禽肺病毒的分离鉴定

禽肺病毒（ＡＰＶ）于１９７８年首次发现于南非，可引起火鸡鼻气管炎和鸡肿头综合症，至今未见其在中国存在的报道。我们从黑龙江省某肉种鸡场患肿头综合症的鸡中分离到了１株病毒。经鉴定，该病毒分离株缺乏血凝活性，具有典型的副粘病毒形态特征，可诱导特异性抗ＡＰＶ抗体的产生。因此可认定该病毒为１个ＡＰＶ分离株（命名为ＡＰＶ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃｈｉｎａ／１／９８）。

表达传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫保护性研究

以脂质体转染技术构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２基因的重组鸡痘病毒ＦＰＶ－ＶＰ２，该病毒在鸡胚成纤维细胞及鸡体内均能稳定产生子代病毒，经翅皮下５×１０５ＰＦＵ／羽免疫１日龄ＳＰＦ鸡，免疫后４周以１００ＬＤ５０／羽ＩＢＤＶ超强毒株Ｇ株攻毒，获得了５／６的保护，但不能有效预防临床发病及法氏囊受损萎缩。实验结果证明了ＶＰ２是ＩＢＤＶ的宿主保护性抗原，提示Ｔ细胞介导的免疫可能在ＩＢＤＶ的免疫中起着较为重要的作用。本研究为ＩＢＤＶ重组病毒疫苗研制进行了有益探索。

鸡瘟病毒载体研制及应用进展

鸡瘟病毒载体研制及应用进展袁世山，刘桂永，沈瑞忠，金虹，卢景良（中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室）重组疫苗特别是活病毒载体疫苗的出现，为改进现有常规疫苗带来了契机，痘苗病毒（ＶＶ）以其外一源基因容量大，忠实的翻译后处理而一度成为病...

鸡胚不同接种途径及收取部位鸡痘病毒的含量比较

多年来,生物制品厂一直按《规程》,经CAM 接种鸡痘种毒,只收获典型病变的CAM 用于鸡痘弱毒组织苗的生产。许多科研单位也按专业性文献的叙述,用同法获取鸡痘病毒。这样不仅生产工艺复杂。

直接用酚和氯仿快速提取质粒

质粒的提取是分子克隆技术中最关键的步骤之一，在对大量样品的抽提和筛选时工作量很大．提取质粒的方法很多，有碱裂解法、煮沸法等［１］，所用试剂较多，耗时较长，这些方法均要用酚和氯仿抽提以去除菌体蛋白，以免影响酶切分析．Ｂｉｊｉ，Ｔ，Ｋｕｒｉｅｎ等（１９９４）提出用乙醇溶菌法快速提取质粒［２］，作者试验多次结果均不理想，经过改进直接用酚和氯仿溶解菌体来快达提取质粒，得到了满意的结果。用该法提取质粒ＤＮＡ，产量高，简便快速，可直接用于酶切分析。

鸡痘病毒表达载体的构建Ⅰ、鸡痘病毒282E_4株基因组PstⅠ、HindⅢ酶切片段的克隆及酶切分析

本文介绍了鸡痘病毒２８２Ｅ４株基团组ＰｓｔⅠ片段、ＨｉｎｄⅢ片段的克隆和鉴定，以及部分克隆的限制性内切酶分析。鸡痘病毒基因组经酶切、克隆分别得到３４９个、２７７个白色菌落，经质粒电泳、菌落杂交筛选分别得到２８６、２３４个重组菌落，再经酶切、斑卢、杂交鉴定，证明了所克隆的确为鸡痘病毒的ＰｓｔⅠ、ＨｉｎｄⅢ片段。最后经单、双酶切分析，得到了５个ｐＦＰ、５个ｐＦＨ克隆的物理图谱。

鸡痘病毒复制非必需区的筛选及酶切分析

本实验对鸡痘病毒２８２Ｅ４株基因组ＰｓｔⅠＨｉｎｄⅢ或ＢａｍＨⅠ片段进行了克隆、鉴定，并对部分克隆进行酶切分析，在此基础上对其中６个克隆插入Ｐ１１Ｐ７．５－ＬａｃＺ报告基因盒，构建了含报告基因的重组质粒。用其中的三个重组质粒以磷酸钙法共转染鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），其中有２个产生了蓝色空斑．经三次空斑纯化能稳定产生子代病毒．证明所使用ｐＦＢ１７６和ｐＦＨ１３３为病毒复制非必需片段，分别是２．９ｋｂＢａｍＨⅠ片段和４．７ｋｂ的ＨｉｎｄⅢ片段，并绘出了它们的物理图谱．

