羊口疮的研究

本文报道了对羊口疮的病原学、流行病学、实验病理学、血清学诊断以及免疫预防等问题所进行的系列研究结果。应用电镜技术,首次在国内观察到了羊口疮的病原——羊口疮病毒。对该病毒的某些生物学特性和理化学特性进行研究的结果表明,该病毒的感染范围比较广泛,对干燥耐受性强,对热、紫外光和福马林敏感;在奶山羊睾丸细胞上生长良好,CPE变化显著,并有多倍性现象;通过系统取样和超薄切片,在电镜下观察到了病毒在培养细胞中的主要复制过程,以及培养细胞本身的亚微结构变化。试用差速离心联用30—45％蔗精密度梯度超速离心,能有效地提纯病毒,为纯化痘类病毒提供了一种较为理想的方法。中性无离子去污剂TritonX—100与2—巯基乙醇联合,可使病毒裂解,便于分离囊膜蛋白亚单位;用SDS—PAGE分析法,发现病毒最少可泳动出28条多肽区带,而病毒的囊膜亚单位则由18条多肽区带组成。将病毒亚单位作为抗原免疫羔羊,可激发羊只产生抗全病毒抗体和迟发性变态反应,这在国内属首次报道。流行病学的调查表明,羊口疮在甘肃省存在历史已久,分布广泛,对养羊业危害严重;病的自然感染主要见于绵羊和山羊,以羔羊最为易感,除口唇感染外,未见其他临诊病型;采取不同地区的病羊痂皮在羊体作交叉免疫试验,未发现病毒有型别差异。人工感染病羊的血常规检查和血清蛋白的电泳分析未见异常;病理组织学变化以表皮的网状变性、真皮的炎性浸润和结缔组织增生为最特征。首次在国内将反向间接血凝、对流免疫电泳、酶联免疫吸附,琼脂凝胶扩散以及血清中和等五种血清学方法用于羊口疮的诊断,填补了国内在这方面的空白,其中前三种方法在当时的国外文献中也未见有报道。以改良、完善现行方法为目的,对活毒苗免疫接种法作了系统的研究,证明是一种行之有效的应急性免疫措施,有在疫区推广应用的价值;对灭活苗所进行的探索性试验表明,灭活的病毒似能激发羊体产生一定程度的免疫,为今后进一步提高灭活苗的免疫效果以及研究其在实践中应用的可能性打下了有益的基础。

光生物素标记核酸探针检测水貂肠炎病毒的研究

水貂肠炎病毒(MEV)的检测,目前主要采用病毒分离和血清学方法。为了能直接从样品中检测病毒,我们于1988年秋冬,首次采用了光生物素标记核酸探针打点杂交的方法,结果证明这种方法效果良好,能特异地检出MEV,且灵敏度高,可检测出10pg水平的病毒DNA。

我国新城疫强毒株F糖蛋白基因的体外合成及其抗原性研究

将我国新城疫强毒株Ｆ４８Ｅ９在ＳＰＦ鸡胚增殖后提取ＲＮＡ，用自行设计的一对寡聚核苷酸引物进行ＲＴ－ＰＣＲ，合成了Ｆ糖蛋白基因片段。将此片段与ｐＵＣ１９质粒重组，转化大肠杆菌ＪＭ１０９，从阳性克隆中提取重组质粒，再用ＰＣＲ法扩增，获得了同样大小的ＤＮＡ片段。经用特异性抗体探针检测。

应用λgt11载体系统克隆与表达禽源巴氏杆菌的抗原蛋白基因

本研究应用λgt11载体系统构建了禽源巴氏杆菌P1059菌株DNA的表达型基因文库。P1059DNA被机械剪切刀随机剪切成2～8kb大小的片段,其内部EcoRⅠ位点被甲基化后再在片段的两端连接上EcoRⅠ“接头”。然后将用EcoRⅠ酶消化的上述片段连接到λgt11载体臂上,在体外包装成重组噬菌体。将重组噬菌体感染大肠杆菌Y1090,用抗P1059高免家兔血清作为第一抗体,酶标羊抗兔IgG作为第二抗体对噬菌斑进行原位筛选。用筛选出来的7个抗原基因阳性克隆株分别溶原化于大肠杆菌Y1089,在IPTG诱导下使溶原菌表达出β半乳糖苷酶——外源性多肽链融合蛋白质。用惠斯顿免疫吸附试验检测从上述7株溶原菌所获得的融合蛋白质,均显示出特异性的抗原抗体反应。用小鼠作进一步的免疫保护试验证明,有一株溶原菌(PaC_1株)的粗制裂解物能使小鼠对P1059强毒菌的攻击具有较强的抵抗力。

基因免疫及其在传染病学中的应用

基因免疫及其在传染病学中的应用沈正达（甘肃农业大学动物医学系，兰州７３００７０基因免疫（ｇｅｎｅｔｉｃｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）又称ＤＮＡ免疫或核酸免疫，是指利用各种方法将带有目的基因的表达载体转化到体内，诱导机体产生抗体并引起特异的免疫应答。基因免...

