马钱苷对糖基化终末产物诱导足细胞损伤的保护作用

目的探讨山茱萸环烯醚萜苷特征性成分马钱苷对糖基化终末产物(AGEs)诱导肾脏足细胞损伤的保护作用及其机制。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,分为空白对照组、模型组(AGEs组)、马钱苷组,并设氨基胍组作为阳性对照。MTT法检测马钱苷对足细胞存活率的影响;Hoechst33342/PI双染观察足细胞凋亡情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测足细胞AGEs受体(RAGE)、足细胞损伤标志蛋白desmin以及凋亡相关蛋白bax、bcl-2、cleaved caspase-3的表达。结果马钱苷能够抑制AGEs导致的足细胞损伤,下调足细胞Desmin、RAGE蛋白的表达,明显降低AGEs诱导的足细胞凋亡率,降低足细胞Bax/Bcl-2的比值和促凋亡蛋白cleaved caspase-3的表达。结论马钱苷能够改善AGEs诱导的肾小球足细胞损伤,其作用机制与降低RAGE蛋白表达,抑制凋亡通路有关。

山茱萸环烯醚萜苷类成分对AGEs诱导HUVEC损伤的保护作用

目的探讨山茱萸环烯醚萜苷类特征成分马钱苷、莫诺苷对糖基化终末产物（AGES）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用.方法体外培养HUVEC,用马钱苷、莫诺苷（终浓度分别为100、10、μmol·L^-1）预孵1h后,再加人AGE/（200mg·L^-1）刺激,并设氨基胍为阳性对照,孵育24h后,采用MTT法检测马钱苷、莫诺苷对HUVEC增殖率的影响;采用试剂盒检测细胞上清液中-氧化氮（NO）、内皮素（ET-1）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）;采用Westernblot法检测HU-VEC中糖基化终末产物受体（RAGE）、核转录因子（NF-kB）的蛋白表达.结果山茱萸环烯醚萜苷类特征成分马钱苷、莫诺苷能抑制AGEs导致的HUVEC损伤,与空白对照组比较,模型组细胞RAGE、NF-kB蛋白表达上调（/3〈0.01）,ET-1、MCP-1、VCAM-1分泌增加（P〈0.01）,NO水平降低（P〈0.01）.马钱苷、莫诺苷给药组能不同程度地下调RAGE、NF-kB蛋白表达,减少ET-1、MCP-1、VCAM-1分泌,升高NO水平,与模型组比较差异具有显著性（P〈0.05-0.01）.结论山茱萸环烯醚萜苷类特征成分马钱苷、莫诺苷对AGEs导致的HUVEC损伤具有明显的保护作用,其作用机制为下调RAGE蛋白表达,抑制RAGE受体相关NF-κB信号通路发挥抗炎作用,从而改善内皮细胞功能.

人参平肺方对二氧化硅所致大鼠肺纤维化的作用及机制探讨

目的在二氧化硅粉尘悬液致大鼠纤维化模型上观察人参平肺方的作用并探讨其可能机制。方法 SD大鼠麻醉后在气管内注入二氧化硅粉尘悬液以建立肺纤维化模型,然后随机分为模型组、泼尼松组(5.0mg/kg)、人参平肺方3.0、6.0、12.0g/kg剂量组,同时另设空白对照组。连续给药48d后取大鼠肺组织测定肺系数,HE及Masson染色观察肺泡炎症及纤维化程度,测试盒检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量,ELISA法检测肺泡灌洗液TGF-β1、NF-κB、PDGF、TNF-α及IFN-γ水平,免疫组织化学染色检测肺组织TGF-β1、Samd2/3及ERK1/2蛋白的表达。结果人参平肺方能够显著降低肺纤维化大鼠的肺系数(P<0.05),降低肺泡炎症及纤维化程度,降低肺泡灌洗液TGF-β1、NF-κB、PDGF及TNF-α水平(P<0.05),升高肺泡灌洗液IFN-γ水平(P<0.05),降低肺组织TGF-β1、Samd2/3及ERK1/2的蛋白表达(P<0.05)。结论人参平肺方对肺纤维化大鼠有治疗作用,其机制可能与TGF-β/Smad/ERK信号通路有关。

