检测A亚群和B亚群禽白血病病毒(ALV-A/B)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)和网状内皮组织增生症病毒(REV)抗体。结果显示:种鸡群ALV-A/B、ALV-J、REV以及SP/SG抗体阳性率分别为10.00%(46/460)、6.92%(32/460)、27.39%(126/460)和26.16%(147/562)。公鸡ALV-A/B、ALV-J和SP/SG抗体阳性率显著低于母鸡,但其REV抗体阳性率则显著高于母鸡。在同时检测ALV-A/B、ALV-J、REV和SP/SG抗体的鸡中,有54.78%(252/460)呈抗体阳性,其中,单抗体阳性、2种抗体阳性和3种抗体阳性的鸡数分别占74.21%(187/252)、22.22%(56/252)和3.57%(9/252)。结果提示种鸡群存在不同程度的ALV-A/B、ALV-J、REV和SP感染,以REV和SP感染较为严重,且多重感染现象较为普遍。ND和HPAI免疫抗体检测结果显示,NDV、H5亚型AIV Re-11株、Re-12株和H7亚型AIV平均血凝抑制(HI)抗体效价分别为(10.85±0.95)log2、(8.14±1.31)log2、(7.76±1.23)log2和(8.96±1.03)log2,表明鸡群ND和HPAI免疫效果良好。以上研究结果可以为鸡群重要疫病的防控和净化工作提供依据。

鸡传染性支气管炎病毒在鸡肾上皮细胞中培养条件的优化研究

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)具有严格的上皮细胞嗜性。由于缺乏可供IBV复制的传代细胞系,从而阻碍了从细胞水平研究其复制、致病等分子机制。掌握鸡肾上皮细胞等原代细胞的制备、纯化及培养技术显得尤为关键。本项目组通过选择不同日龄的SPF鸡胚或雏鸡进行肾上皮细胞的制备,同时对消化酶、纯化方式及培养条件进行筛选优化,进一步采用具有EGFP标签的r H120-EGFP/5a重组病毒鉴定培养的鸡肾上皮细胞。结果表明:选择1日龄雏鸡,通过胶原酶Ⅰ消化制备的鸡肾上皮细胞的活力最佳;采用多次离心法能有效去除大量单细胞,从而达到纯化上皮细胞的目的;3%胎牛血清足够提供上皮细胞生长所需的营养,并能抑制CEF的生长。试验探索并优化了鸡肾上皮细胞制备及培养的条件,为禽源上皮细胞系的建立和IBV分子致病机制的研究奠定了基础。

基因Ⅶ型新城疫病毒母源抗体对雏鸡的免疫保护效果

为了解基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)母源抗体对雏鸡的免疫保护作用,对雏鸡母源抗体水平与种母鸡免疫抗体间的相关性、雏鸡母源抗体衰减规律以及不同母源抗体水平对雏鸡的免疫保护效果进行了研究。结果显示:雏鸡母源抗体水平与相应种母鸡的抗体水平基本一致,虽然1日龄雏鸡平均抗体滴度较相应种母鸡抗体滴度约低1.3 log2,但在其出生后最初几天内会稍有上升;雏鸡母源抗体半衰期为3.20 d;不同母源抗体水平雏鸡用基因Ⅶ型NDV强毒株攻毒后,死亡率与排毒率均随母源抗体滴度上升而呈下降趋势;母源抗体滴度达到7 log2时即对雏鸡产生95%以上的保护率,但各攻毒组均存在不同程度的排毒现象,即使其抗体滴度高达11 log2也不例外;母源抗体滴度为4 log2和5 log2的雏鸡可持续排毒至攻毒后27 d,个体排毒期为925 d,平均为15 d。

表达鸡γ-干扰素重组鸡传染性支气管炎病毒的构建及鉴定

为研究鸡传染性支气管炎病毒(IBV)作为载体表达外源基因的可行性,本研究以IBV疫苗株H120为病毒载体,在其非结构蛋白5a编码区上游插入鸡γ-干扰素(Ch IFN-γ)基因,通过反向遗传操作技术构建重组病毒。经RT-PCR和测序鉴定表明拯救获得重组病毒(r H120-c IFNγ/5a)。生物学特性研究结果表明,r H120-c IFNγ/5a感染鸡胚后能够引起特征性病变,但与其亲本病毒株H120相比,病毒的毒价及其在鸡胚中的复制能力有所下降。将r H120-c IFNγ/5a在鸡胚中连续传代,采用RT-PCR进行检测,结果表明Ch IFN-γ基因在病毒传至第9代时仍保持稳定,至第12代Ch IFN-γ基因出现部分或完全丢失现象。本研究结果为进一步研制以IBV为载体的新型基因重组疫苗奠定了基础。

鸽源鼠伤寒沙门菌分离鉴定及药敏试验

从江苏省某肉鸽场发生的腹泻症状的死亡鸽中采集病料,分离出1株病原菌,通过PCR鉴定菌株,并进一步做药敏试验。结果表明,病原菌分离鉴定为鼠伤寒沙门菌,属于血清O4群,该菌对20种抗生素均敏感。