与兽医学和公共卫生学有关的病毒新近分类地位

国际病毒分类委员会(ICTV)于1991年发表的病毒分类和命名的第五次报告,与第四次(1982)报告比较,有以下几点不同:1.修改了病毒命名法规,取消了原第四和第十三条,并对原第五、十二、十四、二十条的内容作了修订;2.增加了许多科、属、组及新发现的和前此未收进的病毒;3.调整了某些病毒的分类位置;4.建立了单股负链核糖核酸病毒目(Mononegavirales),将丝状病毒科(Filoviridae)、副粘病毒科、弹状病毒科隶属于此目;5.删除了一些病毒,如非洲猪瘟病毒、马立克病病毒等;6.开列了第四次报告以来到1991年年初新发表的参考文献。现将第五次报告中与兽医学和公共卫生学有关的重要病毒的分类情况,按目、科、亚科、属(群)、亚属(亚群)、种、亚种(变种、血清型)顺序简介于下:

抗独特型抗体及其在疫病防治上的研究进展

自从1974年N.K.Jerne提出免疫网络学说以来,对于抗独特型抗体的研究日益增多,尤其是在感染性疾病的研究中,已显示出诱人的发展前景。Jerne认为,机体免疫系统内的各个细胞克隆,通过自我识别,相互刺激,或相互制约,构成一个动态平衡的网络结构。构成网络结构的物质基础,就是位于抗体分子上的独特型和抗独特型。Jerne因此在1984年获诺贝尔奖。 (一)抗独特型抗体的生物学基础 抗体是一类在抗原物质对机体刺激后所形成的、具有与该抗原发生特异结合反应的球蛋白。目前常把具有抗体活性以及与抗体相关的球蛋白,通称为免疫球蛋白(Ig)。Ig分子上有两种性质截然相反的部位。

人畜疾病基因诊断进展

所谓基因诊断,即是指在基因水平上对疾病的性质作出诊断。目前主要是指根据生物基因组DNA或RNA的碱基变化或检测其在待检样品中的存在来诊断某些遗传性疾病以及感染性疾病(特别是病毒性传染病)和寄生虫病。它在医学上的应用,最早可追溯到本世纪四。

牛羊传染病防制:存在的问题及对策

在牛羊饲养业中,疫病防制工作一向很受重视。但是,近年来,随着养殖业的迅猛发展,疫病正以前所未有的势头威胁着养殖生产,牛羊疫病也不例外,必须重新审视这一问题。本文概述了当前牛羊疫病流行的基本态势,以及预防、诊断工作中经常会遇到的问题。尤其指出,及时报告疫情发生对于预防工作具有重大的价值。

拓宽知识面 培养应用型人才——为研究生讲授家畜传染病学的几点作法

1987年以来,我在兽医专业本科、专科家畜传染病学的教学中,在传染病学专业硕士研究生的培养教育中注意拓宽知识面,增开新课程,加强基础,注重实践,努力使培养出来的本、专科学生和研究生成为具有多种能力的有用人才。

养鸡技术讲座 第六十讲 当前若干重要鸡疫发病特点及防治对策（上）

养鸡技术讲座第六十讲当前若干重要鸡疫发病特点及防治对策（上）甘肃农业大学兽医系沈正达近年来，养鸡生产出现了飞速发展的形势。但由于饲养方式日趋密集和市场流动日益活跃，鸡的疫病也出现了许多新的变化。原来熟知的一些鸡疫发病特点有了不同的表现；原来认为是一些...