鸡痘病毒基因组酶切片段的克隆及酶谱分析

以鸡胚成纤维细胞培养的中国鸡痘病毒鹌鹑化弱毒株，经蔗糖密度梯度离心法纯化，电镜观察示所得病毒为典型鸡瘟病毒颗粒。以蛋白酶Ｋ法抽提病毒基因组，电泳结果为典型的大分子量ＤＮＡ特征，经ＥｃｏＲＩ或ＥｃｏＲＩ／ＨｉｎｄⅢ酶切，插入ｐＵＣ１９载体相应位点，经转化、筛选、鉴定后得相应酶切片段的基因组文库。对其中２３个克隆片段用双酶法进行酶谱分析，绘制出了相应克隆片段的酶切图谱，每个克隆片段中均有１～６个可以利用的插入位点。基因组文库的构建及部分克隆片段的酶谱分析为进一步筛选病毒复制非必需片段以构建重组疫苗表达载体乃至鸡痘病毒分子生物学的研究打下了坚实的物质基础。

一种平末端连接的有效方法

转化效率与质粒大小成反比，而当质粒大于１５ｋｂ时，转化效率将成为限制因素，此时提高连接效率极为必要，特别是对于具有普遍性而效率又低的平末端连接。我们在连接反应体系中，加入相应的产生平末端质粒载体的限制性内切酶ＨＰａＩ、或ＥｃｏＲＶ，与不加ＨＰａＩ、或ＥｃｏＲＶ的连接反应相对照，连接产物转化大肠杆菌ＪＭ１０９后，产生的转化子比率分别为１９．９％和５．６％（ＰＦＰ７），３２．６％和９．７％（ｐＦＢ１７５），２４．３％和３．６％（ｐＦＨ１２），３７．９％和１０．３％（ｐＦＰ２６），且从转化株中分离的质＃ＤＮＡ经电泳、酶切鉴定为目的产物。ＨｐａＩ、或ＥｃｏＲＶ的存在极有利于插入片段连接到载体上，同时抑制载体自身环化或寡聚化，大大提高了平末端连接效率。

积极推行“六化”改革 促进经济快速发展——绥化农垦分局以改革促发展的调查

绥化农垦分局是黑龙江垦区的一个小局,所属各农牧场比较分散,基础条件较差,长期以来改革滞后,经济发展缓慢.进入新世纪以来,绥化分局以深化改革为动力,不断探索发展的新路子、新模式,各项工作取得了突破性进展,企业活力明显增强,职工群众收入连年增加,社会经济步入了持续、快速、健康的发展轨道.通过调查分析,笔者认为,这些成绩的取得主要得益于近几年全面推行了以"六化"为重点的改革.

正确处理六个关系 促进垦区工业发展——绥化农垦分局工业改革与发展的调查思考

黑龙江省绥化农垦分局人多地少，资源有限。为促进经济快速发展，多年来分局党委高度重视工业的发展，尤其是“八五”后三年，先后投资８０００万元发展工业。然而高投入并没有带来高效益，１９９４年至１９９６年全局工业企业累计亏损８２１万元，仅１９９５年就亏损７６...

市场经济下乡镇卫生院的多元性

随着改革开放的深入发展和社会主义市场经济体制的进一步确立,医疗卫生事业在这一有利的机遇中得到了较快的发展,然而也面临着严峻的挑战,特别是作为农村三级医疗卫生保健网的枢纽——乡镇卫生院,在由计划经济向市场经济过渡这个交替变革时期,其原有的惯性运行模式受到了较大的冲击,并由此带来了一系列的社会和经济问题。本文试图从乡镇卫生院本身固有的多元属性,结合我市35个乡镇卫生院的现状,探讨其产生问题的根源,并扼要提出一些对策管见。

与云同行

值湖北省气象学校建校三十五周年之际,赋诗一首,献给可敬可爱的校友——默默奉献的气象工作者。 风云雷电壮豪情 蓝天白云写人生 青春和生命 求证

绥化垦区经济发展思路探析

进入社会主义市场经济体制以来,绥化垦区经济有了较大的发展,但同经济发达地区和垦区先进分局相比,尚有很大差距。如何深化改革,加快发展,步入经济高速、高效发展的快车道,是摆在我们面前的重要课题。本文将就此问题加以探讨。

办好市(县)、乡两级计生服务站

办好市（县）、乡两级计生服务站●沈瑞忠如何加强市（县）、乡两级计生服务站的管理，使其充分发挥作用，是当前计生工作中的一个重要课题。湖北省随州市在这方面积极探索，取得了较好的效果。１．更新观念，大胆改革创新。更新观念就是将服务站从只能从事“四术”服务狭...