AGEs/RAGE/SphK1信号通路介导马钱苷抗AGEs损伤GMCs的机制研究

目的探讨山茱萸中有效成分马钱苷在缓解晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导肾小球系膜细胞(GMCs)损伤的机制。方法体外培养GMCs,分为空白对照组,模型组(AGEs:200mg/L),马钱苷0.1、1、10μmol/L浓度组。检测细胞增殖率、细胞FN及COL-Ⅳ分泌水平,观察细胞微观结构变化,测定RAGE、SphK1、S1P和TGF-β蛋白表达量。结果马钱苷可有效抑制AGEs诱导的GMCs增殖,减少FN及COL-Ⅳ分泌,缓解细胞微观结构病变,下调RAGE、SphK1、S1P和TGF-β蛋白表达。结论马钱苷通过下调AGEs/RAGE/SphK1信号通路,缓解AGEs诱导的GMCs损伤,从而改善糖尿病肾病(DN)。

旋覆代赭汤不同煎煮工艺对胃肠道影响的比较研究

目的 通过考察旋覆代赭汤对小鼠胃排空、小肠推进和离体肠段张力的影响,比较不同煎煮工艺在作用上的一致性和差异性。方法 分别采用正常小鼠和阿托品造模小鼠,用营养性半固体糊加活性炭法观察旋覆代赭汤传统煎（CJ）、机器常压煎（JCJ）、机器高压煎（JGJ）3种煎煮方法对小鼠胃内容物残留率和小肠推进率的影响;分别采用正常大鼠和阿托品所致大鼠肠段张力实验,考察CJ、JCJ、JGJ 3种煎煮方法对大鼠十二指肠段张力的作用。结果 旋覆代赭汤3种煎煮方法对正常小鼠胃内残留率作用不明显,而CJ小剂量、JCJ及JGJ 2个剂量组均能显著增强正常小肠推进率（P〈0.05～0.01）,尤以JCJ大剂量组更为明显;但在阿托品抑制作用的基础上,CJ小剂量、JCJ和JGJ大剂量组能显著减少胃内残留率（P〈0.05～0.01）,CJ、JCJ和JGJ各剂量组显著增强小肠推进率（P〈0.05～0.01）,尤以CJ各剂量组和JGJ大剂量组更为明显;3种煎煮方法均能提高大鼠肠段张力增强率,在正常情况下以JGJ组更为显著（P〈0.01）,在受阿托品抑制作用下,JCJ和JGJ组与更为显著（P〈0.05～0.01）,但3种煎煮方法比较未见显著差异（P〉0.05）。结论 旋覆代赭汤具有协调胃肠功能的作用,JCJ和JGJ的作用相近或略优于CJ法,为目前临床代煎采用的JCJ法和JGJ法提供实验依据。

金振口服液治疗呼吸道合胞病毒感染引起咳嗽的作用机制研究

目的探讨金振口服液治疗呼吸道合胞病毒感染幼年豚鼠咳嗽的作用及其机制。方法选取幼年豚鼠,随机分为空白组、模型组、磷酸苯丙哌林组、金振口服液(1.3、2.6g/kg)组。除空白组外,每鼠用10^(6.29) TCID_(50) mL^(-1)滴度的呼吸道合胞病毒(RSV)溶液滴鼻造模,空白组给予等体积无病毒DMEM溶液,次日起各给药组连续给药7d。第8天用枸橼酸引咳法检测豚鼠5min内咳嗽次数与咳嗽潜伏期,计数肺泡灌洗液中白细胞总数,ELISA法检测肺泡灌洗液中TNF?α、IL-4、IL-13含量,HE染色进行肺组织学检查,免疫组织化学染色法检测支气管中神经生长因子(NGF)、P物质(SP)、神经肽受体1(NK-1)的表达,Western blot法检测肺组织中NGF、NK-1的表达。结果金振口服液能够抑制RSV感染导致的豚鼠咳嗽次数增多,下调肺泡灌洗液中白细胞总数及TNF?α、IL-4、IL-13的含量,改善肺组织的炎性浸润,降低支气管NGF、SP和NK-1及肺组织NGF和SP的表达。结论金振口服液能改善RSV感染引起的病毒性咳嗽,其机制可能与减少气道炎性反应,降低神经源性介质,调节咳嗽敏感性有关。