光生物素标记的口蹄疫病毒cDNA探针的制备及其对口蹄疫病毒RNA检测的试验研究

本文首次报道了利用pF1034质粒制备FMDV O型特异性探针,并通过PCR反应扩增FMDO_1K株病毒基因组的第2962位与3071位之间共110bp序列,制备了能检测O型、A型和亚洲I型FMDV RNA的群(组)特异性探针。用硝酸纤维素膜斑点杂交试验表明,二者均能检测出10pg水平的O_9K毒株的纯RNA;但前者只与O型FMDV RNA杂交,与A型及亚洲I型FMDV RNA无交叉杂交现象;而后者则能与O型、A型和亚洲I型的FMDV RNA发生杂交反应。对照试验显示:此两种探针与SVDV ssRNA、BTV dsRNA、EHDV dsRNA、DHV ssRNA、PRV DNA、乳鼠组织细胞RNA、BHK_(21)克隆13细胞RNA及DNA等均不出现交叉杂交现象,但与IBR DNA有假阳性杂交反应。

接触传染性脓疱皮炎病毒B2L基因的克隆和序列分析

参照文献和 Gen Bank发表的接触传染性脓疱皮炎病毒 (CPDV ) NZ- 2株的 Bam H / B片段的基因序列 ,设计并合成 1对引物 ,通过 PCR扩增出国内 CPDV疫苗株和 3个分离株的 B2 L 基因 ,目的片段长约 1.13kb。将目的片段克隆到 p MD18- T载体后进行序列测定 ,并用 DNAStar软件比较分析国内的 CPDV株与 NZ- 2株的核苷酸序列和推导的氨基酸序列的同源性。结果表明 ,国内疫苗株和 3株分离株的核苷酸序列同源性分别为 99.7%、96 .9%和 97.4 % ,与国外 NZ- 2株的同源性为 96 .1%。国内 CPDV株与 NZ- 2株的氨基酸序列同源性分别为 92 .0 %～ 96 .0 % ,表明CPDV Bam H / B2 L基因变异的幅度小。

空肠弯杆菌的分离与鉴定的研究

本文报道了从奶牛、产蛋鸡、屠宰场的猪、舍饲的绵羊和山羊的粪便及肠内容物分离空肠弯杆菌的试验结果。从肠内容物取样,猪分离率为32.61％;粪便材料,猪、鸡、奶牛、山羊和绵羊分别为26.47％,13.04％,9.76％,13.33％和6.82％。利用改良的布氏半固体培养基,接种新分离株后置37℃保存,解决了弯杆菌新分离株保存难题。5株新分离株分别于10、20、30和40天检查,全部存活,效果可靠。这一方法对分离鉴定弯杆菌时菌株的短期保存,具有实际的应用价值。

一种改良的快速筛选重组DNA噬菌体噬斑的原位杂交技术

报道了一种从表达型噬菌体载体——λgt11构建的基因文库中筛选重组DNA噬菌体噬斑的改良蛋白质-蛋白质原位杂交枝术。此法可使噬菌体在硝酸纤维素薄膜上增殖至原噬斑大小,经适当处理后,即可用特异性抗体探针进行原位筛选,以 获得含目的基因编码的特异抗原蛋白的阳性克隆株。与己报道的筛选方法相比,此法具有简便快速、灵敏可靠的特点;也可试用于由表达型质粒载体构建的基因文库之菌落原位筛选。

改良菌落原位杂交技术快速筛选NDVF基因阳性克隆株

应用从表达型质粒载体构建的ＮＤＶＦ基因文库中筛选阳性克隆株的改良融合蛋白质抗体蛋白质原位杂交技术，可使菌落在硝酸纤维素薄膜上增殖，经适当处理后，即可用特异性抗体探针进行原位筛选，获得含目的基因编码的特异抗原蛋白的阳性克隆株。

鸡传染性喉气管炎琼脂扩散抗原的特异性及敏感性测定

本文对自制的8种鸡传染性喉气管炎琼脂扩散抗原和市售抗原的特异性进行了对比试验,筛选出了两种特异性强的琼脂扩散抗原,并用这种抗原检测16份人工感染后不同时期采集的鸡血清和在野外采集的196份血清,其结果与酶联免疫吸附试验的符合率为83.33%。

由产单核细胞李氏杆菌引起母牛流产和犊牛腹泻的诊断报告

1988年初春以来,山丹军马二场六队牛群中陆续发生母牛流产和初生犊牛腹泻,经细菌学检查和实验动物接种,证明系由产单核细胞李氏杆菌引起。现报道于后。一、发病情况山丹军马二场六队共有繁殖牛423头,包括黄牛、犏牛、荷兰牛及杂种牛。1988年4月,发现怀孕后期母牛发生流产、初生(2～3日龄)犊牛发生腹泻,疾病延续两月有余。至6月22日统计。