梓醇对AGEs刺激肾系膜细胞介导巨噬细胞极化的影响

目的探讨梓醇对晚期糖基化终末产物(AGEs)刺激肾系膜细胞介导巨噬细胞极化的影响。方法将巨噬细胞(RAW264.7)置于Transwell上层小室,肾系膜细胞(MMCs)于下层孔板进行体外共培养,设置模型组、0-BSA对照组、梓醇组(0.1、1.0、10.0μmol·L^(-1)),另设氨基胍组(1.0μmol·L^(-1))作为阳性对照。加入各药物预孵下层系膜细胞1 h后,用AGEs(100 mg·L^(-1))刺激,继续孵育23 h,采用ELISA法检测系膜细胞上清液中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的分泌水平;Western blot法检测巨噬细胞M1型标记蛋白i NOS、CD16/32、TNF-α、COX-2和M2型标记蛋白CD206、Arg-1的表达水平;流式细胞仪检测巨噬细胞i NOS与CD206蛋白表达百分率。结果 AGEs可提高系膜细胞MCP-1的分泌水平(P<0.01),上调巨噬细胞i NOS、TNF-α、CD16/32、COX-2蛋白表达(P<0.05,P<0.01),下调CD206和Arg-1蛋白表达;而梓醇(0.1、1.0、10.0μmol·L^(-1))预孵能降低系膜细胞MCP-1的分泌水平(P<0.01),下调i NOS、TNF-α、CD16/32、COX-2蛋白表达(P<0.05,P<0.01),上调CD206和Arg-1蛋白表达(P<0.05),并呈浓度依赖性。结论梓醇可通过调控AGEs刺激系膜细胞分泌MCP-1的水平,抑制巨噬细胞的M1型极化,并促进其向M2型极化,减轻炎症反应,缓解糖尿病肾损伤。

马钱苷对糖基化终末产物致肾系膜细胞内质网应激的保护作用机制

目的探讨山茱萸环烯醚萜苷特征性成分马钱苷对糖基化终末产物(AGEs)刺激肾小球系膜细胞(GMCs)内质网应激的保护作用及其机制。方法体外培养GMCs,并设对照组、模型组、马钱苷(0.1、1.0、10.0μmol/L)组,氨基胍(0.1、1.0、10.0μmol/L)组作为阳性对照。加入药物预孵1 h后,用AGEs(200 mg/L)刺激,24 h后采用MTS法检测马钱苷对GMCs增殖的影响;Western blotting法检测GMCs中糖基化终末产物受体(RAGE)、内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、抑制物阻抗性酯酶(IRE1)、X盒结合蛋白1(XBP1),炎症相关因子核转录因子-κB(NF-κB)、环氧合酶-2(COX-2)及前列腺素E_2(PGE_2)的表达。结果马钱苷能够抑制AGEs导致的GMCs增殖,下调RAGE蛋白的表达,改善GMCs亚细胞器损伤,降低内质网相关蛋白GRP78、IRE1的表达,减少XBP1蛋白分化,降低炎症相关蛋白NF-κB、COX-2表达,降低细胞上清中PGE2水平。结论马钱苷可改善AGEs致GMCs的内质网应激,减轻其引起的炎症反应及细胞器损伤,其作用机制与降低RAGE蛋白表达、抑制IRE1通路有关。

LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中6种独一味成分

目的:开发建立独一味药材中芹菜素、木犀草素、木犀草苷、绿原酸、毛蕊花糖苷和连翘酯苷B6种成分在大鼠血浆中的同步定量分析方法。方法:采用蛋白沉淀法进行样品前处理,选用安捷伦ZORBAX SB-C18(2.1mm×150mm i.d.,3.5μm)色谱柱及梯度洗脱法进行色谱分离,运用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术在多重反应监测(MRM)模式下进行样品测定,并从专属性、线性范围、准确度、精密度、回收率、介质效应和稳定性等方面对方法学进行了系统的验证。结果:在13min的分析时间内,能够实现对6种目标化合物的准确定量,方法学验证中的各项指标均符合生物样品分析的要求。结论:所建立的分析方法准确、灵敏、可靠,可用于研究独一味药材给药后相应成分在大鼠血浆中的暴露情况,为药材的质量分析和控制提供科学依据,也为该药材体内过程和效应机制的研究奠定了基础。